福建柏實時熒光定量PCR內參基因的選擇

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(1. 福建農林大學園林學院，福建 福州 350002；2. 福建農林大學林學院，福建 福州 350002)

實時熒光定量PCR（RT-qPCR）指在PCR 反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR 進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法，具有準確性高、特異性好、試驗過程簡便等特點[1-2]。熒光定量試驗結果的準確性和可靠性取決于特定引物的擴增效率、cDNA的純度以及內參基因的穩定性等，穩定的內參基因能夠使目的基因的定量分析結果準確、特異性好[3-4]。在不同植物間或同一植物不同組織部位間內參基因的表達穩定性有一定差異，通常會選擇在植物生命活動全過程或外界環境變化時都能表達相對穩定、受環境影響較小的管家基因(Housekeeper gene)，如肌動蛋白(Actin)、泛素蛋白(Ubiquitin)和甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）等[5-6]。

福建柏（Fokienia hodginsii（Dunn）Henry et Thomas）為柏科福建柏屬，為我國特有種屬，分布在福建、廣東、云南、廣西等我國南部省份[7]；其樹干通直、樹型優美、四季常青、適應性強、抗性較好、材性穩定、結構細膩，是我國優良的材用-景觀兩用型樹種之一。不僅如此，福建柏精油中含有多種藥用、化工價值的成分，開發利用價值高[8]。但福建柏的研究集中于混交造林、成分分析等方面，隨著研究的深入，分子生物學研究必不可少，如功能基因、轉錄因子的表達分析等研究，均涉及到使用熒光定量PCR 技術檢測目的基因的相對表達情況。本研究從福建柏轉錄組中選擇了8 個管家基因作為候選內參基因，包括肌動蛋白-7（Actin-7，ACT7）、泛素蛋白（Ubiquitin，UBQ）、延長因子……