血清uMtCK、NSE、CYFRA21-1、Pro-GRP及LD檢測(cè)在肺癌診斷中的應(yīng)用及其與臨床病理分期的關(guān)系

謝春霞，田可港，徐淑華，張 磊，牟曉峰

青島市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東青島 266042

肺癌是目前世界上常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，起病較隱匿、惡性程度高、病情進(jìn)展快。早期發(fā)現(xiàn)和診斷對(duì)肺癌治療和預(yù)后具有重要意義[1-2]，可提高肺癌患者的生活質(zhì)量，延長(zhǎng)其生存期限[3]。腫瘤標(biāo)志物目前在腫瘤的早期預(yù)測(cè)與預(yù)后監(jiān)測(cè)等方面發(fā)揮著越來(lái)越突出的作用，因其檢測(cè)過(guò)程對(duì)患者創(chuàng)傷較小，已廣泛用于臨床[4]。尋找新的靈敏度和特異度更高的肺癌診斷標(biāo)志物，對(duì)提高肺癌的臨床診斷和治療水平有重要意義。本研究選取了廣泛型線粒體肌酸激酶(uMtCK)、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)、細(xì)胞角蛋白19片斷(CYFRA21-1)、胃泌素釋放肽前體(Pro-GRP)及乳酸脫氫酶(LD)這幾項(xiàng)標(biāo)志物進(jìn)行檢測(cè)，旨在探討上述指標(biāo)在肺癌診斷、病理分型及分期判斷中的價(jià)值。

1 資料與方法

1.1一般資料 將2018年3月至2019年2月在本院住院治療且有明確病理診斷的肺癌患者78例納入研究作為肺癌組；排除合并其他類(lèi)型腫瘤的患者，排除合并嚴(yán)重心腦血管疾病的患者；其中男47例、女31例，年齡38～70歲。另外，選取同期于本院治療的良性肺部結(jié)節(jié)患者20例作為肺部良性結(jié)節(jié)組，其中男12例、女8例，年齡32～68歲。兩組間性別、年齡等一般資料比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。納入研究者均對(duì)本研究知情同意，并簽署知情同意書(shū)。

1.2儀器與試劑 羅氏公司Cobas e602型電化學(xué)發(fā)光分析儀及配套NSE、CYFRA21-1、Pro-GRP檢測(cè)試劑盒；日立公司7600型生化分析儀及利德曼公司生產(chǎn)的配套LD檢測(cè)試劑盒；SEBIA全自動(dòng)電泳分析儀及配套的肌酸激酶(CK)同工酶電泳試劑盒。

1.3方法 于清晨抽取各組患者空腹靜脈血3～5 mL置入分離膠采血管，以3 500 r/min離心5 min，收集血清，使用電化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測(cè)NSE、CYFRA21-1、Pro-GRP水平；使用酶法檢測(cè)LD水平；采用瓊脂糖凝膠電泳法進(jìn)行CK同工酶電泳分析。正常參考值如下，NSE：0.0～16.3 ng/mL，CYFRA21-1：0.0～3.3 ng/mL，Pro-GRP：0.0～68.3 pg/mL，LD：91～240 U/L，CK同工酶電泳：健康者及非腫瘤患者均無(wú)uMtCK的檢出。結(jié)果大于臨界值視為陽(yáng)性，小于或等于臨界值則視為正常。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 本次研究的數(shù)據(jù)均采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS18.0進(jìn)行處理，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析；P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1兩組患者5項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)陽(yáng)性率的比較 肺癌組uMtCK、NSE及LD陽(yáng)性率明顯高于肺部良性結(jié)節(jié)組(P<0.05)；肺癌組CYFRA21-1及Pro-GRP陽(yáng)性率與肺部良性結(jié)節(jié)組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表1。

表1 兩組患者5項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)的陽(yáng)性率比較(%)

2.2不同組織類(lèi)型肺癌患者5項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)的陽(yáng)性率比較 小細(xì)胞肺癌組NSE和Pro-GRP陽(yáng)性率明顯高于非小細(xì)胞肺癌組(P<0.05)，而uMtCK、CYFRA21-1及LD陽(yáng)性率在兩組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表2。

表2 不同組織類(lèi)型肺癌患者5項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)的陽(yáng)性率比較(%)

2.3不同TNM分期肺癌患者5項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)陽(yáng)性率的比較 Ⅲ～Ⅳ期肺癌患者uMtCK、NSE、CYFRA21-1、及LD陽(yáng)性率明顯高于Ⅰ～Ⅱ期(P<0.05)，而兩組間Pro-GRP陽(yáng)性率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表3。

表3 5項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)在肺癌不同病理分期中的陽(yáng)性率比較(%)

2.4肺癌組中uMtCK與NSE、CYFRA21-1、Pro-GRP及LD的相關(guān)性分析 血清uMtCK與NSE、CYFRA21-1及LD呈正相關(guān)(r=0.424、0.488、0.721，P<0.05)，而uMtCK與Pro-GRP無(wú)相關(guān)性(r=0.117,P>0.05)。

2.5肺癌患者5項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)與臨床病理特征的相關(guān)性分析 5項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)與年齡(分為<55歲和≥55歲，前者秩序更高)無(wú)明顯相關(guān)性(P>0.05)。NSE及Pro-GRP與肺癌病理類(lèi)型(分為小細(xì)胞肺癌、鱗癌、腺癌)相關(guān)(r=0.570、0.653，P<0.05)。uMtCK、CYFRA21-1及LD與肺癌病理類(lèi)型無(wú)明顯相關(guān)性(P>0.05)。uMtCK、NSE、CYFRA21-1、Pro-GRP、LD均與TNM分期(分為Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期)相關(guān)(r=0.419、0.552、0.522、0.356、0.549，P<0.05)。

3 討 論

CK是由M、B兩種不同亞基組成的二聚體，在實(shí)際檢驗(yàn)過(guò)程中，時(shí)常出現(xiàn)CK-MB同工酶活性高于CK活性的現(xiàn)象，當(dāng)CK-MB同工酶活性高于CK活性的30%或50%以上時(shí)，除考慮CK-BB同工酶的存在外還要考慮uMtCK的干擾。uMtCK是一種低聚的線粒體CK[5]，存在于細(xì)胞線粒體膜上，當(dāng)線粒體崩解時(shí)，線粒體膜的小碎片進(jìn)入血液，作為巨分子酶的一種，它常常伴隨各種腫瘤出現(xiàn)，目前已有uMtCK在乳腺癌、前列腺癌患者血清中過(guò)表達(dá)的報(bào)道[6]。NSE屬于糖酵解酶類(lèi)，存在于惡性腫瘤中。CYFRA21-1屬于細(xì)胞角蛋白19的一部分，當(dāng)細(xì)胞凋亡時(shí)，該片段會(huì)釋放進(jìn)入血液循環(huán)，特別是在腫瘤細(xì)胞中，由于細(xì)胞降解水平的提升，會(huì)使大量的角蛋白可溶片段進(jìn)人血液循環(huán)，從而造成CYFRA21-1水平升高。Pro-GRP是從胃組織中分離出的一種肽類(lèi)物質(zhì)，其在血液中水平穩(wěn)定，近年來(lái)成為一種簡(jiǎn)單易測(cè)的腫瘤標(biāo)志物[7]。越來(lái)越多證據(jù)表明，ProGRP表達(dá)異常與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有密切的關(guān)系[8-9]。LD是一種糖酵解酶，在惡性腫瘤患者體內(nèi)，LD水平有升高表現(xiàn)。

本研究表明，肺癌患者中uMtCK、NSE及LD陽(yáng)性率均高于肺部良性結(jié)節(jié)組，表明血清uMtCK、NSE及LD的檢測(cè)對(duì)臨床篩查和鑒別診斷肺部良惡性疾病具有一定的參考價(jià)值，腫瘤患者出現(xiàn)uMtCK的原因可能是腫瘤組織細(xì)胞和線粒體膜受到嚴(yán)重破壞，或者細(xì)胞快速增殖分解，導(dǎo)致線粒體CK由腫瘤組織漏出，從而使血中uMtCK水平升高，肺癌組中CYFRA21-1及Pro-GRP陽(yáng)性率與肺部良性結(jié)節(jié)組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，原因可能是本研究的病例數(shù)偏少，尤其是肺部良性結(jié)節(jié)組的病例數(shù)較少，影響了統(tǒng)計(jì)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

相關(guān)研究顯示，NSE水平在小細(xì)胞肺癌中顯著升高，陽(yáng)性率在90%以上，是小細(xì)胞肺癌最為敏感、特異的腫瘤標(biāo)志物[10-12]。本研究顯示，NSE和Pro-GRP在小細(xì)胞肺癌中的陽(yáng)性率高達(dá)100.00%，說(shuō)明這2項(xiàng)指標(biāo)可能有助于區(qū)分小細(xì)胞肺癌與非小細(xì)胞肺癌[13]。CYFRA21-1在肺鱗癌中呈高表達(dá)[14]，本研究中CYFRA21-1陽(yáng)性率在小細(xì)胞肺癌組與非小細(xì)胞肺癌組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能與非小細(xì)胞肺癌組中鱗癌患者比例較少有關(guān)；uMtCK和LD陽(yáng)性率在兩組間比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，原因可能為uMtCK作為新型的腫瘤標(biāo)志物在良惡性腫瘤鑒別中與LD都有一定的價(jià)值，但對(duì)于不同病理類(lèi)型的腫瘤診斷尚缺乏特異性，另一方面，本研究晚期肺癌患者相對(duì)較多，腫瘤標(biāo)志物在不同病理類(lèi)型中的表達(dá)水平均較高，因此差異較小。

血清檢測(cè)指標(biāo)對(duì)肺癌臨床分期有一定價(jià)值，研究發(fā)現(xiàn)，NSE與肺癌腦轉(zhuǎn)移及預(yù)后有關(guān)[15]；血清CYFRA21-1水平升高與腫瘤大小、疾病分期有關(guān)，本研究結(jié)果顯示Ⅲ～Ⅳ期肺癌患者血清uMtCK、NSE、CYFRA21-1及LD陽(yáng)性率均高于Ⅰ～Ⅱ期，表明其與腫瘤浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移等病情進(jìn)展情況有關(guān)，與之前的報(bào)道結(jié)論一致，血清uMtCK與NSE、CYFRA21-1及LD均呈正相關(guān)，分析原因可能是uMtCK水平越高，腫瘤細(xì)胞能量代謝越活躍，其增殖裂解的速度也就越快，從而使更多的NSE、CYFRA21-1及LD進(jìn)入血液中。另外肺癌患者NSE與Pro-GRP的檢測(cè)結(jié)果與肺癌病例類(lèi)型相關(guān)。本研究還顯示，5項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)水平隨著肺癌患者TNM分期的升高而異常升高，提示這5項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)水平與肺癌的病情嚴(yán)重程度和是否發(fā)生轉(zhuǎn)移具有一定的相關(guān)性，臨床可以通過(guò)檢測(cè)這些血清腫瘤標(biāo)志物水平從而有助于了解腫瘤的大小、轉(zhuǎn)移情況等。由于本研究納入的臨床病例有限，對(duì)uMtCK在肺癌患者預(yù)后判斷及分子病理機(jī)制中的作用未能涉及，這也將是本課題組下一步研究的重點(diǎn)。

綜上所述，這5項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物在肺癌篩查中的作用各有側(cè)重，聯(lián)合檢測(cè)可輔助肺癌病理類(lèi)型及TNM分期的判斷，為臨床診斷和治療提供依據(jù)。