β1，3-N乙酰氨基葡萄糖基轉移酶8表達與胃癌新輔助化療療效相關性研究

我國為胃癌的高發區域，流行病學研究顯示，胃癌在所有惡性腫瘤發病率中占第2位，在腫瘤相關死亡中占第3位。胃癌根治性切除術是目前唯一可能治愈胃癌的方法，但其遠期結果仍不能令人滿意。有研究報道，新輔助化療可以改善病人遠期預后。但值得注意的是部分病人對新輔助化療方案無效，不良反應明顯，因此研究反映胃癌病人新輔助化療療效的指標以準確識別可受益病人至關重要。β1，3-N乙酰氨基葡萄糖基轉移酶8（β 3GnT8）是一種新的糖基轉移酶基因，研究表明其可能介導惡性腫瘤的侵襲和轉移。國內有人報道β 3GnT8在胃癌組織中高表達，具有促進胃癌侵襲、轉移的作用，且與胃癌病人的不良預后有關。本研究評估β3GnT8表達與胃癌病人新輔助化療療效相關性，以探索胃癌病人新輔助化療療效預測因素。

1 資料與方法

1.1 一般資料

納入2013年1月至2014年7月于武漢市第一人民醫院胃腸外科住院確診為原發性胃癌的病人80例，其中男性45例，女性35例，年齡（63.37±11.06）歲，范圍為35～87歲。納入標準：年齡＞18歲；診斷符合中華人民共和國國家衛生和計劃生育委員會《胃癌規范化診療指南（試行）》；無遠隔器官轉移；行胃癌根治性切除術且獲得癌組織及癌旁組織；初次診治病人，既往未行手術、化療及放療等相關治療；預計生存時間＞1年。排除標準：無法耐受新輔助化療；伴其他類型惡性腫瘤；嚴重肝、肺、腎等重要器官功能不全。所有病人及其近親屬均已簽署知情同意書，研究符合《世界醫學協會赫爾辛基宣言》相關要求。

1.2 治療方法

本研究中，根據美國國立綜合癌癥網絡（NCCN）臨床實踐指南2011年版，病人新輔助化療方案為卡培他濱、多西他賽及奧沙利鉑（DOX方案）：第1～14天，口服卡培他濱（商品名希羅達，上海羅氏制藥有限公司，批次201004510，批號H20073023）1.0 g/m，2次/天；第1天靜脈滴注多西他賽（商品名多帕菲，齊魯制藥有限公司，批次20111324，批號H20041128）75 mg/m；第1天靜脈滴注奧沙利鉑（商品名艾恒，江蘇恒瑞醫藥股份有限公司，批次20120916，批號H20050962）130 mg/m。每個治療周期為21 d，術前化療3個周期。治療期間常規行護肝和護胃等輔助治療，降低病人不良反應。3個治療周期之后評估新輔助化療療效及不良反應發生情況。化療結束3周后行外科手術治療。

1.3 β3GnT8表達檢測

共獲得80例胃癌組織和癌旁組織樣本，采用免疫組化法檢測胃癌病人癌組織及癌旁組織中β3GnT8和基質金屬蛋白酶2（MMP-2）的表達水平。免疫組化方法參考劉振華等。以磷酸緩沖鹽溶液（PBS）代替一抗作為陰性對照，已知陽性標本作陽性對照。采用細胞染色強度和陽性細胞百分率進行評分。細胞染色強度：0分（無染色），1分（弱染色），2分（中等染色），3分（強染色）。陽性細胞百分率，0分（＜1%），1分（1%～33%），2分（＞33%～66%），3分（＞66%～100%）。蛋白表達的最終等級由染色強度評分和陽性細胞百分率評分相加計算：陽性（4～6分），陰性（0～3分）。

1.4 化療效果判定

近期療效：新輔助化療療效評估基于RECIST1.1評價標準。胃癌病人在行新輔助化療前、后分別行上腹部增強CT以對比病灶大小。療效等級分為以下四種：完全緩解：病灶完全消失；部分緩解：腫瘤長徑縮減≥30%；病變進展：腫瘤長徑增加＞20%；病變穩定：介于部分緩解與病變進展之間。病變進展定義為新輔助化療無效組，其余三種定義為有效組。遠期療效：采用電話和門診隨訪相結合的方式，新輔助化療結束后每3個月隨訪1次。了解病人的生存狀況。隨訪截止日期為2019年7月。生存時間為死亡時間（或2019年7月）與首次新輔助化療時間的差值。

2 結果

2.1 癌組織與癌旁組織

β

3GnT8、MMP

-

2的表達水平

β3GnT8在胃癌組織表達陽性率為83.75%（67例），在癌旁組織表達陽性率為30.26%（23例）。MMP-2在胃癌組織表達陽性率為81.25%（65例），在癌旁組織表達陽性率為13.16%（10例）。β3GnT8、MMP-2在胃癌組織中的陽性表達率均顯著高于癌旁組織（

χ

=45.681、72.389，

P

＜0.001）。

2.2 β3GnT8表達與胃癌臨床參數

胃癌組織β 3GnT8和MMP-2的表達與性別、年齡、腫瘤部位無關（

P

＞0.05）。β3GnT8和MMP-2在低分化、Ⅲ期、淋巴結轉移病人中表達陽性表達率增加（

P

＜0.05）。見表1。

2.3 β3GnT8表達與胃癌病人近期新輔助化療療效的關系

在所有行新輔助化療的80例胃癌病人中，完全緩解2例，部分緩解8例，疾病穩定42例，疾病進展28例。治療有效率為65.00%。β3GnT8陽性表達組新輔助化療有效率為59.70%（40/67），且明顯低于β3GnT8陰性表達組92.31%（12/13）（

χ

=5.088，

P

=0.024）。MMP-2陽性表達組新輔助化療有效率為58.46%（38/65），且明顯低于MMP-2陰性表達組93.33%（14/15）（

χ

=6.515，

P

=0.011）。

2.4 β3GnT8和MMP

-

2表達與胃癌病人總體生存相關性

Kaplan-Meier并log-rank分析顯示，β3GnT8高表達者中位生存時間為32個月，β3GnT8低表達者中位生存時間為60個月，兩組差異有統計學意義（

P

＜0.001）。MMP-2高表達者中位生存時間為28個月，MMP-2低表達者中位生存時間為60個月，兩組差異有統計學意義（

P

＜0.001）。

表1 β1，3-N乙酰氨基葡萄糖基轉移酶8（β3GnT8）、基質金屬蛋白酶2（MMP-2）表達與胃癌病人80例臨床參數關系/例（%）

2.5胃癌病人多因素Cox分析

以生存狀況為因變量（0=存活，1=死亡），表1中差異有統計學意義的變量為自變量，行多因素Cox回歸分析，發現較低分化程度、Ⅲ期、淋巴結轉移、β3GnT8陽性表達、MMP-2陽性表達可增加新輔助化療胃癌病人死亡風險。見表2。

表2 胃癌病人多因素生存分析

3 討論

大規模臨床試驗研究證實，圍術期新輔助化療可以降低病人TNM分期，改善其生存率。目前國內外的臨床指南推薦在進展期胃癌病人中應用新輔助化療，極大改善了病人治療效果。然而，由于化療的不良反應及病人的耐受性，相當一部分病人無法完成常規治療周期的新輔助化療。在接受新輔助化療的病人中，僅有約30%可以達到臨床緩解。因此識別對新輔助化療敏感的胃癌病人對于改善臨床診療十分重要。

本研究發現，胃癌組織中β3GnT8、MMP-2的表達顯著高于癌旁組織，且β3GnT8、MMP-2的表達與胃癌的分化程度、TNM分期及淋巴結轉移相關。β 3GnT8最初被稱為β3GALT7，最早從人體肺組織cDNA庫中克隆出來。既往研究提示，β3GnT8在宮頸癌組織中的表達明顯高于正常組織，隨后有人報道β3GnT8在結直腸癌、肝癌和胃癌等腫瘤中的表達明顯增強，且β3GnT8與惡性腫瘤轉移潛能之間存在相關性。在人胃癌細胞株中，MMP-2的表達可被β3GnT8調節。此外，β3GnT8介導跨膜糖蛋白147信號轉導途徑的能力已在胃癌細胞株SGC-7901中得到證實。然而，β3GnT8在胃癌侵襲中的調節機制和生化特性尚需進一步探討。劉振華等報道β3GnT8在胃癌組織中的表達較癌旁組織增高，β3GnT8可能通過調控MMP-2的表達參與胃癌的侵襲、轉移，與胃癌病人的不良預后有關。本研究結果與以上研究結果均一致。

本研究發現β3GnT8和MMP-2陽性表達組新輔助化療有效率為均明顯低于陰性表達組。進一步的分析發現，β3GnT8、MMP-2表達是新輔助化療胃癌病人長期生存的獨立影響因素，β3GnT8、MMP-2陽性表達者死亡風險增加。表明在胃癌中，β3GnT8陽性意味著新輔助化療療效受限，β3GnT8治療胃癌的一個潛在靶點。

綜上所述，胃癌組織β3GnT8表達是新輔助化療預后的獨立影響因素，β3GnT8陽性表達者化療療效差，死亡風險增加。