系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血清 25羥基維生素D 3的表達(dá)及其與自身抗體的關(guān)系

黃麗冰，皮紅泉，林啟航（廣東省東莞市東部中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東東莞 523573）

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)是一種發(fā)病原因未明的慢性系統(tǒng)性自身免疫病炎性疾病，好發(fā)于女性，目前認(rèn)為與樹突狀細(xì)胞(DC)、T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞有關(guān)。維生素 D屬于人體必需的維生素，可以調(diào)節(jié)骨和磷的代謝，維持人體的骨量平衡，防止骨質(zhì)疏松。研究發(fā)現(xiàn)，維生素 D還具有調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)的功能，對(duì) SLE的病情也有一定的調(diào)控作用[1-2]。本研究通過檢測(cè) SLE患者血清 25羥基維生素D3[25-(OH)D3]的表達(dá)水平，分析其與自身抗體的關(guān)系，為SLE的治療提供參考。

1 資料和方法

1.1 病例與分組

選取2017年6月至2019年10月 SLE患者 80例，年齡為17～65歲，平均(37.5±14.0)歲；其中男 2例，女78例，均符合美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)(ACR)1997年推薦的SLE分類診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]。根據(jù) SLE疾病活動(dòng)度評(píng)分(SLEDAI)，80例患者分為 SLE活動(dòng)期組(32例，SLEDAI≥ 10分)和SLE穩(wěn)定期組(48例，SLEDAI＜10分)。排除標(biāo)準(zhǔn)[4-5]：(1) 近1個(gè)月內(nèi)接受過糖皮質(zhì)激素治療者；(2)合并其他自身免疫性疾病者；(3)合并其他慢性疾病如高血壓、糖尿病、甲功異常性疾病等患者；(4) 近 3個(gè)月內(nèi)接受維生素 D及其類似物治療者。同時(shí)選取同期體檢健康者 80例作為對(duì)照組，其中男 5例，女 75例，年齡為15～62歲，平均(36.0±15.5)歲。3 組研究對(duì)象的性別、年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。所有參與者均簽署知情同意書。本研究獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)并監(jiān)督執(zhí)行。

1.2 方法

抽取受試者空腹靜脈血3 mL 用 EDTA抗凝管保存，6 h內(nèi)分離出血清，并于－70℃凍存，標(biāo)本收集完整后統(tǒng)一進(jìn)行25-(OH)D3及自身抗體檢測(cè)。采用化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測(cè)25-(OH)D3水平，試劑盒購于深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司；采用間接免疫熒光法檢測(cè)抗核抗體(ANA)，免疫印跡檢測(cè)ANA譜，抗核抗體檢測(cè)試劑盒購于北京和杰創(chuàng)新生物醫(yī)療有限公司；采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)量抗雙鏈DNA抗體，試劑盒購于上海科新生物技術(shù)股份有限公司。各指標(biāo)具體檢測(cè)步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

依據(jù)參考文獻(xiàn)[6]把血清25-(OH)D3濃度分為 3個(gè)層次：缺乏(＜20 μg/L)、不足(20～30 μg/L)、正常(＞30 μg/L)，比較 SLE活動(dòng)期組、SLE穩(wěn)定期組和對(duì)照組25-(OH)D3的表達(dá)情況；同時(shí)根據(jù) ANA滴度的不同將 80 例 SLE患者分為低滴度組(1:100～1:320)、中滴度組(1:1000)和高滴度組(＞1:3200)[7]，比較不同ANA滴度組間血清25-(OH)D3水平的差異。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 血25-(OH)D3水平

SLE活動(dòng)期組和SLE穩(wěn)定期組患者的血清25-(OH)D3水平均低于對(duì)照組，且SLE活動(dòng)期組降低更顯著(P＜0.01)，見表1。3組血清25-(OH)D3的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。SLE活動(dòng)期組血清25-(OH)D3缺乏的患者最多，其次是 SLE穩(wěn)定期組(P＜0.01)。見表2。

表1 3組血清25-(OH)D3水平的比較(±s，μg/L)

表1 3組血清25-(OH)D3水平的比較(±s，μg/L)

與SLE穩(wěn)定期組比較：aP＜0.01：與對(duì)照組比較：bP ＜0.01

表2 3組血清25-(OH)D3表達(dá)情況的比較例(%)

2.2 血清25-(OH)D3水平與自身抗體的關(guān)系

ANA高滴度組患者的血清25-(OH)D3水平顯著低于中滴度組和低滴度組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，見表3。根據(jù) SLE患者血清自身抗體是否陽性進(jìn)行分組，抗 Sm抗體、抗干燥綜合征 A抗體(抗SSA抗體)、抗干燥綜合征 B抗體(抗 SSB抗體)、抗線粒體抗體(抗AMA抗體)和抗核糖核蛋白抗體(抗rRNP抗體)陽性患者的25-(OH)D3水平與陰性患者比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，抗雙鏈 DNA抗體、抗核小體抗體、抗組蛋白抗體陽性患者的25-(OH)D3水平顯著低于抗體陰性患者(P＜0.05或 0.01)。見表4。

表3 不同ANA滴度組血清25-(OH)D3水平比較(±s，μg/L)

表3 不同ANA滴度組血清25-(OH)D3水平比較(±s，μg/L)

與低滴度組比較：aP＜0.01；與中滴度組比較：b P＜0.01

3 討論

SLE是一種自身免疫性炎癥性結(jié)締組織病，好發(fā)于青年女性，發(fā)病原因與遺傳、環(huán)境、雌激素等密切相關(guān)，發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，目前并無明確發(fā)病原因。SLE患者體內(nèi)的免疫功能多異常，誘導(dǎo)免疫細(xì)胞異常增生，形成大量的抗原抗體免疫復(fù)合物，引起多系統(tǒng)的慢性炎癥及組織壞死[8]。SLE患者異常的免疫反應(yīng)形成的抗原抗體復(fù)合物可沉積在皮膚、黏膜、關(guān)節(jié)以及各大重要器官中，如心、肺、腎等。目前研究認(rèn)為，SLE造成的異常免疫應(yīng)答過剩為持續(xù)的，可持續(xù)性地引起機(jī)體組織的損傷。當(dāng)前臨床主要使用激素沖擊治療來抑制免疫應(yīng)答，減輕患者組織及器官的損害[9-10]。

表4 血清25-(OH)D3水平與自身抗體的關(guān)系(±s，μg/L)

表4 血清25-(OH)D3水平與自身抗體的關(guān)系(±s，μg/L)

SLE發(fā)病的免疫應(yīng)答中，T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞占據(jù)重要地位。在免疫應(yīng)答的過程中，T 淋巴細(xì)胞出現(xiàn)數(shù)量減少以及功能下降現(xiàn)象，相反的是 B細(xì)胞功能亢進(jìn)以及過度增殖。B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的大量抗體與相應(yīng)的抗原結(jié)合，可以沉積在組織和氣管中，形成急慢性炎癥反應(yīng)，對(duì)機(jī)體造成損傷。這是目前SLE最重要的免疫應(yīng)答機(jī)制，臨床上抑制 B淋巴細(xì)胞免疫應(yīng)答的治療都取得了顯著療效[11-14]。

維生素 D為固醇類衍生物，在預(yù)防骨質(zhì)疏松、調(diào)節(jié)機(jī)體鈣磷代謝中發(fā)揮著重要的作用，同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)，維生素 D可以通過調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的增殖來影響免疫系統(tǒng)。在免疫反應(yīng)中，維生素 D活化形成1,25二羥基維生素 D3(1,25-(OH)2D3)，通過抑制胸腺基質(zhì)樹突狀細(xì)胞的分化成熟影響免疫反應(yīng)。1,25-(OH)2D3可通過對(duì) DC細(xì)胞成熟的抑制影響 T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞的增殖[15-16]。維生素 D還可以誘導(dǎo)淋巴 B細(xì)胞的凋亡及免疫球蛋白的產(chǎn)生[17]，維生素 D的缺乏可能會(huì)加重SLE患者的免疫反應(yīng)。

本結(jié)果顯示，SLE活動(dòng)期患者血清25-(OH) D3水平較SLE穩(wěn)定期患者和對(duì)照組明顯降低，說明SLE患者較正常人相比缺乏維生素 D，隨著病情的惡化，血清25-(OH)D3水平進(jìn)一步降低。原因可能如下：(1)SLE患者需使用免疫抑制劑和激素長(zhǎng)期治療，可能會(huì)造成維生素 D代謝障礙；(2)SLE患者常并發(fā)多器官損害，尤其是腎臟最常受累，容易造成腎功能不全，從而影響腎臟產(chǎn)生 1-α羥化酶，而此酶是活化25-(OH)D3必需的酶；(3)SLE患者皮膚常常對(duì)光過敏，而患者日常生活避免光照會(huì)影響人體自身維生素D 的 合成，從而使機(jī)體維生素 D合成減少。

本研究結(jié)果顯示，SLE患者 ANA滴度越高，25-(OH)D3水平越低。維生素 D的缺乏也影響患者自身抗體的表達(dá)，SLE患者抗雙鏈 DNA抗體、抗核小體抗體、抗組蛋白抗體陽性的25-(OH)D3水平低于陰性患者(P＜0.05或0.01)。AHA是 SLE的非特異性抗體，抗雙鏈 DNA 抗體、抗核小體抗體是SLE的特異性抗體，其滴度與病情有關(guān)，滴度增高提示病情加重。這可能與維生素 D的免疫調(diào)節(jié)作用有關(guān)，維生素 D缺乏，對(duì) B細(xì)胞的抑制作減弱，疾病活動(dòng)性增強(qiáng)，出現(xiàn)高滴度的DNA抗體、抗核小體抗體、抗組蛋白抗體，但 SLE的標(biāo)志性抗體抗 Sm抗體與疾病活動(dòng)度無關(guān)。

綜上所述，SLE患者普遍缺乏維生素 D，SLE活動(dòng)期指標(biāo)的水平越高，25-(OH)D3水平越低。25-(OH)D3與抗雙鏈 DNA抗體、抗核小體抗體、抗組蛋白抗體有關(guān)，能從另一方面反映 SLE患者的疾病活動(dòng)度，對(duì)SLE診療有重要價(jià)值。