不同國標法對嬰幼兒配方乳粉中泛酸含量的測定

◎ 趙 平，郭瑩瑩，王玉芝，王哲明，楊 光

（黑龍江省質量監督檢測研究院，黑龍江 哈爾濱 150028）

嬰幼兒食品是各國非常重視的一類食品。嬰幼兒對食品營養要求較高，所以為了滿足需求，需對食品進行營養強化。但嬰幼兒機體生命活動較為敏感，過高或過低的營養強化物質會影響其身體健康，添加量必須在嬰幼兒能夠適應的范圍內，故應重視對營養強化劑的檢測監控。泛酸是在20世紀90年代首次從酵母中分離得到，在生物界中廣泛存在，又叫做遍多酸，是水溶性維生素B5。泛酸具有酸性，易溶于乙醇和水，不溶于脂溶劑，在酸性環境中易分解，在中性環境中較為穩定，是嬰幼兒乳粉中添加的重要營養強化劑[1-4]。《食品安全國家標準嬰兒配方食品》（GB 10765—2010）[5]與《食品安全國家標準較大嬰兒和幼兒配方食品》（GB 10767—2010）[6]中對泛酸的添加量都有嚴格的規定。針對泛酸含量的測定，主要是測定游離泛酸和總泛酸兩種，泛酸的檢測方法主要有微生物法、高效液相色譜法、熱射流液相色譜-質譜法、氨氣敏電極法及高效毛細管區帶電泳法等[2]。嬰幼兒配方乳粉中泛酸含量的測定方法主要是采用國標法微生物法和高效液相色譜法，目前主要采用微生物法測定嬰幼兒配方乳粉中的泛酸含量。

由于2018年，食品安全國家標準勘誤，《食品安全國家標準食品中泛酸的測定》（GB 5009.210—2016）[7]在勘誤中替代了《食品安全國家標準嬰幼兒食品和乳品中泛酸的測定》（GB 5413.17—2010）[8]，而新舊兩版標準中樣品的提取方法有很大差別，對嬰幼兒配方乳粉中泛酸含量的檢測帶來一定的影響。本文主要通過精密度實驗與加標回收實驗來考察并比較新舊兩版標準中不同提取方法對嬰幼兒配方乳粉中泛酸含量測定的影響。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

不同品牌的5種嬰幼兒配方乳粉，購自超市。

KWIKSTIK植物乳桿菌（美國Microbiologics公司）、泛酸鈣標準品（純度99.0%，北京曼哈格生物科技有限公司）、乳酸桿菌瓊脂（美國BD公司）、乳酸桿菌肉湯（美國BD公司）泛酸測定培養基（北京陸橋技術有限責任公司）。

1.2 儀器設備

KQ5200DE型超聲儀（昆山市超聲儀器有限公司）、MLS-3780型高壓蒸汽滅菌器（日本三洋公司）、PB-10型pH計（德國賽多利斯公司）、2266型潔凈工作臺（上海拜艾斯凈化設備有限公司）、DH6000Ⅱ型電熱恒溫培養箱（天津泰斯特儀器有限公司）、T6新世紀紫外分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司）。

1.3 方法

按《食品安全國家標準嬰幼兒食品和乳品中泛酸的測定》（GB 5413.17—2010）第一法微生物法與《食品安全國家標準食品中泛酸的測定》（GB 5009.210—2016）第一法微生物法進行實驗，并分別測定兩種方法的相對標準偏差RSD與回收率。

1.3.1 菌液的制備

植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum）ATCC 8014轉入乳酸桿菌肉湯培養基中，36 ℃培養24 h；再轉接至乳酸桿菌瓊脂培養基中，36 ℃培養24 h。培養好的乳酸桿菌瓊脂培養基培養物作為貯備菌種。貯備菌種接種乳酸桿菌肉湯培養基，36 ℃培養24 h。在無菌條件下離心該培養液，棄去上清液。用生理鹽水振蕩洗滌菌體，離心，棄去上清液，再用生理鹽水振蕩清洗，重復操作。再加生理鹽水，混勻，制成測試菌液。

1.3.2 泛酸的提取

按《食品安全國家標準 嬰幼兒食品和乳品中泛酸的測定》（GB 5413.17—2010）第一法微生物法中試樣的處理方法采用121 ℃水解15 min與《食品安全國家標準食品中泛酸的測定》（GB 5009.210—2016）第一法微生物法試樣提取中的直接提取法超聲提取法，分別對5種不同品牌嬰幼兒配方乳粉進行泛酸提取，并稀釋至相應濃度。

1.3.3 標準曲線及試樣管的制作

分別按兩版標準中方法進行，加入蒸餾水、標準溶液（試樣）和培養基于試管中，一式3份。

1.3.4 滅菌

將所有測定管塞好試管塞，滅菌。GB 5413.17—2010第一法為121 ℃，滅菌5min，GB 5009.210—2016第一法為121 ℃，滅菌15 min。

1.3.5 接種及培養

分別按兩版標準進行實驗，測定系列管冷卻至室溫后，在無菌操作條件下向每支測定管滴加測試菌液50 μL。塞好試管塞，置于37 ℃恒溫培養箱中培養20 h。

1.3.6 測定

分別按兩版標準進行測定，在波長550 nm條件下讀取吸光度值。

1.3.7 結果計算分別按兩版標準繪制標準曲線。按公式計算結果。

2 結果與分析

2.1 精密度實驗

實驗以不同品牌的5種嬰幼兒配方乳粉作為實驗樣品，每個樣品做7個平行試驗。分別用新舊兩版標準的方法進行實驗。結果見表1與表2。

表1 GB 5413.17—2010第一法精密度分析結果表

表2 GB 5009.210—2016第一法精密度分析結果表

從表1結果中可以得出，利用GB 5413.17—2010第一法檢測的5種不同品牌的嬰幼兒配方乳粉中泛酸含量，每個樣品的7個平行數值較接近，RSD值為1.06%～2.75%，說明方法精密度較高；利用GB 5009.210—2016第一法檢測的5中不同品牌的嬰幼兒配方乳粉中泛酸含量，每個樣品的7個平行數值較接近，RSD值為1.37%～2.84%，說明方法精密度同樣較高。

2.2 加標回收實驗

實驗以某一品牌嬰幼兒配方乳粉作為實驗樣品，加標按GB 5413.17—2010第一法與GB 5009.210—2016第一法方法進行實驗，本底樣品與加標樣品分別做7個平行實驗，結果見表3與表4。

表3 GB 5413.17—2010第一法加標回收結果表

表4 GB 5009.210—2016第一法加標回收結果表

從表3與表4結果得出兩種方法的平均回收率分別為98.3%與97.0%，相對標準偏差分別為3.54%與2.51%，回收率穩定符合回收率的要求，方法精密度高。

3 結論

從結果對比中可以看出，兩種方法得出的結果不一致，利用GB 5009.210—2016第一法檢測的泛酸含量要高于GB 5413.17—2010第一法檢測的泛酸含量，回收率都很穩定，符合要求，且精密度都較高。比較兩版標準的差異，只是樣品的前處理上有較大差異，在GB 5413.17—2010標準中泛酸的提取是通過121 ℃水解、調節pH值為4.5、過濾來實現的，在加熱水解和調節pH酸性時可能造成游離泛酸的分解而導致最終總泛酸結果有差異；而GB 5009.210—2016標準中泛酸的提取是通過超聲提取來實現的，省去了調節pH值、過濾等步驟，樣液較渾濁，會影響結果，可能會造成結果偏高，故建議采用過濾的方法除去背景渾濁，再進行實驗。

本實驗通過對新舊兩版標準檢測嬰幼兒配方乳粉中泛酸含量結果精密度與加標回收率進行比較，兩版標準只是提取方法有所不同，但兩種方法的精密度都很高、加標回收率也很穩定能夠達到要求。本文通過兩種國標方法的數據對比，希望能夠為嬰幼兒配方乳粉生產企業與檢驗檢測機構在嬰幼兒配方乳粉的泛酸含量測定方面提供一些數據支持。