結腸癌組織Cathepsin D、MMP-13和14的表達與預后相關性分析

趙 帥 湖南省長沙市第三醫(yī)院 410000

結直腸癌是一種常見的消化道腫瘤，且該病發(fā)病率較高，在胃腸道腫瘤中占第二位[1-2]。且醫(yī)療界對結直腸癌的形成、發(fā)病機制與預后尚未完全清楚，故深入了解結直腸癌形成、病情發(fā)展、尋找預測結腸癌的影響標志物成為一大研究熱點[3]。其中基質金屬蛋白酶(MMP)-13是腫瘤細胞主要蛋白水解酶之一，能夠促進腫瘤細胞的轉移；MMP-14能夠通過調整血管內皮生長因子促進血管生成，促進腫瘤的浸潤及轉移；組織蛋白酶-D(Cathepsin D)是一種嗜酸性溶酶體蛋白水解酶，在腫瘤細胞中易出現(xiàn)異常表達[4]。鑒于此，選取結直腸癌患者和健康人群各124例，測試結直腸MMP-13和14、Cathepsin D的表達水平，并分析與預后相關性。現(xiàn)將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 抽取2017年11月—2018年11月收治的124例結直腸癌患者組織標本，定為研究組。對照組選擇在我院正常體檢的健康人群124例的正常結直腸組織標本。研究組入選標準：(1)均經(jīng)活檢和病理檢查學確診；(2)未接受過相關治療；(3)知情并自愿參加本次研究者。排除標準：(1)存在聽力、視力或精神障礙者；(2)1周內有特殊用藥史者；(3)癌癥轉移者。我院倫理委員會已認證本次研究。研究組患者124例，男71例，女53例；年齡25～73歲，平均年齡(49.56±22.47)歲；病理類型: 黏液細胞癌24例，乳頭狀腺癌49例，管狀腺癌51例；分化程度：低分化42例，中分化69例，高分化13例；腫瘤部位：結腸66例，直腸58例。對照組健康人群124例，男68例，女56例；年齡24～75歲，平均年齡(49.52±22.63)歲。兩組性別、年齡比較差異不顯著(P>0.05)。

1.2 方法 結直腸癌患者組織標本和正常結直腸組織標本首先用10%甲醛固定，并用石蠟包埋后，切出厚度為4μm的薄片。然后用免疫組織化學SP染色。陰性對照選擇磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗；陽性對照選擇已知標志物的陽性組織切片，嚴格依據(jù)試劑盒的操作說明進行[5]。本文MMP-13和14、Cathepsin D均購于北京奧博星生物技術有限責任公司，試劑盒均購于北京天根生化科技有限公司。

2.1 甲、乙型流感臨床資料和血常規(guī)參數(shù) 患者組和健康對照組的年齡、男女比例構成情況比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。血常規(guī)參數(shù)LMR的患者組比健康對照組均值小，且差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。而NLR和PLR患者組都比健康對照組均值大，差異也有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表1。

1.3 觀察指標 (1)MMP-13和14、Cathepsin D表達情況：MMP-13和14表達的陽性判定標準：細胞內出現(xiàn)棕黃色顆粒，陽性細胞計數(shù)<5%記0分，陽性細胞計數(shù)≥5%且<25%記1分，陽性細胞計數(shù)≥25%且<50%記2分，陽性細胞計數(shù)≥50%且<75%記3分，陽性細胞計數(shù)≥75%記4分；染色強度為淡黃色記1分，為黃或深黃色記2分，為褐或棕褐色記3分，陽性細胞計數(shù)評分與染色強度的評分乘積>1分判定為陽性。Cathepsin D表達的陽性判定標準：細胞胞漿中出現(xiàn)棕黃色顆粒，在100倍鏡下尋找代表性區(qū)域，在400倍鏡下觀察陽性細胞<10%判定為陰性，≥10%判定為陽性。(2)研究組生存情況：術后隨訪12個月后，統(tǒng)計結腸癌患者的生存率。

胼胝體梗死往往累及高級神經(jīng)功能，而導致高級神經(jīng)功能損害。胼胝體梗死會損害連接雙側大腦半球的完整性聯(lián)絡纖維，進一步會出現(xiàn)雙側大腦半球失聯(lián)系現(xiàn)象進而導致一系列臨床癥狀[19]。Giroud等[6]研究了282例缺血性腦卒中患者并報道了胼胝體梗死后2個經(jīng)典的臨床癥狀：(1)胼胝體離斷癥狀，包括失用、失寫、左手觸覺性命名不能和異己手綜合癥(alien hand syndrome，AHS)。(2)額葉性共濟失調，包括因胼胝體前部小梗死灶導致的走路基步寬、小碎步以及手臂失去擺動等癥狀。

2 結果

2.2 研究組結直腸組織標本MMP-13和14、Cathepsin D表達與預后相關性分析 124例結直腸癌患者術后隨訪率為100%，其死亡率為30.65%(38/124)，生存率為69.35%(86/124)。且隨著MMP-13、Cathepsin D陽性表達率增加，患者死亡率增加，生存率降低，差異顯著(P<0.05)；而MMP-14陽性表達率與患者死亡率相關性不大(P>0.05)。詳見表2。

表1 兩組結直腸組織標本MMP-13和14、Cathepsin D表達情況比較 [n(%)]

2.1 兩組結直腸組織標本MMP-13和14、Cathepsin D表達情況比較 相比于對照組，研究組結直腸癌患者組織標本MMP-13和14、Cathepsin D陽性表達率明顯較高，差異顯著(P<0.05)。詳見表1。

表2 研究組結直腸組織標本MMP-13和14、Cathepsin D表達與預后相關性分析 [n(%)]

3 討論

隨著人們的飲食結構的改變及生活水平的提高，結直腸癌的發(fā)病率逐漸增加，主要臨床表現(xiàn)為血便、腹瀉、局部腹痛，后期還可能伴隨貧血或體重減輕。并且該病發(fā)病過程較復雜，不易及早發(fā)現(xiàn)，到目前為止其發(fā)病原因、早期診斷標志物、改善患者預后的標志尚不清楚[6]。同時大量研究報道[7-8]，結直腸癌的發(fā)生、轉移及預后與多種生物指標相關。

MMP-13和14、Cathepsin D均參與腫瘤生長、轉移過程。其中MMP-13是一種間質膠原酶，能夠激活狀細胞癌中的MMP-9，增加腫瘤侵襲性；MMP-14屬于膜型基質金屬蛋白酶，可體外激活MMP-13，并且能夠調整血管內皮生長因子促進血管生成，促進腫瘤的浸潤及轉移；Cathepsin D是一種嗜酸性溶酶體蛋白水解酶，在腫瘤細胞中易出現(xiàn)異常表達，且與病理分級有關。同時腫瘤細胞的侵襲和轉移與催化細胞外基質降解有密切的關系，而MMP-13和14是催化細胞外基質降解的主要酶類，故促進腫瘤細胞的侵襲和轉移；Cathepsin D能夠促進細胞外基質的降解，從而有效促進腫瘤細胞的侵襲和轉移。故本次研究發(fā)現(xiàn)，相比于對照組，研究組結直腸癌患者組織標本MMP-13和14、Cathepsin D陽性表達率明顯較高。

1.4 統(tǒng)計學方法 此實驗采用SPSS18.0 統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行分析，用[n(%)]來表示計數(shù)資料，采用χ2檢驗，P<0.05時，差異顯著。

另外，對124例結直腸癌患者進行隨訪1年，隨訪率為100%，其死亡率為30.65%，生存率為69.35%。且隨著MMP-13、Cathepsin D陽性表達率增加，患者死亡率增加，生存率降低；而MMP-14陽性表達率與患者死亡率相關性不大。提示說明MMP-13、Cathepsin D陽性增強與直腸癌的預后有較大的相關性，其可作為預測直腸癌預后的重要因素。

本文就以房地產(chǎn)企業(yè)的營銷為例，探究房地產(chǎn)企業(yè)進行網(wǎng)絡營銷效果分析系統(tǒng)設計和實現(xiàn)的有效方案。這種企業(yè)和電子商務網(wǎng)絡存在一定的差異，因為電子商務網(wǎng)站的營銷一般只涉及網(wǎng)絡營銷，而房地產(chǎn)營銷是線上線下同時開展的，構建企業(yè)的網(wǎng)絡營銷效果分析系統(tǒng)，對于房地產(chǎn)企業(yè)的長效發(fā)展目標實現(xiàn)具有重要意義。

綜上所述，MMP-13和14、Cathepsin D參與了結直腸癌的發(fā)病進程，其中MMP-13、Cathepsin D陽性表達與結腸癌患者術后生存率有密切的關系。