Ki-67在肺鱗狀細胞癌組織的表達及其與預后相關性研究

易琳 劉新福* 金得芳 司馬李杰

據統計肺癌發病率和病死率居我國所有腫瘤首位，但其發病率仍未達到最高峰［1］。根據肺癌組織學類型分類，非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）約占全部肺癌的85%，其中肺鱗狀細胞癌占NSCLC 的30%［2］。目前，對于肺鱗狀細胞癌的治療措施，以外科手術切除為主，對于不能手術的疾病只能采取細胞毒性化療和免疫治療。然而，相同的治療手段，患者預后和療效卻存在明顯差異。研究表明，在疾病進展中，腫瘤細胞在空間和時間上均處于不斷變化的狀態［3］，導致其遺傳基因及功能的多樣性，使得治療效果出現差異。本文從蛋白的層面上討論不同肺鱗狀細胞癌組織中Ki-67 的表達情況及其預后的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016 年6 月至2018 年6 月在本院收治的59 例經皮手術切除、肺穿刺活檢或經支氣管鏡活檢確診的肺鱗狀細胞癌患者的臨床資料進行回顧性分析，隨訪0～48 個月，本研究獲得南華大學附屬邵陽醫院倫理委員會批準。納入標準：（1）所有患者均行病理檢查確診且病理標本充足；（2）所有患者按美國癌癥聯合委員會（American Joint Committee on Cancer，AJCC）TMN 分期；（3）規范接受治療，病史資料保存完整。（4）總生存期（overall survival，OS）定義為從實驗入組開始至因任何原因引起死亡的時間。采用門診隨訪、電話隨訪等方式，末次隨訪時間為2020 年6 月。

1.2 免疫組化染色方法 所有肺癌組織蠟塊均制成4 μm 厚切片2 張，一張用于HE 染色，其余1 張用于免疫組化檢測Ki-67 的表達水平。免疫組織化學方法步驟：石蠟組織標本常規脫蠟至水，抗原修復，加入內源性過氧化物酶阻斷劑，滴加一抗，放置濕盒中室溫條件下孵育，滴加生物素標記二抗，放置濕盒中室溫條件下孵育，滴加DAB 顯色劑，并在濕溫盒中室溫下反應，蘇木素復染，常規脫水，透明，干燥，封片，拍照讀片。由2 位病理科高級職稱醫師在對臨床資料不知情的情況下，對標本染色結果進行判斷。

1.3 結果判定 Ki-67 判定標準：細胞核內有棕黃色顆粒為Ki-67 陽性細胞，根據目前免疫組織化學實驗中普遍采用的百分比分類。陽性細胞（細胞總數為200 個）＜60%定義為低表達，≥60%定義為高表達。

1.4 統計學方法 采用SPSS 22.0 統計軟件。計量資料以（±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數資料以n表示，分析Ki-67 表達、臨床特征之前的關系采用χ2檢驗；生存分析采用Kaplan-Meier 法進行評估；多因素分析采用Cox 風險回歸模型進行分析。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 患者的一般情況分析 排除隨訪丟失患者，本研究共納入59 例肺鱗狀細胞癌患者，其中男43 例，女16例；年齡45～80 歲，中位年齡65 歲；接受手術治療11例，接受同步放化療治療2 例，接受化療28 例，其它姑息治療方案18 例。截止最后一次隨訪，死亡33 例，其它26 例為截尾。

2.2 肺鱗狀細胞癌組織中Ki-67 的表達與臨床特征的關系 見表1。

表1 肺鱗狀細胞癌組織中Ki-67表達情況與臨床特征的關系（n）

圖1 Ki-67的表達與患者預后的關系

圖2 兩組患者2年生存率比較

2.3 肺鱗狀細胞癌組織中Ki-67 的表達與患者預后的關系 如圖1 所示，59 例肺鱗狀細胞癌患者中，Ki-67高表達組與Ki-67 低表達組的生存曲線整體Log-rank檢驗結果為P=0.007（P＜0.001），表明Ki-67 高表達與預后不良有關。

2.4 Ki-67 在肺鱗狀細胞癌組織的表達對生存率的影響 如圖2 所示，Ki-67 低表達組的2 年生存率比Ki-67高表達組提高了41%，表明ki67 表達情況與鱗狀細胞肺癌預后密切相關。

2.5 單因素和多因素Cox 風險比例模型分析 如表2所示，單因素分析結果顯示，吸煙、TMN 分期、淋巴結轉移、遠處轉移、Ki-67 表達與2 年總生存期有相關性。性別、年齡、組織學分級與2 年總生存期無相關。將上述單因素變量全部納入Cox 風險回歸模型多因素分析，結果顯示Ki-67 表達情況對肺鱗狀細胞癌生存時間有影響，高表達的死亡風險是低表達的3.265 倍，95%CI 為1.709～7.765，P=0.001。有淋巴結轉移的患者死亡風險是無轉移的4.751 倍，95%CI 為1.808～12.480，P=0.002。有遠處轉移患者死亡風險是無遠處轉移的3.060 倍，95%CI 為1.171～4.963，P=0.01。調整其它因素影響后表明，組織學分級亦是肺鱗狀細胞癌患者的獨立因素，OR=2.257，95% CI 為1.040～4.899，P=0.040。

表2 影響2年OS的單因素和多因素分析

3 討論

近年，以EGFR、ALK 靶點為代表的靶向藥物在非小細胞肺癌治療中取得巨大進展，為驅動基因陽性的非小細胞肺癌患者帶來了巨大的生存獲益［4-5］。肺鱗狀細胞癌占非小細胞肺癌的30%，但肺腺癌的高頻突變基因在肺鱗狀細胞癌內并不常見。盡管目前有大量的臨床研究，但在肺鱗狀細胞癌的治療手段仍有限。早期肺鱗狀細胞癌多無明顯臨床癥狀，大多數患者在確診時已屬晚期，失去手術機會［6］。驅動基因陰性的不可手術肺鱗狀細胞癌患者目前主要依靠化療，但是部分肺鱗狀細胞患者因不能接受化療帶來的副反應而放棄治療。因此，尋找影響肺鱗狀細胞癌的發生機制及預后相關因素用于評估患者預后、指導臨床治療、開發新治療藥物十分重要。

癌細胞增殖是影響癌癥發展的關鍵，用于評判癌細胞增殖的標記物較多，Ki-67 是目前較為肯定的核增殖標志物。Ki-67 是細胞核內分裂增殖相關蛋白［7］，由MKI-67 基因編碼，其表達在所有活動的細胞周期（G1、S、G2 和有絲分裂期），而在G0 期不表達。臨床研究表明Ki-67 增殖指數高低與腫瘤分化程度、浸潤轉移以及預后密切相關［8］。本研究數據顯示，Ki-67 的表達與患者的組織學分級、淋巴結轉移、TMN 分期有關，與文獻數據相符。有文獻［9］研究發現，當Ki-67 指數＞60%時，病情發展迅速，惡性程度高，生存期短。因此，本研究將Ki-67 指數是否≥60%作為研究臨界值進行分組。本研究中59 例肺鱗狀細胞癌患者中，Ki-67 高表達患者的2 年總生存期明顯長于Ki-67 低表達患者。Cox風險回歸模型多因素分析Ki-67 高表達組的死亡風險是低表達的3.265 倍，95%CI 為1.709～7.765，P=0.001，與文獻結果大致符合。結果說明Ki-67 表達情況對肺鱗狀細胞癌生存時間有影響。另外，本研究發現有無淋巴結轉移、有無器官轉移、組織學分級亦是肺鱗狀細胞癌患者的獨立因素。

2011 年St.Gallen 共識確定Ki-67 作為分子分型的重要標準，建議Ki-67 高表達乳腺癌患者在內分泌基礎上加化療，但不能預測療效。Ki-67 表達高低與肺鱗狀細胞癌的預后密切相關，但目前臨床尚無明確的指南及共識指導Ki-67 高表達的肺鱗狀細胞肺癌患者治療。

綜上所述，Ki-67 表達情況與肺鱗狀細胞癌的預后具有一定的關系。由于本研究為回顧性分析，可能存在信息不全面、偏倚等缺點，有必要進一步開展大宗病例研究，為預后評估及治療提供幫助。