不同灸溫的調脂控炎效應及與瞬時受體電位通道香草酸亞型1 的關系研究

李梅，于建娟，王耀帥

艾灸療法在寒性病癥及代謝性疾病的治療、抗炎免疫及養生保健等方面，相較針刺更顯優勢。有研究表明[1]，調控炎癥反應是灸法的基本效應平臺，其對炎癥反應的4 個基本通路，即致病因素[2]、傳感器[3]、炎性介質[4]及靶器官[5]均具有調節作用，可以干預炎性反應的起始、中間及終末各個環節。皮膚是灸法作用的直接部位，研究表明皮膚組織中分布著感受不同溫度的蛋白受體（瞬時感受器電位，TRP）家族。TRP 家族的TRP 亞家族成員有TRPV1、TRPV2、TRPV3 及TRPV4，其中TRPV1 可以調節小直徑的神經元對熱刺激的反應，可以被43℃以上的熱刺激激活，目前考慮其是熱痛感受器的分子結構基礎。45℃是熱刺激引起痛感的平均臨界值，也是人體組織被熱刺激損傷的起始溫度[6]。本研究將38 ℃及45 ℃作為控制條件，來探討不同艾灸溫度對高脂血癥小鼠血脂和血清炎癥因子的影響，并進一步明確艾灸調脂控炎的機制。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 實驗動物 實驗動物購自于北京維通利華實驗動物有限公司，取8 周齡健康雄性C57BL/6 小鼠40只，體質量（20±2）g，相同的生存環境（溫度24 ～26℃，濕度45%～55%），進食進水，適應性喂養1周。參考小鼠高脂血癥模型造模法[7]，高脂飼料投喂8 周造模，完成后開始進行實驗干預。

1.2 實驗試劑及器材 膽固醇（TC）及三酰甘油（TG）檢測試劑盒（南京建成生物工程研究所），腫瘤壞死因子-（TNF- ）、白介素-10（IL-10）、白介素-6（IL-6）及TRPV1檢測試劑盒（南京凱基生物科技發展有限公司），直徑0.5cm 艾條（南京艾顏堂艾絨有限責任公司），WZ-23000RX 無紙記錄儀（杭州凌碩檢測儀器有限公司），Allegra X-22 系列多功能臺式高速離心機（上海天美生化儀器設備工程有限公司），ELx800酶標儀（美國Bio Tek 公司），VXE380 型超低溫冰箱（Thermo公司），其他有移液器、眼科鑷、EP 管及電子稱等。

1.3 分組及方法 正常對照組（n=10）：繼續投喂普通飼料，與實驗組同樣抓取、固定，但不做艾灸治療。

模型對照組（n=10）：造模成功后，繼續投喂高脂飼料，與實驗組同樣抓取、固定，但不做艾灸治療。

38 ℃溫和灸組（n=10）：繼續投喂高脂飼料，治療時將小鼠仰臥位固定于固定器上，消毒神闕穴（小鼠腹正中線胸骨柄上緣至外生殖器上3/4 與下1/4 交界處）皮膚，待其安靜后，使用直徑為0.5 cm 的清艾條進行治療。每天溫和灸10 min，共2 周。治療時，將艾條垂直懸于穴位上方8 ～12 mm 處，40 ～60 s彈灰1 次。每次治療時使用人工控制無紙記錄儀監測溫度。通過調整艾條與皮膚的距離和間隔彈灰保持施灸溫度在（38±1）℃。見封二彩圖1。

45 ℃溫和灸組（n=10）：繼續投喂高脂飼料，干預方法與38 ℃溫和組相似，在艾灸刺激時，將局部皮膚施灸溫度保持在（45±1）℃。見封二彩圖2。

1.4 血清制備 治療結束后，禁食12 h 后（不禁水）行單側眼球摘除取血，常規條件下3000r/min離心15min后取上層血清置于EP 管中，放置在―20℃的冰箱中待測。

1.5 指標檢測 使用TC及TG試劑盒，采用酶標儀比色法檢測相關血脂含量。使用IL-6、IL-10、TNF-及TRPV1 檢測試劑盒采用雙抗體夾心法檢測相關的血清炎性指標的水平。

1.6 統計方法 數據采用SPSS 22.0 軟件分析，計量資料采用均數±標準差表示，多組間比較采用F檢驗，多重比較采用LSD-t 檢驗。P ＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血清TC 及TG 含量變化 治療后，4 組小鼠血清TC 及TG 含量差異均有統計學意義（均＜0.05）。 其中模型對照組TC 及TG 含量最高，然后從高到低依次為38 ℃溫和灸組、45 ℃溫和灸組及正常對照組（t≥2.43，均P ＜0.05）。見表1。

2.2 血清IL-6、IL-10、TNF- 及TRPV1 含量變化與正常對照組相對比，模型對照組血清IL-6、IL-10及TNF- 含量均明顯升高（t≥4.72，均P ＜0.05）。與模型對照組比較，38℃溫和灸組血清IL-6、IL-10、TNF- 及TRPV1 含量變化差異均無統計學意義（t≤0.36，均P＞0.05）；45 ℃溫和灸組血清IL-6 及TNF- 含量明顯降低，IL-10 及TRPV1 含量明顯升高（t≥13.52，均P ＜0.05）。見表2。

3 討論

高脂血癥是引發動脈粥樣硬化的危險因素[8]。炎癥是機體組織對有害刺激（感染、出血、創傷等）所產生的復雜生理、病理反應，是引起人體很多重要疾病的共同通路[9]。炎癥反應與脂質代謝相互影響，相互作用[10]，參與了高脂血癥的發生及發展過程，包括炎癥細胞的聚集、活化及增生。在高脂血癥病理過程中炎癥因子的分泌，可以進一步形成動脈粥樣硬化。因而，高脂血癥及動脈粥樣硬化也越來越被認為是一種炎性疾病[11]。

艾灸是中醫學的重要療法，火是艾灸的刺激源。《靈樞》有云：“火氣已通，血脈乃行”，可見溫熱刺激是艾灸達到“刺激在外，調節在內”的功效基礎，是艾灸最基本的特點。灸溫是施灸強度的一個表現形式，合適的灸溫可以調動機體的神經內分泌等調節機制進而防病治病。筆者認為適宜灸溫的長期干預可以通過改善炎癥反應達到“未病先防，既病防變”的效果。

表1 4 組小鼠血清TC 及TG 含量變化 mmol/L

表2 4 組小鼠血清IL-6、IL-10、TNF- 及TRPV1 水平變化

本研究結果顯示，38 ℃組和45 ℃組均可降低血清TC 及TG 含量，45 ℃組療效更優。相對于38 ℃熱刺激，持續的45 ℃熱刺激不僅可以降低血脂水平，還可以有效降低血清中IL-6 及TNF- 水平，提高IL-10 水平，抑制機體的炎癥狀態。可見合適溫度的熱刺激是艾灸調脂控炎取效的關鍵因素。TRPV1 主要在皮膚、角化細胞、舌、三叉神經節、背根神經節、脊髓及大腦等組織中表達，可以被43℃以上的溫熱刺激所激活。45 ℃這一起效溫度與TRPV1 通道激活閾值相契合，結合45℃艾灸刺激能明顯提升高脂血癥小鼠TRPV1 通道蛋白的表達，推測TRPV1 通道可能是艾灸調脂控炎效應的關鍵通道。本實驗結果與新近調脂控炎機制研究結果[12-13]相符。

綜上所述，不同艾灸溫度對高脂血癥小鼠調脂控炎效應不同，45 ℃調脂控炎效應優于38 ℃，TRPV1 通道可能與艾灸調脂控炎效應有關。