不同國(guó)標(biāo)法對(duì)嬰幼兒配方乳粉中泛酸含量的測(cè)定

◎ 趙 平，郭瑩瑩，王玉芝，王哲明，楊 光

（黑龍江省質(zhì)量監(jiān)督檢測(cè)研究院，黑龍江 哈爾濱 150028）

嬰幼兒食品是各國(guó)非常重視的一類(lèi)食品。嬰幼兒對(duì)食品營(yíng)養(yǎng)要求較高，所以為了滿(mǎn)足需求，需對(duì)食品進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化。但嬰幼兒機(jī)體生命活動(dòng)較為敏感，過(guò)高或過(guò)低的營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化物質(zhì)會(huì)影響其身體健康，添加量必須在嬰幼兒能夠適應(yīng)的范圍內(nèi)，故應(yīng)重視對(duì)營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑的檢測(cè)監(jiān)控。泛酸是在20世紀(jì)90年代首次從酵母中分離得到，在生物界中廣泛存在，又叫做遍多酸，是水溶性維生素B5。泛酸具有酸性，易溶于乙醇和水，不溶于脂溶劑，在酸性環(huán)境中易分解，在中性環(huán)境中較為穩(wěn)定，是嬰幼兒乳粉中添加的重要營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑[1-4]。《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)嬰兒配方食品》（GB 10765—2010）[5]與《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)較大嬰兒和幼兒配方食品》（GB 10767—2010）[6]中對(duì)泛酸的添加量都有嚴(yán)格的規(guī)定。針對(duì)泛酸含量的測(cè)定，主要是測(cè)定游離泛酸和總泛酸兩種，泛酸的檢測(cè)方法主要有微生物法、高效液相色譜法、熱射流液相色譜-質(zhì)譜法、氨氣敏電極法及高效毛細(xì)管區(qū)帶電泳法等[2]。嬰幼兒配方乳粉中泛酸含量的測(cè)定方法主要是采用國(guó)標(biāo)法微生物法和高效液相色譜法，目前主要采用微生物法測(cè)定嬰幼兒配方乳粉中的泛酸含量。

由于2018年，食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)勘誤，《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中泛酸的測(cè)定》（GB 5009.210—2016）[7]在勘誤中替代了《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)嬰幼兒食品和乳品中泛酸的測(cè)定》（GB 5413.17—2010）[8]，而新舊兩版標(biāo)準(zhǔn)中樣品的提取方法有很大差別，對(duì)嬰幼兒配方乳粉中泛酸含量的檢測(cè)帶來(lái)一定的影響。本文主要通過(guò)精密度實(shí)驗(yàn)與加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)來(lái)考察并比較新舊兩版標(biāo)準(zhǔn)中不同提取方法對(duì)嬰幼兒配方乳粉中泛酸含量測(cè)定的影響。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

不同品牌的5種嬰幼兒配方乳粉，購(gòu)自超市。

KWIKSTIK植物乳桿菌（美國(guó)Microbiologics公司）、泛酸鈣標(biāo)準(zhǔn)品（純度99.0%，北京曼哈格生物科技有限公司）、乳酸桿菌瓊脂（美國(guó)BD公司）、乳酸桿菌肉湯（美國(guó)BD公司）泛酸測(cè)定培養(yǎng)基（北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司）。

1.2 儀器設(shè)備

KQ5200DE型超聲儀（昆山市超聲儀器有限公司）、MLS-3780型高壓蒸汽滅菌器（日本三洋公司）、PB-10型pH計(jì)（德國(guó)賽多利斯公司）、2266型潔凈工作臺(tái)（上海拜艾斯凈化設(shè)備有限公司）、DH6000Ⅱ型電熱恒溫培養(yǎng)箱（天津泰斯特儀器有限公司）、T6新世紀(jì)紫外分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）。

1.3 方法

按《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)嬰幼兒食品和乳品中泛酸的測(cè)定》（GB 5413.17—2010）第一法微生物法與《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中泛酸的測(cè)定》（GB 5009.210—2016）第一法微生物法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，并分別測(cè)定兩種方法的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD與回收率。

1.3.1 菌液的制備

植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum）ATCC 8014轉(zhuǎn)入乳酸桿菌肉湯培養(yǎng)基中，36 ℃培養(yǎng)24 h；再轉(zhuǎn)接至乳酸桿菌瓊脂培養(yǎng)基中，36 ℃培養(yǎng)24 h。培養(yǎng)好的乳酸桿菌瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)物作為貯備菌種。貯備菌種接種乳酸桿菌肉湯培養(yǎng)基，36 ℃培養(yǎng)24 h。在無(wú)菌條件下離心該培養(yǎng)液，棄去上清液。用生理鹽水振蕩洗滌菌體，離心，棄去上清液，再用生理鹽水振蕩清洗，重復(fù)操作。再加生理鹽水，混勻，制成測(cè)試菌液。

1.3.2 泛酸的提取

按《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 嬰幼兒食品和乳品中泛酸的測(cè)定》（GB 5413.17—2010）第一法微生物法中試樣的處理方法采用121 ℃水解15 min與《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中泛酸的測(cè)定》（GB 5009.210—2016）第一法微生物法試樣提取中的直接提取法超聲提取法，分別對(duì)5種不同品牌嬰幼兒配方乳粉進(jìn)行泛酸提取，并稀釋至相應(yīng)濃度。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線及試樣管的制作

分別按兩版標(biāo)準(zhǔn)中方法進(jìn)行，加入蒸餾水、標(biāo)準(zhǔn)溶液（試樣）和培養(yǎng)基于試管中，一式3份。

1.3.4 滅菌

將所有測(cè)定管塞好試管塞，滅菌。GB 5413.17—2010第一法為121 ℃，滅菌5min，GB 5009.210—2016第一法為121 ℃，滅菌15 min。

1.3.5 接種及培養(yǎng)

分別按兩版標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，測(cè)定系列管冷卻至室溫后，在無(wú)菌操作條件下向每支測(cè)定管滴加測(cè)試菌液50 μL。塞好試管塞，置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)20 h。

1.3.6 測(cè)定

分別按兩版標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行測(cè)定，在波長(zhǎng)550 nm條件下讀取吸光度值。

1.3.7 結(jié)果計(jì)算分別按兩版標(biāo)準(zhǔn)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。按公式計(jì)算結(jié)果。

2 結(jié)果與分析

2.1 精密度實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)以不同品牌的5種嬰幼兒配方乳粉作為實(shí)驗(yàn)樣品，每個(gè)樣品做7個(gè)平行試驗(yàn)。分別用新舊兩版標(biāo)準(zhǔn)的方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。結(jié)果見(jiàn)表1與表2。

表1 GB 5413.17—2010第一法精密度分析結(jié)果表

表2 GB 5009.210—2016第一法精密度分析結(jié)果表

從表1結(jié)果中可以得出，利用GB 5413.17—2010第一法檢測(cè)的5種不同品牌的嬰幼兒配方乳粉中泛酸含量，每個(gè)樣品的7個(gè)平行數(shù)值較接近，RSD值為1.06%～2.75%，說(shuō)明方法精密度較高；利用GB 5009.210—2016第一法檢測(cè)的5中不同品牌的嬰幼兒配方乳粉中泛酸含量，每個(gè)樣品的7個(gè)平行數(shù)值較接近，RSD值為1.37%～2.84%，說(shuō)明方法精密度同樣較高。

2.2 加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)以某一品牌嬰幼兒配方乳粉作為實(shí)驗(yàn)樣品，加標(biāo)按GB 5413.17—2010第一法與GB 5009.210—2016第一法方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，本底樣品與加標(biāo)樣品分別做7個(gè)平行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表3與表4。

表3 GB 5413.17—2010第一法加標(biāo)回收結(jié)果表

表4 GB 5009.210—2016第一法加標(biāo)回收結(jié)果表

從表3與表4結(jié)果得出兩種方法的平均回收率分別為98.3%與97.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為3.54%與2.51%，回收率穩(wěn)定符合回收率的要求，方法精密度高。

3 結(jié)論

從結(jié)果對(duì)比中可以看出，兩種方法得出的結(jié)果不一致，利用GB 5009.210—2016第一法檢測(cè)的泛酸含量要高于GB 5413.17—2010第一法檢測(cè)的泛酸含量，回收率都很穩(wěn)定，符合要求，且精密度都較高。比較兩版標(biāo)準(zhǔn)的差異，只是樣品的前處理上有較大差異，在GB 5413.17—2010標(biāo)準(zhǔn)中泛酸的提取是通過(guò)121 ℃水解、調(diào)節(jié)pH值為4.5、過(guò)濾來(lái)實(shí)現(xiàn)的，在加熱水解和調(diào)節(jié)pH酸性時(shí)可能造成游離泛酸的分解而導(dǎo)致最終總泛酸結(jié)果有差異；而GB 5009.210—2016標(biāo)準(zhǔn)中泛酸的提取是通過(guò)超聲提取來(lái)實(shí)現(xiàn)的，省去了調(diào)節(jié)pH值、過(guò)濾等步驟，樣液較渾濁，會(huì)影響結(jié)果，可能會(huì)造成結(jié)果偏高，故建議采用過(guò)濾的方法除去背景渾濁，再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)新舊兩版標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)嬰幼兒配方乳粉中泛酸含量結(jié)果精密度與加標(biāo)回收率進(jìn)行比較，兩版標(biāo)準(zhǔn)只是提取方法有所不同，但兩種方法的精密度都很高、加標(biāo)回收率也很穩(wěn)定能夠達(dá)到要求。本文通過(guò)兩種國(guó)標(biāo)方法的數(shù)據(jù)對(duì)比，希望能夠?yàn)閶胗變号浞饺榉凵a(chǎn)企業(yè)與檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)在嬰幼兒配方乳粉的泛酸含量測(cè)定方面提供一些數(shù)據(jù)支持。