石仙桃組織培養快速繁殖技術研究*

蔡梅玲，李志良，蔡煜熙，張 鳳，朱昔嬌，黃 浩，饒衛芳，唐國濤

（1.梅州市農林科學院林業研究所，廣東 梅州 514011；2.深圳市綠雅生態發展有限公司，廣東 深圳 518000）

石仙桃（Pholidota chinensis Lindl.）又名石上蓮、石橄欖（廣州）、石穿盤（廣西）、石萸肉（福建）等，是蘭科石仙桃屬植物，主要分布在我國南方的廣東、廣西、云南等地。石仙桃是比較傳統的藥食同源植物，在我國南方地區，特別是在廣東、福建等地使用廣泛，它具有抗衰老、抗腫瘤、抗炎、增強免疫機能等功用。石仙桃植株的假鱗莖碩大似桃，青翠猶玉，葉色鮮亮，是一種雅致的室內觀賞植物；它性味甘涼，能夠治療人體多種疾病，具有清熱舒緩、止咳潤肺、消腫祛濕等功效，主要用來治療病毒引起的發燒咳嗽，對咳血、吐血有較為明顯的治療效果，還能夠退燒消腫。

石仙桃作為藥食同源植物，廣泛應用于民間日常餐飲（煲湯），具有較大的市場需求量。由于石仙桃一般都是野生資源，過度采伐導致石仙桃資源嚴重短缺。我們對石仙桃的組織培養離體快繁技術進行了詳細研究，完善了石仙桃離體快繁技術體系，為解決目前石仙桃資源短缺問題提供了可行的替代途徑。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

以石仙桃的假鱗莖作為誘導材料，石仙桃植株采自梅州市國有梅南林場，采集的石仙桃健壯。假鱗莖使用自來水清洗干凈后先用5%洗衣粉水溶液浸泡3min，其間不斷地搖動，再用過濾水清洗干凈，然后用0.1%升汞溶液在超凈工作臺上消毒8-10min，接著用無菌水沖洗干凈，再用消毒過的濾紙吸干表面水分。消毒后的假鱗莖使用接種刀在操作臺上剝去包裹的外層皮，露出新鮮組織，分切成莖段后將其水平放入到培養皿中進行養殖。

1.2 試驗方法

1.2.1 試驗方法為外部植物體誘導

該方法主要以MS母液為基本培養條件，培養基中另外添加20/L香蕉果泥，同時添加植物生長調節劑 6-BA 0.5，1.0，2.0mg/L； 生 長 素 NAA 0.1mg/L；IBA 0.5，1.0mg/L；2-4-D 0.1，0.5mg/L。對比研究發現，同一種植物使用生長調節劑的濃度能夠對植物萌芽產生誘導。經過50d誘導試驗后，對植物萌芽數量和接種數量進行統計，其中誘導率=萌芽數/接種數×100%，增殖率=增殖芽數/接種數。

1.2.2 石仙桃植物芽增殖試驗

根據上述試驗結果選擇較為合適的石仙桃生長調節劑，保證生長調節劑的濃度以及種類符合石仙桃的培養需求，才能夠開展繼代培養，誘導叢芽不斷增殖。增殖培養以30d為一繼代培養周期，以MS為基本母液分別添加生長調節劑 6-BA 1.0，1.5，2.0mg/L 和 IBA 0.5，1.0mg/L。一個繼代培養周期結束后記錄增殖的芽苗數量，并計算增殖率。

1.2.3 生根培養試驗（經上述繼代培養的材料）

選擇將已伸長至2～3cm的芽。這種情況下就可以對石仙桃幼芽進行轉移，需要準備三種不同濃度的MS母液，之后在將幼芽轉移到不同濃度的母液中進行生根培養，還要將其中兩種母液濃度中的元素調節到1/4MS或1/2MS。全部試驗培養基中另外添加植物生長調節劑IBA 1.0mg/L 和 NAA 0.1，0.5mg/L，1.0mg/L，還要在培養基中添加活性炭1.5L。試驗培養40d后開始記錄石仙桃的生根株數以及根數量，計算生根率。生根率=生根株數/接種數×100%。

上述所有試驗都需要添加卡拉膠5g/L，蔗糖30g/L，香蕉果泥20/L，培養基的pH值調節至5.8。培養室溫度要達標，使用空調，調節至25℃左右，光照使用T型管，光強度1500Lux左右，每天控制光照時間10h。

1.2.4 生根苗移栽

上述生根瓶苗經室外常溫煉苗后，取出生根植株，將根部培養基質清洗干凈，放于陰涼處晾干后種植到準備好的容器中。種植基質使用透氣性較好的營養土，種完后要在幼苗根部噴灑定根水，并保持種植區域陰涼，通過覆膜來保持土壤濕度，精心管理時間要持續1個月左右，之后就可以轉為常規管理。

2 結果與分析

2.1 外植體誘導培養

兩周左右的初始試驗培養，接種的外植體顏色逐步轉綠并有少量側芽開始萌動。經一個月左右試驗培養后，培養基中添加了植物生長調節劑IBA的大部分外植體明顯萌芽并增殖生長，而培養基中添加了植物生長調節劑NAA和2-4-D的外部植物體只有60%的概率生成萌芽并實現增殖，還有部分植物體顏色會出現變色的情況。上述試驗結果表明三種濃度不同的生長調節劑中，只有IBA符合石仙桃芽苗的生長需求，并且能夠誘導石仙桃的生長。另外，表1的試驗結果表明，添加了濃度為1.0mg/L或2.0mg/L細胞分裂素6-BA的誘導培養基，能夠促進叢生芽的增殖以及誘導石仙桃幼苗的生長。

表1 外植體誘導試驗培養結果

2.2 芽苗增殖試驗培養

從表2的芽苗增殖試驗結果可以看出，添加了植物生長調節劑6-BA濃度為1.0mg/L或1.5mg/L的試驗培養條件，芽苗的增殖倍數可達到4.3～5.5，比外植體誘導試驗培養階段的增殖率高，但當植物生長調節劑6-BA濃度達到2.0mg/L時，分化出來的芽苗出現數量多而細密且愈傷組織明顯增多的現象，說明該培養條件不利于芽苗的增殖繼代培養。培養基中植物生長調節劑IBA的使用濃度以0.5mg/L為宜，芽苗生長較粗且壯，也可達到4～5倍的增殖率。因此，芽苗增殖試驗培養結果表明添加6-BA 1.5mg/L和IBA 0.5mg/L的培養基適合于石仙桃芽苗的繼代和增殖培養。

表2 不定芽的增殖培養結果

2.3 生根培養試驗

生根培養試驗結果如表3所示。石仙桃在試驗環境中容易生根，三種不同環境的培養試驗條件下，苗木生根率可達到92%以上，其中以大量元素減少的1/2 MS基本培養中添加植物生長調節劑IBA 1.0mg/L和NAA 0.5mg/L的處理試驗生根率高達96%。培養試驗結果還表明，適當減少培養基母液的大量元素用量有利于促進石仙桃芽苗生根和小苗生長，提高試驗培養基中植物生長調節劑NAA的濃度時分化出的新根較粗大、質脆且易折斷。

表3 誘導植株生根結果

2.4 出瓶移栽

經10-15天室外幼苗培養之后，將已經生根的石仙桃幼苗從培養器具中取出，并用清水沖洗干凈并洗去根部的培養基，放于陰涼處適當晾干表面的水分，分別移栽到預先準備好的種植袋或床。移栽基質為市場購買的透氣營養土，定植后淋定根水、遮陰，遮光度75%-90%，覆膜保濕一周左右，然后每天定時揭膜透氣，每天逐步增加透氣時間，經遮陰管理一個月后轉入常規管理。通過噴淋，控制栽培環境濕度大于50%。小苗在移栽10-15天后開始生長，總體移栽成活率達到85%以上，未出現病蟲害。

3 結論

（1）食藥兩用植物石仙桃組織培養主要是以MS作為主要培養基，需要配合植物生長調節劑一同使用，植物生長調節劑的種類和濃度為6-BA 1.5mg/L和IBA 0.5mg/L，在這種試驗環境下得出結論，使用MS作為石仙桃主要培養基能夠有效減少幼芽組織受傷，并且能夠促進芽苗繁殖幾率，保證石仙桃幼苗較為健康。該試驗對幼苗之后的生根試驗、移栽管理都會創造較為有利的生長條件。試驗培養有利于生根的培養基母液大量元素減半的1/2MS，并且要配合生長調節劑IBA 1.5mg/L和NAA 0.6mg/L，這樣的培養環境下，能夠有效促進苗木的分化速度，保證苗木生長的質量，可提高出瓶移栽后的苗木成活率。

（2）石仙桃是蘭科石仙桃屬植物，不僅有極高的觀賞價值，還有相當重要的食用和藥用價值。它含有豐富的維生素、蛋白質以及碳水化合物，還有磷、鐵等微量元素，這些對我們身體的各個方面都有著極大的好處。通常大家都會選擇將石仙桃拿來煲湯喝，現如今石仙桃在市場上備受追捧，素有“仙桃”之稱。

（3）資料顯示，有關石仙桃的研究多集中在其藥理、藥效或有效成分分析方面，對于其苗木繁育及栽培技術的研究較少。本篇文章對石仙桃組織培養繁殖試驗分析得出，使用植物繁殖培養技術能夠滿足石仙桃的生長需求，加快石仙桃的成功繁殖幾率。