固相層析法血型檢測(cè)卡初篩ABO血型錯(cuò)誤原因分析

劉福昌

（南昌市中心血站，江西 南昌330025）

固相層析法血型檢測(cè)卡是一種較為新穎獨(dú)特的血型初篩試劑,因固相層析法血型檢測(cè)卡產(chǎn)品為英科新創(chuàng)（廈門(mén)）科技有限公司獨(dú)家專(zhuān)利擁有，其使用方法和操作步驟有特別之處,尤其是與目前市場(chǎng)上的玻片法（紙板法）、試管法、微量板法和微柱凝膠法等常見(jiàn)的血型檢測(cè)方法相比,在使用和操作上，有較多的差異。我站從2018年6月份試用以來(lái)，發(fā)現(xiàn)了3例ABO血型初篩錯(cuò)誤，現(xiàn)將可能導(dǎo)致結(jié)果的不易，報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 2017年6月1日-7月31日及2018年6月1日-7月31日南昌市中心血站無(wú)償獻(xiàn)血者采前手指尖血樣和獻(xiàn)血后檢驗(yàn)留取的血樣管。

1.2 試劑 英科新創(chuàng)（廈門(mén)）科技有限公司ABO血型正定型試劑盒（固相法）(2018039051/20200322)；上海血液生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)抗A、抗B血型檢測(cè)試劑 (單克隆抗體)(20160709/20180714,201701229/20191227)；長(zhǎng)春博德生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)ABO血型反定型試劑盒紅細(xì)胞。試劑均在有效期內(nèi)使用。

1.3 儀器 檢驗(yàn)科進(jìn)行ABO血型正反定型使用儀器為美國(guó)貝克曼PK7300全自動(dòng)血型分析系統(tǒng)。

1.4 方法 ⑴2017年6月1日-7月31日采血點(diǎn)采用紙板法使用抗A、抗B血型定型試劑(單克隆抗體)對(duì)獻(xiàn)血者獻(xiàn)血前初篩ABO血型，3分鐘按照有無(wú)凝集判斷結(jié)果；⑵2018年6月1日-7月31日采血點(diǎn)采用固相層析法血型檢測(cè)卡對(duì)獻(xiàn)血者獻(xiàn)血前初篩ABO血型,主要操作為采集獻(xiàn)血者手指尖血樣，先加入血樣于血型卡S窗口，每孔加1滴（約10μl）；再加血型稀釋劑于血型卡D窗口，每孔5滴（約50μl）,1分鐘判讀結(jié)果。結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)，S孔顯色紅色為陽(yáng)性，S孔顯色變白為陰性。⑶檢驗(yàn)科對(duì)獻(xiàn)血者獻(xiàn)血后留樣的血標(biāo)本采用全自動(dòng)血型儀進(jìn)行ABO正反定型，確定其最終ABO血型。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 并運(yùn)用SPSS17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,對(duì)2017年和2018年采血點(diǎn)的獻(xiàn)血者獻(xiàn)血前兩種方法初篩ABO血型的正確率比較采用卡方檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2017年和2018年獻(xiàn)血人群ABO血型分布及ABO初篩血型和復(fù)查確定血型情況 見(jiàn)表1。

表1 2017年和2018年ABO初篩血型和復(fù)查確定血型情況

2.2 2018年6月1日至7月31日獻(xiàn)血前血液初篩共計(jì)7243例標(biāo)本，ABO血型初篩重復(fù)試驗(yàn)5例，復(fù)檢率為0.069%(5/7243)；血型初篩錯(cuò)誤3例（其中B型誤定為O型，O型誤定為AB型，O型誤定為B型各1例），初篩錯(cuò)誤率為0.041%。2017年6月1日至7月31日獻(xiàn)血前血液初篩共計(jì)6068例標(biāo)本，ABO血型初篩重復(fù)試驗(yàn)2例,復(fù)檢率為0.033%（2/6068）；血型初篩錯(cuò)誤1例（B型誤定為O型），初篩錯(cuò)誤率為0.016%。2年同期比較，雖然2018年ABO血型初篩正確率（99.959%）比2017年ABO血型初篩正確率（99.984%）有所下降（下降了0.025%），但2018年與2017年獻(xiàn)血者獻(xiàn)血前兩種方法初篩ABO血型的正確率采用卡方檢驗(yàn)相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3討論

固相免疫層析法在臨床上應(yīng)用較廣[1]，但固相層析法血型檢測(cè)卡在ABO血型初篩中的應(yīng)用文獻(xiàn)目前尚未有報(bào)道。目前在獻(xiàn)血人群血型初篩及臨床上血型鑒定應(yīng)用主要是紙板（玻片）法、試管法和微柱凝膠法[2-7]，造成無(wú)償獻(xiàn)血者血型初篩錯(cuò)誤的原因是多方面的，主要是人為和環(huán)境因素，包括有錄入錯(cuò)誤、抗原漏檢、假凝集、季節(jié)因素等[8-15]。2018年6月份我站開(kāi)始在采血點(diǎn)采用固相層析法血型檢測(cè)卡初篩獻(xiàn)血者ABO血型，排除文獻(xiàn)[8]中類(lèi)似情況確認(rèn)血型后，初篩錯(cuò)誤率（0.041%）相比2017年同期采用紙板法初篩獻(xiàn)血者ABO血型初篩錯(cuò)誤率（0.016%）有所升高，但低于各地文獻(xiàn)[10-15]調(diào)查的初篩獻(xiàn)血者血型不符率。現(xiàn)分析固相層析法血型檢測(cè)卡初篩獻(xiàn)血者ABO血型易產(chǎn)生錯(cuò)誤的原因，并提出預(yù)防糾正措施。

3.1 血型初篩錯(cuò)誤的主要原因

3.1.1 個(gè)人操作的不規(guī)范 ⑴血標(biāo)本加樣量過(guò)多或過(guò)少。加樣量過(guò)多易導(dǎo)致假陽(yáng)性，加樣量過(guò)少易導(dǎo)致假陰性。加樣量過(guò)多沖洗不干凈，判斷不明確，本研究發(fā)現(xiàn)此種現(xiàn)象而導(dǎo)致血型初篩重復(fù)試驗(yàn)4例。⑵忘記加沖洗液或反應(yīng)時(shí)間太久。過(guò)長(zhǎng)的反應(yīng)時(shí)間可導(dǎo)致沖洗不干凈或沖洗不掉的現(xiàn)象,造成假陽(yáng)結(jié)果。本研究發(fā)現(xiàn)1例反應(yīng)時(shí)間較久，未復(fù)查導(dǎo)致血型誤判。⑶試劑卡放置太長(zhǎng)時(shí)間，吸水紙上的紅細(xì)胞回流從而影響結(jié)果判斷。

3.1.2 試劑卡保存不當(dāng) 試劑卡在空氣中放置時(shí)間太長(zhǎng)或保存條件不當(dāng),試劑卡失效或受潮均可導(dǎo)致血型誤判。本研究發(fā)現(xiàn)了此種原因?qū)е卵驼`判1例，而另1例由于操作者進(jìn)行了重復(fù)試驗(yàn)，血型未造成誤判。

3.1.3 異常標(biāo)本的影響 ⑴街頭采血，遇到貧血、血液粘稠度較高、膽紅素偏高等人員時(shí)，其血液自身的問(wèn)題可導(dǎo)致結(jié)果受影響。本研究發(fā)現(xiàn)有1例獻(xiàn)血者考慮血液較粘稠，沖洗不干凈導(dǎo)致血型誤判。⑵指尖血的自凝問(wèn)題。指尖血是需要即采即用的，有個(gè)別操作者采集完指尖血后，先檢測(cè)其他項(xiàng)目，再檢測(cè)血型，指尖血采集后超過(guò)30s，已開(kāi)始凝集，再反應(yīng)1min后，會(huì)出現(xiàn)沖洗不干凈、沖洗不掉，導(dǎo)致假陽(yáng)結(jié)果。

3.1.4 試劑卡質(zhì)量問(wèn)題 血型卡壓膜不均勻，導(dǎo)致批內(nèi)差異。不同批次的血型卡上包被的抗體不一致，導(dǎo)致批間差異。

3.2 處理方法與步驟 ⑴試劑盒取出平衡至室溫后，試劑卡即拆即用。⑵由于產(chǎn)品內(nèi)吸水紙的容量是有限的,所以過(guò)多加樣會(huì)導(dǎo)致吸水紙飽和不走樣。在能保證S孔被血液全覆蓋的情況下，加樣量越少越好，8-12μl。⑶打開(kāi)測(cè)試卡,觀察吸水紙端是否有吸到紅色樣本，以此來(lái)判斷是否有加沖洗液。⑷指尖血采集后30s內(nèi)盡快檢測(cè)ABO血型項(xiàng)目，并保持確認(rèn)樣本的反應(yīng)時(shí)間為1min，勿延滯超時(shí)。⑸發(fā)現(xiàn)“1+，+/-”反應(yīng)強(qiáng)度的結(jié)果，需要進(jìn)行復(fù)測(cè)確認(rèn)標(biāo)本。對(duì)于異常標(biāo)本要配制成10%生理鹽水懸液，再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

紙板法目前廣泛應(yīng)用于ABO血型初篩，具有操作簡(jiǎn)便,結(jié)果判斷較快，但其檢測(cè)結(jié)果不易保存，且紙板易破而造成環(huán)境污染的風(fēng)險(xiǎn),而固相層析法血型檢測(cè)卡雖然目前應(yīng)用還不十分廣泛,但因其使用也簡(jiǎn)單方便，攜帶更加方便，結(jié)果判斷更加快速（1分鐘可判定結(jié)果）,檢測(cè)卡結(jié)果比紙板更方便、安全的保存等特點(diǎn)，值得在血型初篩中使用。雖然固相層析法血型檢測(cè)卡個(gè)人操作中對(duì)各步驟環(huán)節(jié)的要求較為嚴(yán)格,但只要熟悉上述分析的個(gè)人操作、試劑卡保存等主要注意事項(xiàng)及處理方法，并參見(jiàn)試劑盒中說(shuō)明書(shū)，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，能夠快速、準(zhǔn)確地進(jìn)行ABO血型初篩。在實(shí)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中如發(fā)現(xiàn)結(jié)果異常,按照說(shuō)明書(shū)標(biāo)準(zhǔn)步驟重新復(fù)驗(yàn)檢測(cè)，如復(fù)驗(yàn)結(jié)果依舊異常，可進(jìn)一步詢(xún)問(wèn)廠家解決。在實(shí)際工作中只有嚴(yán)格正確的使用及操作方法，規(guī)范個(gè)人操作，正確保存試劑，正確對(duì)待和進(jìn)一步復(fù)查有疑問(wèn)的標(biāo)本等措施，可降低血型錯(cuò)誤率的發(fā)生,建議廠家在血型檢測(cè)卡內(nèi)增加1條室內(nèi)質(zhì)控反應(yīng)線，以防血型卡由于失效而不知，導(dǎo)致誤判血型。因此，血型檢測(cè)卡對(duì)獻(xiàn)血者獻(xiàn)血前血液初篩ABO血型具有一定的推廣使用價(jià)值。