粵東地區19178例宮頸樣本HPV分型及其與宮頸病變的關系

方炳雄，劉 琪，秦澤鴻，殷素華，李瑞芹，阮 杰（廣東省普寧市人民醫院 .檢驗科，.婦產科，.病理科，廣東普寧 5500；4.廣東醫科大學醫學技術學院，廣東東莞 5808）

人乳頭瘤病毒(HPV)具有嗜上皮細胞性，可導致人皮膚黏膜多種良性和惡性疾病。目前已報道多種HPV亞型，其中有 30多種亞型已證實能導致癌前病變，根據其致病性的強弱，分為高危型和低危型兩大類型，其中高危型是女性宮頸癌的主要致病因素。大多數 HPV感染無癥狀，90%感染 HPV者會自行清除病毒；另外5%～10%會重復感染和持續感染，增加患癌癥的風險[1]。研究報道全球女性每年新確診宮頸癌發病 53萬例[2]，其中我國每年宮頸癌新發病例超 13萬[3]，2015年死亡病例數為3.05萬[4]。宮頸癌早期一般無癥狀，大多數患者可通過常規篩查、HPV疫苗接種和對癌前病變治療來預防。但全球許多地區對宮頸癌的篩查不足，其仍然是全球第四常見的女性癌癥。因此，女性 HPV基因分型篩查非常重要，為 HPV疫苗開發及癌變患者早預防和早治療提供參考依據。本文收集19178例女性標本，檢測其 HPV的 21種常見亞型的感染情況，及其中8399例女性的陰道脫落細胞液基薄層細胞學檢測(TCT)，分析宮頸病變與HPV基因亞型感染之間的關系，以期為宮頸癌的早期篩查和臨床診療工作提供參考依據。

1 材料和方法

1.1 研究對象

收集2016年11月至2019年12月在我院接受HPV分型檢查的19178例女性的臨床資料為研究對象，年齡1～97歲。各年齡段受檢人數如下，≤ 20歲的442例，21～30歲的5446例，31～40歲的5595例，41～50歲的5358例，51～60歲的1739例，≥ 61歲的598例。其中8399例女性同時進行了 TCT檢查。本項目研究通過醫院的倫理委員會審批同意。

1.2 主要設備與試劑

陰道脫落細胞 DNA提取試劑盒、HPV雜交試劑盒和核酸分子快速導流雜交儀由廣東凱普生物科技有限公司提供；定性 PCR儀由杭州生物技術有限公司提供；本項目檢測范圍為 HPV 21種亞型，分別是高危型：16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66和68亞型；低危型：6、11、42、43、44和81亞型。

1.3 HPV-DNA分離提取及HPV亞型檢測

按照檢測試劑說明書的步驟進行HPV-DNA分離提取及亞型檢測。(1)DNA分離提?。菏占幍烂撀浼毎?，加入細胞裂解液，煮沸法提取 DNA；取DNA溶液進行 PCR擴增。(2)目標片段行 PCR擴增：PCR產物 4℃保溫待用。(3)導流雜交：熱變性的單鏈DNA與雜交膜上的探針雜交，進行酶反應。(4)結果判讀：顯示藍紫色為陽性，每次實驗需要質控陽性，再判讀標本結果。

1.4 細胞學檢查

應用液基細胞學檢查方法(TCT)進行女性宮頸脫落細胞形態學檢查。分類診斷結果為：(1)未見宮頸上皮病變或惡性改變(NILM)；(2)未明確診斷的非典型鱗狀上皮細胞(ASC-US)；(3)低級別宮頸鱗狀上皮內病變(LSIL)；(4)高級別宮頸鱗狀上皮內病變(HSIL)；(5)宮頸上皮細胞癌(CIN)，包括 CINⅠ、CINⅡ和CINⅢ；(6)宮頸癌，包括浸潤性宮頸癌(ICC)、鱗狀細胞癌(SCC)、腺癌(AC)和非典型腺細胞(AGC)。ASC-US以上病變為細胞學檢查陽性，其中 LSIL、HSIL、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、ICC、SCC、AC和AGC統一歸為癌變組。

1.5 統計學處理

采用SPSS19.0軟件和EXCEL2017對數據進行統計分析，計數資料用百分率表示，采用χ2檢驗比較，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HPV感染情況

19178例患者標本中，HPV陽性感染率為16.94%(3248/19178)，由于存在多重基因感染，亞型累計檢出率23.43%(4494/19178)，其中單一基因、二重基因、三重基因和四重及以上基因感染率依次為12.48%(2394/19178)、3.12%(599/19178)、0.90%(172/19178)和0.43%(83/19178)，單純高危型、單純低危型和高低?；旌闲透腥韭史謩e為12.94%、2.22%和1.77%。

2.2 HPV基因亞型分布

15種高危型HPV和6 種低危型HPV均有檢出，高危亞型和低危亞型的累計檢出率分別為81.55%(3665/4494)和18.45%(829/4494)。其中最常見的高危亞型依次是 HPV52(16.78%)、HPV16(11.53%)、HPV58(9.32%)、HPV39(6.34%)、HPV53(6.23%)和HPV18(5.43%)，最常見的低危亞型是HPV6(5.81%)和HPV81(5.18%)。具體結果如圖1 所示。

2.3 不同年齡段HPV感染情況分析

≤ 20歲、21～30歲、31～40歲、41～50歲、51～60歲和≥ 61歲的總感染率依次為37.33%、18.73%、14.37、15.02%、18.11%和23.24%?！?20歲組的總感染率、單一基因、二重基因、單純高危型及高低?；旌细腥韭示哂?1～60歲各年齡組(P＜0.01)。≥61歲組的總感染率、單一基因及單純高危型感染率均高于21～60歲年齡段(P＜0.05)。如表1 和圖2 所示。

2.4 TCT檢查結果與HPV感染的關系

TCT結果顯示，總陽性率為6.04%(507/8399)，包括非典型鱗狀上皮細胞(ASC-US)組陽性率為5.20%(437/8399)和癌變率為0.83%(70/8399)。與HPV感染關系分析發現，癌變組的 HPV感染率(71.43%)最高，ASC-US組(32.72%)的次之，宮頸正常(NILM)組(15.46%)最低，且 3組之間感染率差異均有統計學意義(P＜0.01)。3組均以高危型和單一基因感染為主，且癌變組的單一基因和高危型感染率明顯高于ASCUS組和NILM組(P＜0.05)。結果如表2 所示。

圖1 HPV基因亞型分布

表1 不同年齡段HPV感染情況例(%)

表2 8399例患者進行TCT檢測與HPV感染的關系例(%)

圖2 不同年齡段HPV感染趨勢

3 討論

HPV是一種嗜上皮細胞病毒，其持續、重復感染是宮頸癌發生的重要原因之一 [5]。早期篩查是目前預防和早期診斷宮頸癌的主要方法。在不同地區和人群中，HPV的感染率及亞型分布不同。我國經濟條件和生活習慣差異大，使得性傳播疾病和癌癥相關的 HPV感染表現出地域和人群差異。因此，為了制定適合特定地區和人群的宮頸癌防控策略，實現科學預防的目標，各地開展 HPV篩查工作及研究具有重要價值。

本文回顧性分析了粵東地區2016年11月至2019年12月進行 HPV篩查的19178例女性感染情況發現，HPV總感染率為16.94%，低于2019年韶關地區(25.32%)[6]和2020年深圳地區(29.12%)[7]。略高于2019年一項 meta分析報道的中國大陸城市女性感染率14.1%和農村女性感染率15.7%[4]。在感染形式上，本地區的單一基因、二重基因、三重基因和四重及以上基因感染率依次為12.48%、3.12%、0.90%和0.43%，單純高危型、單純低危型和高低?；旌闲透腥韭史謩e為12.94%、2.22%和1.77%，說明本地區女性 HPV感染以單一基因和高危亞型為主。所檢測的 21種基因亞型均有檢出，高危亞型和低危亞型的累計檢出率各占81.55%和18.45%，前者遠高于后者，所以更應該重視 HPV高危亞型的篩查。在陽性標本中，HPV52(16.78%)、HPV16(11.53%) 和HPV58(9.32%)構成比明顯高于其他亞型，提示這 3種高危亞型是易感型，與我國各地報道較為一致[4,6-8]。韋夢娜等[5]2020年的一項 meta分析顯示，不同級別宮頸病變中 HPV型別分布有差異，最常見的前 3位，宮頸癌中為 HPV16/18/58，CIN3和CIN2中均為HPV16/58/52，CIN1中為 HPV16/52/58，提示我們應該重點關注這3 種亞型感染的人群，加強防范和相關疫苗的研制及預防接種。

本地區研究的19178女性年齡范圍為1～97歲，其中21～60歲人數為18138人，約占95%的比例，說明該年齡段的女性對于 HPV感染的篩查意識較強，有利于宮頸病變的早發現和早治療。在本文所分的6個年齡段中，≤ 20歲組的總感染率、單一基因、二重基因、單純高危型及高低?；旌细腥韭示哂?1～60歲各年齡組(P＜0.01)?！?61歲組的總感染率、單一基因及單純高危亞型感染率均高于21～60歲年齡段(P＜0.01)。HPV感染率隨著年齡增加呈現“ U”型趨勢，即 40歲之前感染率呈下降趨勢，41歲之后感染率呈上升趨勢。提示≤ 20歲和≥ 61歲是 HPV感染的高危人群，而本地區這兩個年齡段的篩查人數僅占 5%，本文作者以往研究本地區男性HPV的感染情況，發現這兩個年齡段男性人群的篩查人數少和感染率高的情況[9]，故應該提高此類人群的早期篩查意識。

對 HPV感染篩查中的8399人同時進行了 TCT檢測，其中7892例 TCT結果顯示宮頸正常(NILM)組，437例表現為未明確診斷的非典型鱗狀上皮細胞(ASC-US)組，70例發生宮頸病變(癌變組)，病變率為0.83%。與HPV感染相關性分析發現，癌變組的HPV陽性率、高危型和單一基因感染率明顯高于ASC-US組和NILM組，各組之間的多重感染率差異無統計學意義。提示隨著宮頸病變程度的增加，HPV高危型感染陽性率呈現逐漸升高的趨勢，多重感染與疾病嚴重程度不相關。證實 HPV高危亞型感染增加了宮頸癌變的機率，與相關的研究報道一致[10]。

本文對近3 年多粵東地區進行 HPV篩查的數據分析，為了解本地區女性宮頸感染和病變提供了有用資料。研究揭示了 HPV感染在本地區女性人群較為普遍，特別是≤ 20歲和≥ 61歲年齡段的女性 HPV感染率高，這可能與女性的陰道內部微環境不穩定、正常菌群失調、造成局部免疫功能異常有關[11]，但其篩查人數少，應該提高此類人群的早期篩查意識。TCT檢查也提示宮頸病變的女性 HPV總感染率和高危亞型感染率明顯高于宮頸組織正常的女性。故在女性人群中開展 HPV感染篩查很有必要，應加強對本地區各個年齡段女性的 HPV篩查，為宮頸癌的早發現和早治療提供保障。