高效液相色譜法測定食品中蘇丹紅的方法優化

◎ 陳偉潔，陸溶艷，聶 丹，莫志斌

（梧州海關，廣西 梧州 543002）

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

試驗用水為超純水。辣椒粉、辣椒醬、辣椒油和臘腸樣品，均購自當地超市。

100 μg·mL-1蘇丹紅Ⅰ標準溶液、100 μg·mL-1蘇丹紅Ⅱ標準溶液、100 μg·mL-1蘇丹紅Ⅲ標準溶液，20 μg·mL-1蘇丹紅Ⅳ標準溶液，均購于農業農村部環境保護科研監測所。甲醇、乙腈、正己烷、二氯甲烷，均為色譜純，購自Fisher Chemical 公司。

1.2 儀器與設備

LC-20A 型高效液相色譜儀（島津公司），配SPD-M20A 型光電二極管陣列檢測器和LCsolution 工作站；SB25-120 型超聲波清洗機（寧波新芝生物科技股份有限公司）；TDL-40B 型離心機（上海安亭科學儀器廠）；I-8-UV 型超純水機（賽多利斯）；EFAA-AC-02型氮吹儀（上海安譜實驗科技股份有限公司）；渦旋儀；ME204 型電子天平（梅特勒-托利多）；蘇丹紅專用固相萃取柱（上海安譜實驗科技股份有限公司）。

1.3 標準溶液的制備

準確移取蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ標準品各1 mL，準確移取蘇丹紅Ⅳ標準品5.0 mL，用乙腈定容至10 mL，配成濃度10 μg·mL-1的蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ標準溶液。

1.4 高效液相色譜工作條件

采 用SHIMADZA VP-ODS 色 譜 柱（4.6 mm×250 mm，4.6 μm），柱溫為35 ℃；進樣量為20 μL；流動相為乙腈∶水（95%∶5%）；流速為1 mL·min-1；波長為500 nm。

1.5 樣品前處理

1.5.1 辣椒粉

稱取1 g 樣品于50 mL 離心管中，加入20 mL 正己烷，超聲5 min，4 000 r·min-1離心5 min，取上清液至平底蒸發瓶中，重復加入10 mL 正己烷超聲離心至洗出液為無色，合并上清液，氮吹濃縮至5 mL 以下，待過柱凈化。

1.5.2 辣椒油稱取0.5 g 油樣，加入3 mL 正己烷渦旋混合震蕩溶解10 s，待過柱凈化。

1.5.3 辣椒醬

稱取1 g 樣品于50 mL 離心管中，加入10 mL 正己烷，渦旋2 min，4 000 r·min-1離心5 min，取上清液至平底蒸發瓶中，用重復加入10 mL 正己烷渦旋提取至洗出液為無色，合并上清液，氮吹濃縮至5 mL 以下，待過柱凈化。

1.5.4 臘腸

稱取1 g 粉碎樣品于50 mL 離心管中，加入10 mL正己烷渦旋混合振蕩5 min，4 000 r·min-1離心5 min，取上清液至平底蒸發瓶中，重復加入10 mL 正己烷渦旋提取至洗出液為無色，合并上清液，氮吹濃縮至5 mL以下，待過柱凈化。

1.5.5 SPE 操作過程

依次用5 mL 二氯甲烷，5 mL 正己烷活化柱子；將待凈化樣液轉移到柱子中，再用2 mL 正己烷潤洗樣品瓶，潤洗液一并轉移至柱子中；用5 mL 正己烷淋洗柱子，用5 mL 二氯甲烷洗脫并收集，將收集液在40 ℃下氮吹近干，用1 mL 乙腈定容，超聲1 min，再渦旋混合10 s，過0.45 μm 有機濾膜，待上機分析。

2 結果與討論

2.1 檢測波長的選擇

分別取蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ標準溶液于180 ～800 nm 波長范圍內進行掃描，結果表明蘇丹紅Ⅰ在波長478 nm 處有最大吸收峰，蘇丹紅Ⅱ在波長485 nm 處有最大吸收峰，蘇紅Ⅲ在波長506 nm 處有最大吸收峰，蘇丹紅Ⅳ在波長510 nm 處有最大吸收峰，進行綜合考慮，選擇500 nm 作為試驗的檢測波長[4]。

2.2 標準曲線與檢出限

將蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ標準溶液用乙腈依次稀釋成0.1 μg·mL-1，0.2 μg·mL-1，0.4 μg·mL-1，0.8 μg·mL-1，1.6 μg·mL-1和2.4 μg·mL-1的混合標準溶液系列，在儀器工作條件下測定，以蘇丹紅質量濃度為橫坐標，其對應的色譜峰面積為縱坐標繪制標準曲線，線性范圍為0.1 ～2.4 μg·mL-1，線性回歸方程和相關系數見表1。以3 倍信噪比計算方法的檢出限（3S/N），結果見表1。

表1 蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的線性回歸方程、相關系數和檢出限表

2.3 精密度試驗

按照儀器工作條件，對0.8 μg·mL-1的蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ混合標準溶液進行6 次重復測定，以測定值的相對標準偏差（RSD）計算方法精密度，蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的RSD分別為1.7%、2.3%、2.6%、1.9%，具體結果見表2。

2.4 回收試驗

取有代表性的4 種陰性食品類樣品，按照《實驗室質量控制規范食品理化檢測》（GB 27404—2008）標 準 規 定，分 別 添 加0.4 μg·mL-1、0.8 μg·mL-1、1.6 μg·mL-1濃度水平的蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ標準溶液，每個濃度水平進樣3 次，取平均值計算回收率，用于驗證方法的準確性，試驗結果見表3。

由表3 可知，4 種食品的回收率為87.5%～98.1%。

2.5 重現性試驗

以辣椒粉為基底，添加0.4 μg·mL-1的蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ混合標準溶液，按照試驗方法進行測定，連續重復進樣6 次，計算測定值的RSD，蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的RSD分別為2.4%、1.5%、2.0%和2.2%，說明該方法具有良好的重現性，見表4。

表2 精密度試驗結果表

表3 回收率試驗結果表

表4 以辣椒粉為基底的重現性試驗結果表

3 結論

本試驗對高效液相色譜法檢測蘇丹紅的方法進行了優化，優化后的方法采用乙腈和水按95%∶5%的比例洗脫，大大縮短了出峰時間，且峰型良好；用SPE 小柱代替國標中自制的中性氧化鋁小柱，縮短了前處理時間，凈化效果顯著且回收率有所提高；優化后的方法具有靈敏度高、精密度好，重現性高和易于操作的優點[5]，適用于食品中蘇丹紅含量的日常檢測。