車前草水煎劑對SD大鼠腎損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究*

慕瑩瑩 鄔朋格 董琳曼 王家欣 侯夢婷 謝 杰 劉 森 牛美蘭

黃河科技學(xué)院，河南省鄭州市 450000

慢性腎損傷是多種原發(fā)性或繼發(fā)性腎臟病變持續(xù)進(jìn)展的共同結(jié)果，常常累及多個(gè)系統(tǒng),是臨床上常見的疾病,嚴(yán)重危害人類的健康和生命[1]。目前,西醫(yī)治療以抗菌、利尿、保護(hù)腎功能為主，盡管西醫(yī)治療有一定療效，但副作用不被人接受，車前草是一種常見的中草藥,性寒、味甘，歸肝、腎經(jīng),具有清熱、利尿通淋、涼血解毒、祛痰的功效，可用于治療水腫尿少、癰腫瘡毒等疾病。課題組成員在查閱中醫(yī)文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，應(yīng)用車前草對慢性腎損傷大鼠模型實(shí)施實(shí)驗(yàn)研究,以探討車前草水煎劑對慶大霉素+頭孢拉定引起雄性SD大鼠慢性腎損傷(Chronic kidney injury,CKI)的作用，同時(shí)也為臨床預(yù)防CKI提供理論實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SP級雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠62只，體重180～220g，購自河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證編號(SCXK豫2017-0001)，存放于黃河科技學(xué)院動(dòng)物房，光照10～12h/d，溫度10～18℃，相對濕度40%～60%，自由飲水及攝食。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及藥品 慶大霉素注射液(鼎復(fù)康藥業(yè)股份有限公司,規(guī)格:2ml:80mg，8萬單位)，頭孢拉定膠囊(江蘇漣水制藥有限公司，規(guī)格：0.25g)，鹽酸多巴胺注射液(遠(yuǎn)大醫(yī)藥有限公司，規(guī)格：2ml：20mg×10支)，車前草購自河南省醫(yī)藥超市有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備 電子天平(PTY-C5200,杭州朗固金屬制品有限公司)。

2 方法

2.1 實(shí)驗(yàn)大鼠建模及分組方法 普通飼料喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)大鼠1周，適應(yīng)環(huán)境后，將62只大鼠隨機(jī)分為6組：空白組，模型組，車前草水煎劑(Plantago depressa willd decoction,PDWD)低、中、高濃度組和西藥(小劑量多巴胺)組，空白組12只，其余組各10只，繼續(xù)普通飼料喂養(yǎng)，除空白組大鼠外，其余大鼠均給予慶大霉素+頭孢拉定灌胃，連續(xù)8周，自由飲用生理鹽水。按照大鼠與人等效劑量換算表[2]計(jì)算各藥劑量：慶大霉素[6.25mg/(kg·d)]、頭孢拉定[1.55g/(kg·d)]給予灌胃。實(shí)驗(yàn)第8周末，從空白組和模型組各隨機(jī)抽出2只，腹腔靜脈采血，測血清尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)、尿酸(UA)變化情況，免疫組化法觀察模型組大鼠腎組織變化。腎小球明顯腫脹，毛細(xì)血管叢內(nèi)細(xì)胞數(shù)明顯增多，毛細(xì)血管壁明顯增厚，腎小球固縮、閉塞，腎小管出現(xiàn)廣泛性損傷，水腫、擴(kuò)張或萎縮，證實(shí)慢性腎損傷建模成功，處死大鼠。

2.2 給藥方法 空白組大鼠普通飼料喂養(yǎng)，自由飲生理鹽水，其余組大鼠在建立CKI模型8周后，按照大鼠與人等效劑量換算表[2]分別給予PDWD低、中、高濃度[1.5g/(kg·d)、3g/(kg·d)、6g/(kg·d)]灌胃,連續(xù)4周；小劑量多巴胺組給予多巴胺0.04μg/(kg·d)腹腔注射，連續(xù)4周，自由飲生理鹽水。

2.3 樣品采集與指標(biāo)測定 在上述條件下將各組實(shí)驗(yàn)大鼠飼養(yǎng)至第12周末，測量體質(zhì)量，10%水合氯醛(2～3ml/100g)麻醉,腹腔靜脈采血，檢測血清BUN、SCr、UA變化。

2.4 免疫組化觀察大鼠腎組織變化 腎組織病理學(xué)觀察取10%多聚甲醛固定腎組織，石蠟包埋，蘇木素—伊紅染色(HE染色)，光鏡下觀察。

3 結(jié)果

3.1 實(shí)驗(yàn)大鼠一般情況的觀察 車前草水煎劑對腎損傷模型大鼠一般生存狀態(tài)的影響：空白組大鼠毛色光澤順滑，體重持續(xù)增長，對外界刺激反應(yīng)敏感、大小便正常，余10只全部存活(除造模檢驗(yàn)2只)；模型組大鼠精神萎靡、反應(yīng)遲鈍，少食，毛色發(fā)黃無光澤，死亡2只(檢測造模死亡1只，造模過程死亡1只)；小劑量多巴胺組一般生存狀態(tài)明顯改善，車前草水煎劑低、中、高濃度組精神狀態(tài)、飲食狀況、毛色外觀等一般生存狀態(tài)較模型組呈不同程度改善，以車前草水煎劑高濃度組最為顯著。治療大鼠死亡狀況：車前草水煎劑低濃度組死亡 3 只(造模過程死亡 1 只、治療過程死亡 2 只)，車前草水煎劑中濃度組死亡2只(造模過程死亡 1 只、檢測造模死亡1只)， 車前草水煎劑高濃度組造模過程死亡 1 只，小劑量多巴胺組治療過程死亡1只。

3.2 大鼠體質(zhì)量的變化 造模前后空白組大鼠體質(zhì)量無明顯差異(P>0.05)；造模后大鼠體質(zhì)量與空白組比較：模型組與車前草低、中、高濃度組體質(zhì)量顯著下降(P<0.01)，小劑量多巴胺組大鼠體質(zhì)量顯著下降(P<0.05)；藥物干預(yù)后與模型組大鼠體質(zhì)量比較：多巴胺組與車前草水煎劑中、高濃度組明顯增長(P<0.01)，車前草水煎劑低濃度組增長有顯著差異(P<0.05)，見圖1。

圖1 各組大鼠體質(zhì)量變化

3.3 大鼠進(jìn)食量的變化 造模前各組大鼠進(jìn)食量無明顯差異(P>0.05)；造模第6周、造模成功后與空白組比較，模型組、車前草低、中濃度組大鼠進(jìn)食量顯著減少(P<0.01)，小劑量多巴胺組、車前草高濃度組大鼠進(jìn)食顯著減少(P<0.05)；給藥后與空白組比較車前草高濃度組大鼠進(jìn)食量明顯增加(P<0.05)，見圖2。

圖2 大鼠進(jìn)食量的變化

3.4 大鼠血清腎功能監(jiān)測指標(biāo) 藥物干預(yù)4周后與空白組比較：模型組、車前草低濃度組大鼠血清BUN、Scr、UA顯著升高(P<0.01)，車前草中濃度組大鼠BUN、Scr、UA顯著升高(P<0.05)，車前草高濃度組大鼠、小劑量多巴胺組大鼠BUN、Scr、UA無顯著差異(P>0.05)；與模型組比較，小劑量多巴胺組、車前草高濃度組大鼠血清BUN、Scr、UA顯著下降(P<0.05)。見表1。

表1 車前草水煎劑對大鼠腎功能的影響

3.5 各組大鼠腎臟組織變化 空白組腎臟組織結(jié)構(gòu)清晰可見，腎小球、腎小管形態(tài)正常；與空白組比較，模型組大鼠腎臟組織局部明顯出現(xiàn)腎小球擴(kuò)張、毛細(xì)血管擴(kuò)張及系膜基質(zhì)增生，并伴有不同程度的腎小管擴(kuò)張、腎小管上皮細(xì)胞出現(xiàn)空泡、顆粒樣變性等病理改變；小劑量多巴胺組及車前草各組上述病理變化均有改善，且高濃度組、小劑量多巴胺組改善較為明顯。見圖3。

圖3 各組大鼠腎臟組織病理學(xué)變化

4 討論

慶大霉素是一種療效確切的氨基糖苷類抗生素，主要用于治療革蘭陰性菌引起的感染，其腎毒性一直受到關(guān)注。慶大霉素進(jìn)入體內(nèi)經(jīng)腎排泄后被腎小管重吸收,造成腎小管上皮細(xì)胞的膜脂質(zhì)代謝功能障礙，使腎小管受損，發(fā)生急性腎衰竭，由其造成的腎衰竭是當(dāng)今公認(rèn)的腎毒性急性腎衰竭實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蚚3]。而頭孢拉定是一種強(qiáng)效的抗菌藥物，屬于第一代頭孢類抗生素，腎毒性較大[4]，可引起急性腎小管壞死。故采用慶大霉素+一代頭孢聯(lián)合灌胃法，利用其腎毒性的協(xié)同作用來建立慢性腎損傷模型，成為本實(shí)驗(yàn)最大的創(chuàng)新之處。車前草具有利尿通淋、涼血清熱的功效，常用于治療水腫尿少、癰腫瘡毒等疾病[5]。呂昂等通過建立雄性大鼠腎草酸鈣結(jié)石模型,觀察到模型組雄性大鼠尿量明顯增加,尿液中Ox、Mg2+、Ca2+排泄量提高,血清和腎組織中 Ca2+、Mg2+、BUN和Cr含量降低,腎組織NOX4蛋白的表達(dá)減少,車前草醇提物可通過促進(jìn)尿液排泄[6]。此外彭璇等通過建立雄性大鼠模型進(jìn)行對照實(shí)驗(yàn),也發(fā)現(xiàn)不同劑量的車前草提取物黃酮可使雄性大鼠尿量及尿液Na+、Cl-的含量發(fā)生變化，還可通過收縮膀胱平滑肌、舒張離體尿道平滑肌的作用來增強(qiáng)生理情況下膀胱排尿[7]。由此可見，上述實(shí)驗(yàn)為本實(shí)驗(yàn)研究車前草對腎臟的保護(hù)作用提供了一定的實(shí)驗(yàn)研究基礎(chǔ)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：與空白組比較，模型組體質(zhì)量顯著下降(P<0.01)；與模型組比較，車前草水煎劑高濃度組大鼠體質(zhì)量明顯增長(P<0.01)；與空白組比較，模型組大鼠進(jìn)食量顯著減少(P<0.01)；與空白組比較,車前草高濃度組大鼠進(jìn)食量明顯增加(P<0.05)；與空白組比較，模型組大鼠血清BUN、Scr、UA顯著升高(P<0.01)；與模型組比較，車前草高濃度組大鼠血清BUN、Scr、UA顯著下降(P<0.05)；與空白組比較，模型組大鼠腎臟組織局部明顯出現(xiàn)不同程度的病理改變；小劑量多巴胺組及車前草各組上述病理變化均有改善，且高濃度組、小劑量多巴胺組改善較為明顯。由此可見，車前草水煎劑可在一定程度上改善大鼠的體質(zhì)量和進(jìn)食量，且在一定范圍內(nèi)降低了大鼠的血清BUN、Scr、UA。所以，車前草水煎劑在一定程度上對大鼠腎臟起保護(hù)作用。

綜上所述，車前草水煎劑對慶大霉素+頭孢拉定引起的雄性SD大鼠腎損傷有一定的保護(hù)作用；車前草水煎劑可改善慶大霉素+頭孢拉定引起的雄性SD大鼠腎損傷的體質(zhì)量、進(jìn)食量。