福建柏實時熒光定量PCR內(nèi)參基因的選擇

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(1. 福建農(nóng)林大學園林學院，福建 福州 350002；2. 福建農(nóng)林大學林學院，福建 福州 350002)

實時熒光定量PCR（RT-qPCR）指在PCR 反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR 進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法，具有準確性高、特異性好、試驗過程簡便等特點[1-2]。熒光定量試驗結果的準確性和可靠性取決于特定引物的擴增效率、cDNA的純度以及內(nèi)參基因的穩(wěn)定性等，穩(wěn)定的內(nèi)參基因能夠使目的基因的定量分析結果準確、特異性好[3-4]。在不同植物間或同一植物不同組織部位間內(nèi)參基因的表達穩(wěn)定性有一定差異，通常會選擇在植物生命活動全過程或外界環(huán)境變化時都能表達相對穩(wěn)定、受環(huán)境影響較小的管家基因(Housekeeper gene)，如肌動蛋白(Actin)、泛素蛋白(Ubiquitin)和甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）等[5-6]。

福建柏（Fokienia hodginsii（Dunn）Henry et Thomas）為柏科福建柏屬，為我國特有種屬，分布在福建、廣東、云南、廣西等我國南部省份[7]；其樹干通直、樹型優(yōu)美、四季常青、適應性強、抗性較好、材性穩(wěn)定、結構細膩，是我國優(yōu)良的材用-景觀兩用型樹種之一。不僅如此，福建柏精油中含有多種藥用、化工價值的成分，開發(fā)利用價值高[8]。但福建柏的研究集中于混交造林、成分分析等方面，隨著研究的深入，分子生物學研究必不可少，如功能基因、轉(zhuǎn)錄因子的表達分析等研究，均涉及到使用熒光定量PCR 技術檢測目的基因的相對表達情況。本研究從福建柏轉(zhuǎn)錄組中選擇了8 個管家基因作為候選內(nèi)參基因，包括肌動蛋白-7（Actin-7，ACT7）、泛素蛋白（Ubiquitin，UBQ）、延長因子……