肝內膽管細胞癌患者血清CA199、DKK1預測淋巴結轉移的價值

王友春，陳宏偉，楊甜，馬建黨

（鄭州大學附屬洛陽中心醫院消化內科，河南 洛陽471000）

肝內膽管細胞癌（Intrahepatie cholangiocarcinoma,ICC）是發生于肝內膽管上皮細胞的原發性腺癌,在原發性肝癌中發病率僅次于肝細胞癌[1]。由于腫瘤的侵襲性,ICC患者的預后很差,晚期診斷和治療缺乏有效的選擇,與肝細胞癌比較更易發生淋巴結轉移，有臨床顯示,行淋巴結清掃顯著增加了術后并發癥發生率。因此，研究者認為對于淋巴結轉移陰性的ICC患者不應常規行淋巴結清掃凹，因此,術前診斷淋巴結轉移對術中手術方式的選擇有重要意義[2,3]。早期發現腫瘤可使手術切除作為唯一可能的治療方法，不幸的是，盡管最近成像方式和實驗室測試的發展，ICC的診斷仍然具有挑戰性，當不能提供手術時，病人往往處于晚期。此外，準確的評估疾病負擔對治療及預后至關重要。ICC特定的診斷和預后生物標志物已經成為科研人員和醫學工作者關注的焦點,Dickkopf相關蛋白1(Recombinant Dickkopf Related Protein 1,DKK1)屬于Dickkopf家族。DKK1是一種分泌蛋白，可抑制Wnt信號通路,進而在胚胎發育中起作用,已有研究表明[4]骨髓血漿和外周血中高水平的DKK1與多發性骨髓瘤患者存在溶骨病變有關。DKK1的誘導有助于由β-淀粉樣蛋白觸發的病理級聯反應，并顯著參與tau蛋白磷酸化的發展,在人類胰腺癌中，DKK1的表達降低[5]，這也意味著DKK1在該腫瘤中起著腫瘤抑制基因的作用,但對于DKK1與ICC的關系的研究較少。糖蛋白抗原199（Carbohydrate antigen 19-9,CA199）在正常胎兒中的胰腺、肝、腸等部位分布,在成年人中分布于胰腺和膽管上皮細胞等處，它是胃腸道腫瘤的相關抗原,還被認為是對胰腺癌敏感性最高的指標物[6,7]。本研究通過檢測DKK1、CA199在ICC患者血清中的表達水平,分析DKK1、CA199表達水平與ICC患者臨床特征的關系以及在預測淋巴結轉移中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年1月至2019年1月在我院治療的肝內膽管細胞癌患者103例為觀察組，納入標準：⑴均經病理學確診；⑵在我院行手術切除及聯合淋巴結清掃術；⑶患者臨床資料保存完整。排除標準：⑴術前接受過化療、放療等抗腫瘤治療；⑵合并有其他惡性腫瘤者；⑶臨床資料欠缺。同時選取健康志愿者100例作為對照組，觀察組和對照組一般資料比較見表1。

1.2 檢測方法 收集所有受試者空腹時靜脈血2ml,3500r/min離心10min，取血清置于EP管中，

表1 觀察組和對照組一般資料比較

存儲于零下-20℃冰箱中待測,采用全自動化學發光免疫分析儀檢測腫瘤標志物CA19-9水平。利用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）檢測血清中DKK1表達水平，按照DY1906試劑盒（R&D公司）說明書操作。對血清CA199、DKK1水平作ROC曲線預測患者淋巴結轉移。

1.3 統計學處理 數據分析統計采用SPSS22.0軟件，CA199、DKK1等計量資料采用均數±標準差表示，兩組間比較使用t檢驗，性別比較使用卡方檢驗，預測價值采用受試者工作特征（ROC）曲線分析。檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 二組血清CA199、DKK1水平比較 觀察組血清CA199、DKK1水平明顯高于對照組(P＜0.05)。見表2。

表2 觀察組和對照組血清CA199、DKK1水平比較

2.2 觀察組有無淋巴結轉移患者血清CA199、DKK1水平比較 有淋巴結轉移患者血清CA199、DKK1水平明顯高于無淋巴結轉移患者（P＜0.05）。見表3。

表3 觀察組有無淋巴結轉移患者血清CA199、DKK1水平比較

2.3 血清CA199、DKK1水平預測淋巴結轉移價值血清CA199、DKK1預測患者淋巴結轉移的ROC曲線下面積分別為0.665和0.765，P＜0.05，CA199、DKK1截斷值分別為247.60U/ml和3.71ng/ml，靈敏性分別為42.40%和66.70%，特異性分別為84.29%和78.57%，見圖1。

圖1 ROC曲線圖

3 討論

ICC是一種罕見但經常發生的由膽道上皮引起的高度致命的惡性腫瘤，ICC具有較高的惡性程度,相比于肝細胞癌而言,ICC淋巴結轉移的可能性更大[8],鑒于ICC發病率不斷上升及其高死亡率,早期診斷對于改善患者預后至關重要。近年來的研究進展闡明了ICC的分子和遺傳特征,為ICC的分子診斷提供了可能[9]。然而,由于缺乏足夠的敏感性和特異性,大多數現有標記的臨床適用性有限。此外,還需要對ICC進行額外的研究,以驗證和確認某些潛在標記物的臨床效用。盡管最近關于ICC診斷和預后生物標志物的研究令人鼓舞,但未來的研究需要繼續關注對ICC分子發病機制的進一步了解,以期識別具有更高診斷和預后準確性的新型分子生物標志物。根治性手術為臨床主要治療手段,但手術方式的選擇則取決于術前診斷結果,故積極開展術前檢測,意義重大。本研究旨在分析術前檢測腫瘤標志物對預測ICC淋巴結轉移的價值。

CA199是一種由正常人胰腺細胞、膽道導管細胞、胃和結腸上皮細胞自然產生的連體Lewis血型抗原。因此，在良性膽道疾病（如膽管炎、原發性膽汁性肝硬化）以及其他胃腸道癌癥（如胰腺癌和胃癌）中，它可能升高[10]。因此，大多數研究將CA199作為檢測腫瘤的生物標志物進行檢查，但其在ICC中的研究較少。

DKKl被認為是WNT通路的抑制因子,其在腫瘤中的作用亦存在爭論。有研究[11,12]表明DKK1在肺癌、肝癌、多發性骨髓瘤花在你和血清中表達上升,提示其可能與一些腫瘤的發生、轉移密切相關，DKKl可以促進多發性骨髓瘤的溶骨性損害，在肝細胞肝癌中，DKKl也可以促進癌細胞的侵襲能力。而在腎癌及部分乳腺癌中，被認為是起了抑癌作用[13]。關于DKKl在ICC中的作用未見報道。本課題的實驗證實了DKKl在ICC中高表達且預示著不良預后。本部分對DKKl促進ICC腫瘤侵襲與轉移的機制，進行了更深入的研究。

觀察組血清CA199、DKK1水平分別高于對照組,有淋巴結轉移患者血清CA 199、DKK1水平分別高于無淋巴結轉移患者。作為低聚糖類抗原，CA199主要由癌細胞合成并通過胸導管排入血液，導致外周血中CA199含量增多。它已被用于鑒別胰腺癌,胃癌和結直腸癌等的鑒別診斷。研究結果一定程度說明了CA199也可作為ICC的一項診斷標志物。有研究表明[14]CAl99水平與淋巴結轉移相關，CA199的高水平可有效預測淋巴結轉移的發生率和生存率。Wnt/βcatenin信號傳導途徑的激活在許多腫瘤的發展和進展中起重要作用,DKK1可作為該途徑的抑制劑,關于其在癌癥中的作用受到越來越多的研究。本研究發現DKK1在ICC腫瘤組織中的表達明顯高于正常人，提示它可能在ICC的發生和發展中起作用。DKK1的過度表達與惡性表型顯著相關,例如無腫瘤包膜，肺門淋巴結的轉移和分期，提示DKK1可能是參與ICC侵襲和轉移的關鍵分子。作為分泌蛋白，DKK1在一系列腫瘤患者的血清中顯著增加得到證實。血清CA199、DKK1預測患者淋巴結轉移的ROC曲線下面積分別為0.665和0.765，P＜0.05，CA199、DKK1截斷值分別為247.60U/ml和3.71ng/ml，靈敏性分別為42.40%和66.70%,特異性分別為84.29%和78.57%。CA199是一種由正常人胰腺細胞、膽道導管細胞、胃和結腸上皮細胞自然產生的連體Lewis血型抗原。因此，在良性膽道疾?。ㄈ缒懝苎?、原發性膽汁性肝硬化）以及其他胃腸道癌癥（如胰腺癌和胃癌）中，它可能升高[15,16]。因此，大多數研究將CA199作為檢測ICC的生物標志物進行檢查，發現其準確性不理想，報告的敏感性和特異性差異很大。本研究發現DKK1在ICC患者血清中顯著上調,提示DKK1在腫瘤分泌后可穩定存在于外周血中，其檢測結果更準確，因此可能成為ICC的診斷和預后判斷的一種血清學標志物。

綜上所述，ICC癌患者血清CA199、DKK1預測淋巴結轉移有一定的價值,其中DKK1預測價值較好。