老年不同級別宮頸病變患者Treg、IFN-及IL-4水平變化及其臨床意義

周曉涵，寧玉梅，馬軍

宮頸癌是全球女性發病率較高的惡性腫瘤，其中90%以上的宮頸癌患者會合并人乳頭瘤病毒（HPV）感染。以往研究認為HPV 感染多發生于性生活活躍的中青年女性群體，但近些年發現老年人HPV 的感染率呈上升趨勢，并在老年宮頸病變中起到關鍵影響，危及患者生命健康安全[1]。HPV 的持續感染能否引起宮頸病變與患者的自身免疫狀態及激素分泌水平等呈相關性，患者自身免疫系統在HPV介導的致癌作用中起到關鍵作用[2]。本研究旨在探討老年不同級別宮頸病變患者調節性T 細胞（Treg）、免疫因子-干擾素（IFN- ）及白細胞介素-4（IL-4）水平的變化及其臨床意義，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2019 年3 月至2020 年5 月浙江中醫藥大學第二臨床醫學院收治的92 例老年宮頸病變患者為研究組，按不同級別分為宮頸癌組39例、宮頸上皮內瘤變（CIN）組34 例（CINⅠ級14 例、CINⅡ級9 例、CIN Ⅲ級11 例）和宮頸炎組19 例，并選取同期40 例健康體檢者為對照組。納入標準：（1）研究組患者經病理檢查確診為宮頸病變，且均未接受過放化療；（2）所有受檢者及家屬自愿簽署知情同意書；（3）臨床資料完整。排除標準：（1）免疫系統疾病；（2）嚴重心臟、肝腎功能異常；（3）合并惡性腫瘤；（4）合并感染性疾病。對照組40 例健康體檢者年齡60 ～82 歲，平均（69.4±7.3）歲；平均體質量指數（BMI）（20.72±2.13）kg/m2。研究組92 例年齡60～81歲，平均（69.2±7.2）歲；平均BMI（20.21±2.18）kg/m2。

1.2 方法 患者入院后于清晨空腹下抽取外周靜脈血10 ml，置于－80 ℃冰箱中待檢。使用FACS CantoⅡ型流式細胞儀檢測Treg 細胞水平，將待檢樣血使用肝素鈉抗凝，抗凝完成后加入CD3、CD4、CD8 抗體10 l，混合搖勻完成后將其放至室內避光處，20 min 后加入800 l的紅細胞裂解液，混合搖勻后繼續于室內避光處放置10 min，待溶血完成后加入1000 l的PBS緩沖液洗滌2 次，采用Diva 分析軟件進行結果分析。使用離心機將樣品管以3000r/min 離心10min，采用酶聯免疫吸附實驗（ELISA）檢測血清IFN-和IL-4 水平；上述操作均由同一實驗員嚴格按照操作規章及試劑盒說明完成，試劑盒購自上海康朗生物科技有限公司。

1.3 統計方法 采用SPSS 19.0 統計軟件進行分析，計量資料以均數±標準差表示，多組比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD-t 檢驗；采用Pearson 相關分析變量間的相關性。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組Treg 細胞、IFN- 及IL-4 水平比較 宮頸癌組Treg 細胞水平高于CINⅠ、CINⅡ、CIN Ⅲ級組、宮頸炎組和對照組，且CIN Ⅲ級組Treg 細胞水平高于宮頸炎組和對照組（均P ＜0.05）；宮頸癌組IFN- 水平低于宮頸炎組和對照組（均P ＜0.05）；宮頸癌組IL-4 水平高于CINⅠ、CINⅡ、CIN Ⅲ級組、宮頸炎組和對照組，且CIN Ⅲ級組IL-4 水平高于對照組（均P ＜0.05）。見表1。

2.2 Treg 細胞與IFN- 及IL-4 水平的相關性 Treg 細胞與IFN- 水平呈負相關（r=－0.302，P ＜0.05），Treg 細胞與IL-4 水平呈正相關（r=0.391，P＜0.05），IFN- 與IL-4 水平無相關性（r=－0.070，P ＞0.05）。

3 討論

有研究報道，發生宮頸病變后會抑制其細胞的免疫功能，大大降低免疫系統的識別能力及殺傷能力，腫瘤細胞的生長受其異化作用的影響，加快腫瘤細胞的發展及轉移[3]。Treg 是能夠起到負性調節作用的免疫抑制細胞，其表達以IFN- 和IL-4 為主，通過與多種免疫細胞相互作用，對其活化產生抑制作用。正因如此，Th 細胞失衡與腫瘤免疫關系愈發受到人們重視[4-5]。宮頸病變的發生是由多因素共同作用所致，Treg 介導的腫瘤細胞逃逸機制及Th 細胞的失衡可能是其重要的原因。

Treg細胞是極為重要的腫瘤免疫抑制細胞，是組成腫瘤免疫耐受的關鍵成分，維持和穩定機體的免疫狀態是其主要功能；當患者發生腫瘤時，其機體內的Treg 細胞會顯著增多，強烈抑制了機體對腫瘤抗原的免疫應答[6]。本研究結果顯示，宮頸癌患者的Treg 細胞水平高于CIN 患者、宮頸炎患者和健康者，且CINⅢ患者的Treg細胞水平高于宮頸炎患者和健康者。這說明Treg 細胞水平能夠較好的反應患者的免疫功能狀態，是極為重要的參考指標。Treg 細胞的升高過程可能參與了宮頸病變的發展過程，其通過分泌TGF- 、IL-10 等抑制性細胞因子進而抑制樹突狀細胞，并與巨噬細胞相互作用，以此來參與宮頸病變的免疫躲避[7-8]。

表1 各組Treg 細胞、IFN- 及IL-4 水平比較

IFN- 作為Th1 細胞因子的代表，是極為重要的免疫調節因子，具有抗腫瘤與免疫調節的功能，能夠減慢或組織腫瘤細胞的病變轉化過程，若IFN- 降低則會導致機體抗腫瘤能力下降[9]。本研究結果顯示，宮頸癌患者的IFN- 水平低于宮頸炎患者和健康者。這說明隨著宮頸病變級別的不斷發展，導致其細胞免疫功能及抗腫瘤能力不斷下降，無法對機體細胞的增生進行有效控制，進而使其突變發展至惡性腫瘤。在宮頸病變級別不斷發展的過程中，患者的IFN- 水平隨之不斷下降，但在宮頸炎、CINⅠ級、CINⅡ級及CIN Ⅲ級中無明顯差異；這說明IFN- 水平在患者由宮頸炎發展到CIN Ⅲ級的過程中沒有發生明顯改變，即Th1 細胞起媒介的作用的細胞免疫功能沒有受到顯著抑制[10-11]。

IL-4 能夠對Th1 細胞因子的應答起到抑制作用，并在Th2 細胞的發育過程中起媒介作用，其水平的升高可能是由于腫瘤細胞分泌可溶性因子，導致Th2增強效應發生而造成的，加快了機體Th2細胞的分化，致使Th2 細胞因子的高表達[12]。本研究結果顯示，宮頸癌患者的IL-4 水平高于CIN 患者、宮頸炎患者和健康者，且CIN Ⅲ患者的IL-4 水平高于健康者。這說明在宮頸炎向宮頸癌的發展過程中，Th1 細胞向Th2 細胞偏移更明顯，局部免疫抑制的發生使得癌細胞更容易逃避免疫系統監視，腫瘤發展更為迅速。通過對Th1 細胞移動至Th2 細胞的進一步研究發現，如果能夠阻斷腫瘤部位Th1 細胞移動至Th2，會強化細胞免疫反應，有利于免疫系統發揮抗腫瘤作用[13]。

本文結果顯示，老年宮頸病變患者的Treg 細胞與IFN- 水平呈負相關，與IL-4 水平呈正相關。其原因在于當Treg細胞水平升高，IL-10 及TGF- 水平會隨之升高，進而導致Th1 細胞移動至Th2細胞，抑制Th1 細胞分化的同時，使患者的IFN- 水平降低；IL-10 在Th2 細胞的發育過程中起媒介的作用，能夠有效促進Th2細胞因子IL-4水平的升高[14]。Treg細胞、IL-4 及IFN- 三者之間有一定的相關性，這提示Treg 細胞水平的升高在導致宮頸病變免疫異常的同時，還在一定程度上影響了機體Th1 細胞/Th2 細胞的平衡，這說明Treg 細胞、IL-4 及IFN- 一起參與到了宮頸病變的發生及發展中。