髓系來源抑制性細胞對非小細胞肺癌患者疾病進展和預后的評估價值

黃威，王芝濤

肺癌是最常見的惡性腫瘤之一，是導致男性癌癥患者死亡的最主要原因[1]。非小細胞肺癌（NSCLC）是最常見的肺癌亞型，約占所有肺癌的85%。多數NSCLC 患者被確診時常已經處于腫瘤晚期，并伴有肺部以外器官轉移[2]。對于此類患者，往往缺乏有效的治療手段，治療效果極差。目前，國內外有關NSCLC的病因及發病機制尚缺乏統一觀點。因此，深入研究NSCLC患者的發病機制及尋找一種有效、可靠的治療靶點具有重要的醫學價值。髓系來源抑制性細胞（MDSC）是一群新近發現并具有免疫抑制功能的髓系細胞亞群[3]。已有多項研究表明，MDSC 通過抑制宿主的先天和獲得性免疫功能來減弱宿主的抗腫瘤免疫反應[4]。前期研究表明，MDSC 在膀胱癌[5]、乳腺癌[6]、胰腺癌[7]等患者中數量異常增多，并且與疾病的進展及預后密切相關。然而，MDSC在NSCLC患者中的作用研究，目前鮮有報道。本研究旨在探討MDSC在NSCLC 中的表達情況及其與臨床病理特征和預后的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2015 年9 月至2019 年9 月于寧波大學附屬人民醫院胸外科初次確診的62 例NSCLC 患者（實驗組）為研究對象，其中男38 例，女24 例；平均年齡（52.8±10.4）歲；且均無傳染性疾病及自身免疫性疾病等。TNM分期按照美國癌癥聯合會（AJCC）第七版癌癥分期標準[8]，其中Ⅰ期9 例，Ⅱ期16例，Ⅲ期18 例，Ⅳ期19 例；腺癌29 例，鱗癌20 例，其他13 例。總生存期（OS）定義為患者從確診開始至發生任何原因死亡或隨訪結束的時間。其中，20 例初診Ⅰ～Ⅱ和Ⅲa 期NSCLC 患者于本院行外科手術治療，術后輔助化療，并定期隨診，資料保存完整。選取本院體檢中心健康成年人30 例為對照組（HC組），男20 例，女10 例；平均年齡（50.5±9.6）歲。兩組一般資料差異無統計學意義（P ＞0.05）。所有受試者均取得書面知情同意，該研究方案經本院倫理委員會審查后予以批準。

1.2 方法 記錄NSCLC 患者的性別、年齡、TNM分期、病理類型、乳酸脫氫酶（LDH）水平、有無淋巴結轉移及OS 等臨床資料。所有研究對象均采集肝素抗凝血2 ml，取CD14-FTTC、HLA-DRPE、CD45-PC5 單克隆抗體各10 l（Beckman Coulter 公司，USA），與上述抗凝血100 l 混勻。25 ℃孵育15 min 后，采用流式細胞儀（FC500 MPL，Beckman Coulter 公司，USA）收集檢測數據，采用Flowjo 軟件分析數據。本研究以CD14+HLA-DRlow/－作為MDSC的免疫表型。

1.3 統計方法 采用SPSS17.0統計軟件進行分析，計量資料以均數±標準差表示，采用t 檢驗或方差分析；采用Pearson 法分析相關性；采用Kaplain-Meier 法繪制生存曲線，Log-Rank檢驗進行分析；采用Cox回歸模型分析影響NSCLC 患者生存時間的因素。P ＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組外周血中MDSC 表達水平比較 實驗組外周血中MDSC 占CD14+細胞比例為（29.33±9.21）%，高于對照組的（11.53±3.73）%，差異有統計學意義（t=10.663，P ＜0.05）。

2.2 MDSC與NSCLC臨床及病理特征的關系 TNM 分期增加、LDH 升高及有淋巴結轉移的NSCLC 患者外周血中MDSC 表達水平明顯升高（均P ＜0.05），見表1。

2.3 初診NSCLC患者手術前后外周血中MDSC 表達水平比較 20 例初診Ⅰ～Ⅱ和Ⅲa 期NSCLC 患者于本院行外科手術治療，術后2 ～3 周復查外周血中MDSC 水平。NSCLC 患者手術前MDSC 為（28.18±7.88）%，手術后為（15.18±5.98）%，手術前后差異有統計學意義（t=10.358，P ＜0.05）。

2.4 初診NSCLC患者總生存期與MDSC的相關性 所有患者均隨訪至死亡或失去隨訪，隨訪時間為8 ～51個月，中位生存時間為32個月。NSCLC患者外周血MDSC水平與OS呈負相關（r=－0.43，P＜0.01）。選取NSCLC 患者外周血MDSC 的平均值29.33%為臨界值（cut-off 值），將患者分為高表達MDSC 組和低表達MDSC 組。高表達和低表達組NSCLC 患者中位生存時間分別為21 個月和39.5 個月。高表達組較低表達組OS 明顯縮短（2=21.3，P ＜0.01）。見封二彩圖7。

2.5 初診NSCLC 患者預后因素的Cox回歸分析 單因素分析顯示TNM分期、淋巴結轉移和MDSC 是影響NSCLC 患者預后的不良因素（均P ＜0.05）；多因素分析顯示TNM 分期、淋巴結轉移和MDSC 水平均是影響NSCLC 患者預后的獨立危險因素（均P ＜0.05）。見表2。

3 討論

本研究發現：（1）與健康對照組相比，MDSC在初診NSCLC中呈高表達狀態，這與Huang 等[9]的研究結果一致。越來越多的研究發現，在腫瘤微環境中，腫瘤細胞通過分泌多種免疫抑制性細胞因子、生長因子及炎癥因子誘導生成并擴增MDSC[10]。此外，MDSC 又可以通過多種途徑來抑制宿主的免疫功能[11]，腫瘤細胞和MDSC 成為互相促進的細胞群體。在NSCLC 患者中，高表達狀態的MDSC 可能參與抑制了NSCLC患者的抗腫瘤免疫反應，尤其是抑制了T、B 和NK 等細胞的免疫功能，從而促進了腫瘤細胞的免疫逃逸。（2）MDSC 表達水平與NSCLC 患者腫瘤TNM 分期、LDH 水平及有無淋巴結轉移密切相關，但是與NSCLC 患者性別、年齡及病理分型未見明顯相關性。前期研究表明，MDSC的表達與腫瘤的進展及病情嚴重程度密切相關[12]。本研究亦表明MDSC與NSCLC 的疾病進展與遠處轉移密切相關，MDSC 可以作為評估MDSC 疾病進展的新指標。（3）經外科手術后，NSCLC 患者外周血MDSC 水平較手術前明顯下降，隨著NSCLC 患者腫瘤負荷的減輕，MDSC 的表達水平亦明顯下降。因此，MDSC 可以作為評估NSCLC 患者療效的新指標。

表1 MDSC 與NSCLC 臨床及病理特征的關系

表2 初診NSCLC 患者預后因素的Cox 回歸分析

有研究表明MDSC 在肝細胞癌、彌漫大B細胞淋巴瘤中可以作為評估患者預后的指標[13-14]。為了進一步探討MDSC與NSCLC 患者預后的關系，本研究進一步分析了MDSC 與NSCLC 患者OS 的相關性及作為預后指標的可行性。在本研究中，通過相關性分析和生存分析發現，NSCLC患者外周血MDSC 水平與患者的OS 呈負相關；MDSC 高表達的NSCLC 患者的OS明顯縮短。其次，通過單因素和多因素Cox回歸分析發現，TNM 分期、淋巴結轉移及MDSC 水平是NSCLC 患者的獨立預后標志物。因此，MDSC 對于NSCLC 患者的不良預后具有獨立的預測價值，MDSC可以作為評估NSCLC 患者預后的新指標。

綜上所述，NSCLC患者的發病可能與宿主體內存在的抑制性腫瘤微環境有關。MDSC在NSCLC患者中處于高表達狀態，并且與疾病進展和療效密切相關。此外，MDSC還可以作為評估NSCLC患者預后的新指標。