LncRNA MIAT表達與ACS患者炎癥因子及血管內皮功能的相關性研究

高仁賢 柯樂斌 呂望 姜盈盈 林建鋒*

急性冠脈綜合征（Acute Coronary Syndrome，ACS）［1］是指一系列臨床嚴重的急性心肌缺血性疾病，主要包括不穩(wěn)定型心絞痛以及急性ST 段抬高或非ST 段抬高型心肌梗死。大量研究顯示，血管內皮損傷引起的內皮功能障礙和被激活的炎癥反應［2］在ACS 發(fā)生發(fā)展各個環(huán)節(jié)均發(fā)揮著重要作用，也是造成動脈粥樣硬化斑塊（atherosclerotic plaque，AP）不穩(wěn)定的主要因素。長鏈非編碼RNA（LncRNA）是一類轉錄長度＞200nt、不編碼蛋白的RNA，從表觀遺傳、轉錄及轉錄后翻譯等多個層面參與基因表達調控。研究發(fā)現(xiàn)其與多種疾病如冠心病（coronary heart disease，CHD）、糖尿病（diabetes mellitus，DM）、神經系統(tǒng)疾病等有關，因而在疾病診斷和靶點治療領域成為熱點［3］。LncRNA MIAT 作為一種重要的心臟相關LncRNA，盡管MIAT 特異性表達于神經系統(tǒng)，但在心臟相關基因的轉錄、翻譯、翻譯后調控起著重要的作用，已有研究表明其在心肌梗死、動脈粥樣硬化進程中起調控作用［4］。本研究旨在發(fā)現(xiàn)LncRNA MIAT 表達水平與血管內皮損傷和多種炎癥因子分泌的相關性，現(xiàn)將研究結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2018 年9 月至2019 年9 月在本院心內科住院的ACS 患者及健康對照組各100 例，所有患者均簽署知情同意書，本研究方案獲得醫(yī)院倫理委員會的批準。ACS 患者納入標準：符合內科學教材（第八版）和中華醫(yī)學會心血管病學分會發(fā)表的ACS 診斷與治療指南中關于ACS 診斷標準［5］冠脈病變，均由本院或外院冠狀動脈造影結果確診患者知情同意參與本試驗。排除標準：（1）未控制的原發(fā)性高血壓者；（2）外周血管疾病者；（3）慢性心力衰竭者；（4）甲狀腺疾病者；（5）肝、腎功能不全者；（6）并發(fā)炎癥者；（7）腫瘤患者；（8）嚴重的其他系統(tǒng)疾病者。入組對象均檢測心肌酶譜、肌鈣蛋白I、血脂、血糖、腎功能等生化指標；進行心電圖、心臟彩超、冠脈造影等輔助檢查。

1.2 ELISA 檢測外周血清炎癥因子 在研究對象治療前抽取外周靜脈血，室溫靜置3 h 后放入4℃預冷的離心機中離心3000 r/min，30 min，調整為soft 模式，收集上清液為血清。按照ELISA 檢測試劑盒說明書檢測TNF-α（abcam，ab181421）、IL-1（Thermo Fisher Scientific，KHC0011）、IL-6（abcam，ab178013）、M-CSF（abcam，ab245714）等炎癥因子及NO（abcam，ab233628）及ET-1（Thermo Fisher Scientific，EIAET1）內皮功能相關因子。

1.3 血管內皮功能測定 應用血管內皮功能測定儀（德國拜耳公司生產的HP700 血管內皮功能檢測儀）通過上臂肱動脈間接測定患者血管內皮功能，血管內皮功能測定值正常范圍0.9～1.3，＜0.9 被認定為血管內皮功能損傷。

1.4 循環(huán)lncRNA MIAT 測定 分離、純化外周血清，提取RNA，Realtime-PCR 檢測LncRNA MIAT。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 22.0 統(tǒng)計軟件包。計量資料以（±s）表示，組間及組內均數比較采用t檢驗，采用Logistic 回歸分析急性冠脈綜合征與循環(huán)LncRNA MIAT 表達水平的關系。采用Pearson 相關系數分析ACS 患者炎癥因子和內皮功能損傷與循環(huán)LncRNA MIAT 水平相關性。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 健康對照組與ACS 組生化指標比較 見表1。

表1 健康對照組與ACS組生化指標比較（±s）

表1 健康對照組與ACS組生化指標比較（±s）

指標 健康對照組（n=100） ACS 組（n=100） t 值 P 值AST（U/L） 20.12±10.34 58.74±25.10 25.610 ＜0.05 CK（U/L） 55.74±12.78 171.34±43.65 41.980 ＜0.05 CK-MB（U/L） 9.74±5.69 18.94±7.29 4.774 ＜0.05 LDH（U/L） 380.50±123.46 677.50±193.40 23.920 ＜0.05 cTNI（Ug/L） 0.08±0.02 0.61±0.13 67.400 ＜0.05 LDL-C（mmol/L） 2.14±0.69 4.23±0.53 39.940 ＜0.05血糖（mmol/L） 4.92±0.94 4.76±0.89 1.156 ＞0.05肌酐（CRE）（μmol/L） 89.12±15.64 90.12±13.64 6.041 ＞0.05尿素氮（BUN）（mmol/L） 5.32±1.64 4.89±1.87 0.342 ＞0.05

2.2 健康組和ACS 組炎癥因子分泌水平檢測 見表2。

表2 健康組和ACS組炎癥因子分泌水平檢測［pg/ml，（±s）］

表2 健康組和ACS組炎癥因子分泌水平檢測［pg/ml，（±s）］

組別 n IL-6 TNF-α IL-1 M-CSF健康對照組 100 19.12±3.34 13.89±2.12 20.26±4.22 7.63±2.76 ACS 組 100 37.42±5.12 24.51±2.29 33.91±5.81 18.71±1.49 t 值 19.00 9.961 33.77 58.43 P 值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

2.3 健康組和ACS 組血管功能及內皮功能因子檢測結果 見表3。

表3 健康組和ACS組血管功能及內皮功能因子檢測結果（±s）

表3 健康組和ACS組血管功能及內皮功能因子檢測結果（±s）

組別 n 血管內皮功能數值 NO（pg/ml） ET-1（pg/ml）健康對照組 100 1.06±0.14 80.89±16.12 50.26±5.22 ACS 組 100 0.52±0.22 51.51±20.29 73.91±5.81 t 值 35.74 19.33 51.80 P 值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

2.4 健康對照組和ACS 組外周血清lncRNA MIAT相對表達水平比較 ACS 患者組外周血清LncRNA MIAT mRNA 表達水平為（2.49±0.25），健康對照組為（1.01±0.11），差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。提示LncRNA MIAT 可能參與ACS 疾病進程。

2.5 lncRNA MIAT 表達水平與急性冠脈綜合征Logistic回歸分析 利用Logistic 回歸分析外周血清內LncRNA MIAT 表達水平與ACS 之間的關系，分析結果證明LncRNA MIAT 是ACS 的一個危險因素，OR=1.114，95%CI=1.012～1.236，P＜0.01。

2.6 LncRNA MIAT 表達水平與急性冠脈綜合征炎癥因子及內皮功能損傷相關性分析 Pearson 相關系數分析結果表明在ACS 患者中，炎癥因子IL-6、TNF-α、血管內皮ET-1 濃度與LncRNA MIAT 表達水平呈正相關，而血管內皮功能數值和NO 濃度與其呈負相關，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。提示在ACS 患者中，LncRNA MIAT 促進炎癥反應并加劇血管內皮功能損傷。

3 討論

ACS 是臨床常見的危急重癥及威脅人類健康和生命的主要死因。盡管隨著醫(yī)療科技發(fā)展，ACS 這一災難性疾病的預后有所改善，但ACS 患者的死亡發(fā)生率仍高達40%。目前認為動脈粥樣斑塊破裂或糜爛和繼發(fā)血栓形成［6］是ACS 的主要病理基礎及發(fā)病機制，但是為何不同的ACS 類型及病理類型不同，臨床表現(xiàn)差異大，ACS 的始動因素等均未明確。近年來，LncRNA 在心血管疾病中的作用逐漸成為關注的熱點［7］。LncRNA Bvht可以通過作為心血管調節(jié)基因網絡中的核心基因調節(jié)心血管病的進程［8］。LncRNA Fendrr 被證明可通過調節(jié)染色質修飾，從而影響心血管系統(tǒng)的發(fā)育［9］。此外一些LncRNA已被證明與血管緊張素II相關性疾病如冠脈粥樣硬化有相關性［10］。越來越多的研究表明，LncRNA 在心血管疾病的病理生理和發(fā)病機制中扮演著重要角色。

LncRNA MIAT 是2006 年Ishii 團隊在進行大規(guī)模病例對照研究中發(fā)現(xiàn)的染色體22q12.1 上與MI 存在密切關聯(lián)的基因［11］。研究表明氧化性低密度脂蛋白（ox-LDL）可誘導MIAT 的表達，在平滑肌細胞實驗中，利用不同濃度的ox-LDL 刺激細胞，MIAT 表達水平隨著ox-LDL 的增加而增加，結果提示LncRNA MIAT 可能參與動脈粥樣硬化病程［12］。本研究結果表明，LncRNA MIAT 表達水平是ACS 的獨立危險因素，此外在ACS 病程中，LncRNA MIAT 與IL-6、TNF-α 等炎癥因子顯著正相關，與血管內皮功能顯著負相關，提示LncRNA MIAT可能在ACS中具有促進炎癥反應和加劇內皮功能損傷的作用。

本研究結果提示LncRNA MIAT 可能是ACS 治療的潛在靶點，但LncRNA MIAT 在ACS 中參與炎癥反應和內皮損傷的具體機制尚未闡明，需進一步研究。相信隨著LncRNA MIAT 在心血管疾病分子生物學機制研究的深入，對于ACS 的發(fā)病機制和診治策略將可能提供新的認識。