用高效液相色譜法測定多索茶堿注射液中有關物質及含量的效果分析

李新軍，王曉光，董宏偉

（福安藥業集團煙臺只楚藥業有限公司，山東 煙臺 264002）

多索茶堿注射液是一種支氣管擴張劑，多用于治療由支氣管炎、支氣管哮喘等疾病引發的呼吸困難[1-2]。此藥是茶堿、氨茶堿的替代品。對多索茶堿注射液進行質量控制及含量測定具有重要的臨床意義。本次研究主要是探討用高效液相色譜（HPLC）法測定多索茶堿注射液中有關物質及含量的效果。

1 儀器與試劑

1.1 試驗儀器

本次試驗使用的儀器是LC-10Avp 型高效液相色譜儀、AB135-S 型電子天平、超聲儀、抽濾裝置、PH-25 型酸度計、中性硼硅玻璃管、量瓶。

1.2 試驗試劑

本次試驗使用的試劑是乙腈、磷酸鹽緩沖液、多索茶堿注射液、純凈水、多索茶堿對照品、對照品為色譜純。

2 試驗方法及結果

2.1 測定多索茶堿注射液中有關物質的方法及結果

2.1.1 色譜條件 本次試驗使用的色譜柱為C18色譜柱（150×4.6 mm，5 μm）， 填 料 為ODS 填 料， 流 動 相 為18:82 的乙腈- 磷酸鹽緩沖液（稱取0.87 g 的磷酸氫二鉀和8.34 g 的磷酸二氫鉀，將其溶解并調整pH 為5.8，稀釋至1000 ml）。流動相的流速為1.0 ml/min，運行時間為三倍主峰保留時間，進樣量為20 μl，檢測波長為273 nm。

2.1.2 制備供試品溶液的方法 精密量取10 ml 的供試品，將其置于容量為100 ml 的量瓶中，加入流動相，將供試品稀釋到指定刻度，搖勻以備用。

2.1.3 制備對照品溶液的方法 精密量取10 ml 的供試品溶液，將其置于容量為100 ml 的量瓶中，加入流動相，將供試品稀釋到指定刻度，搖勻以備用。

2.1.4 進行專屬性試驗的方法及結果 精密量取2 μg 的對照品溶液，將其置于高效液相色譜儀中，調節好檢測儀器的靈敏度，將主成分色譜峰的峰高設置為滿量程的15% ～25%。分別精密量取20 μl 的對照品溶液和供試品溶液，將這兩種溶液分別注入到高效液相色譜儀中，記錄色譜圖。精密量取1 ml 的供試品及陰性對照品，將其注入試管中，進行強堿、強酸、濕熱、金屬離子、氧化等破壞性試驗。通過流動相分別將其移至容量為10 ml 的量瓶中，稀釋到指定刻度后搖勻，對此溶液進行專屬性試驗。結果顯示，在不同的條件下，經不同的方法進行處理后，多索茶堿注射液中的有關物質及多索茶堿的含量均達到基線分離標準。詳見表1。

表1 進行專屬性試驗的方法及結果

2.1.5 進行檢測限試驗的方法及結果 精密量取一定量的對照品溶液，逐級將其稀釋并注樣，分析最大噪音峰面積（N）及信號峰面積（S）。當S/N 值約為3 時，信號峰對應的注樣量即檢測限。當對照品溶液的濃度為0.1 μg/ml 時，S=7501.132，N=2605.614，S/N=2.9（約 為3）。這 說 明，本法的檢測限為2.0 ng。

2.2 測定多索茶堿含量的方法及結果

2.2.1 色譜條件 本次試驗使用的色譜柱為C18色譜柱（150×4.6 mm，5 μm）， 填 料 為ODS 填 料， 流 動 相 為18:82 的乙腈-磷酸鹽緩沖液（在0.87g 的磷酸氫二鉀和8.34g的磷酸二氫鉀中加水，將其溶解為1000 ml 的溶液，并將其pH 調節為5.8）。流動相的流速為1.0 ml/min，運行時間為三倍主峰保留時間，進樣量為20 μl，檢測波長為273 nm。2.2.2 制備供試品溶液的方法 精密量取10 ml 的供試品，將其置于容量為100 ml 的量瓶中，加水稀釋到指定刻度。精密量取5 ml 的供試品溶液，將其置于容量為50 ml 的量瓶中，加水稀釋到指定刻度，搖勻以備用。

2.2.3 制備對照品溶液的方法 精密稱取25 mg 的多索茶堿對照品，將其置于容量為50 ml 的量瓶中，加水稀釋到指定刻度后搖勻。精密量取5 ml 的多索茶堿對照品溶液，將其置于容量為50 ml 的量瓶中，加水稀釋到指定刻度后搖勻，以備用。

2.2.4 進行線性關系試驗的方法及結果 精密稱取10.04 mg的多索茶堿對照品，將其置于容量為100 ml 的量瓶中，加水稀釋到指定刻度后搖勻。分別精密量取8 ml、7 ml、6 ml、5 ml、4 ml、3 ml、2 ml 的多索茶堿對照品溶液，將這些溶液分別置于容量為10 ml 的量瓶中，加水稀釋到指定刻度后搖勻。按照濃度由低至高的順序依次注樣進行線性回歸分析，將平均峰面積作為縱坐標，將注樣濃度作為橫坐標。結果顯示，當多索茶堿的含量在20.31 ～81.58 mg/L 區間時，呈現出良好的線性關系，其回歸方程為A=41817.592C+17698.754，相關r值=0.99993。

2.2.5 進行加樣回收率試驗的方法及結果 精密量取6 份多索茶堿陰性樣品（5 ml/ 份），將這些樣品分別置于容量為100 ml 的量瓶中。分別將60 mg、60 mg、50 mg、50 mg、40 mg、40 mg 的多索茶堿對照品加入其中，用水稀釋、溶解到指定刻度后搖勻。量取5 ml 的此溶液，將其置于容量為50 ml的量瓶中，加水稀釋并搖勻。另取一定量的多索茶堿對照品，用水稀釋、溶解為0.05 mg/ml 的多索茶堿對照品溶液，測得回收率的平均值為100.3%，RSD 值為0.56%。詳見表2。

表2 進行加樣回收率試驗的結果

2.2.6 進行樣品含量測定試驗的方法及結果 精密量取一定量的多索茶堿樣品溶液和對照品溶液，將這兩種溶液分別置于高效液相色譜儀中，按照本次試驗的色譜條件測定多索茶堿的含量，記錄主峰的面積，用外標法計算峰面積。結果顯示，多索茶堿的含量為99.1% ～100.3%，符合相關規定的要求。詳見表3。

表3 進行樣品含量測定試驗的結果

3 討論

多索茶堿注射液在生產及儲存的過程中極易產生其他物質，因此需要對其質量進行考察。本次研究采用HPLC法測定多索茶堿注射液中的有關物質及含量，使用的試驗方法主要包括破壞性試驗、回收率試驗、線性范圍試驗。結果證實，用HPLC 法測定多索茶堿注射液有關物質及含量的效果較為理想。