血清EB NA1-IgA,VCA-IgA,VEA-IgA對鼻咽癌診斷價值的研究

盧紹佳，吳錫輝，楊曉燕，郭仲輝

（廣州市番禺區中心醫院檢驗科，廣東廣州511400）

鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）發病具有明顯的地域特征，是我國廣東、廣西、香港等南方地區常見惡性腫瘤,近年鼻咽癌位列廣東省腫瘤發病的前幾位[1]，尤其是男性患者需要重點防治的惡性腫瘤[2]。鼻咽癌病因尚不明確，且發病部位隱蔽，臨床癥狀和體征無明顯特異性，鼻咽癌的篩查、診斷一直是個難題。鼻咽癌的發生與EB病毒（Epstein-Barr Virus,EBV）感染密切相關[3]。患者血清中產生的多種EB抗體是用來篩查和輔助診斷鼻咽癌患者常用的工具[4]。本研究使用病毒核抗原（EBNA1-IgA）、EB病毒衣殼抗原（VCA-IgA）、EB病毒早期抗原（VEA-IgA）商品化ELISA試劑盒篩查和輔助診斷番禺地區鼻咽癌患者，旨在探討其輔助診斷鼻咽癌的臨床價值。

1 資料與方法

1.1 血清（漿）標本 收集2016年7月至2017年7月在廣州市番禺區中心醫院就診并已確診的初診鼻咽癌54例。鼻咽癌的診斷標準符合：由醫生進行臨床檢查對鼻咽部的可疑病灶取活體組織,以病理診斷的金標準為依據。其中男性37例,女性17例，患者平均年齡48.37±12.59歲。另選取100例來源于本院體檢中心的健康成人作為對照組，女性50例，男性50例，平均年齡38.15±8.78歲。血清樣本無溶血、脂血、黃疸等異常。

1.2 主要試劑及儀器 EBNA1-IgA和VCA-IgA ELISA檢測試劑盒購自中山生物工程有限公司VCA-IgA試劑批號為201312050。EBNA1-IgA試劑批號為201404011-2。VEA-IgA檢測試劑盒購自歐蒙醫學實驗診斷股份公司,試劑批號為E140 307BD。自動酶標儀ELX800，型號為XMTD-8222。全自動快速立式洗板機購自鄭州基波新科技有限公司，型號為JB-1。恒溫水浴箱購自上海精宏實驗設備有限公司，型號為DK-600S。

1.3 檢測方法與結果判讀 抽取受試者外周靜脈血3ml，3500r/min，離心5min。分離出血清，置于-20℃冰箱待測。操作步驟按照各個試劑盒的說明書進行操作。取包備好對應抗原抗體的酶標板加樣，設空白、陰、陽性對照、質控各1孔,樣本孔內EBN A1-IgA和VCA-IgA加樣本稀釋液100μl和待測樣本5μl，混勻置37℃溫箱溫育30min；VEA-IgA用樣本緩沖液1:101稀釋后每孔加100μl,常溫下反應30min。溫浴完成洗板后每孔加各個試劑盒對應酶結合物100μl，溫育30min（核抗原20分鐘）,洗板。EBNA1-IgA和VCA-IgA加底物A、B各50μl每孔，37℃避光分別10min和15min顯色,加終止液50μl。VEA-IgA加底物100μl每孔，37℃避光顯色15min,加終止液100μl。酶標儀選擇450nm波長,空白孔校零，終止后30min內測取各孔OD值。酶標儀OD值校正判斷，陽性:標本S/CO值＞1.0；陰性:標本S/CO值≤1.0。

1.4 統計學方法 數據統計學方法使用SPSS20.0統計學軟件對數據進行χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 2組受檢者血清中EBNA1-IgA陽性率。2組陽性率分別為81.48%、6.00%。其χ2=91.16，P＜0.05，2組比較差異有統計學意義,見表1。

表1 不同人群感染EBNA1-IgA檢測陽性率

2.2 2組受檢者血清中EB病毒VCA-IgA檢測陽性率。分別為74.07%、7.00%,其χ2=74.40，P＜0.05,2組比較差異有統計學意義,見表2。

表2 不同人群感染VCA-IgA檢測陽性率

2.3 2組受檢者血清中EB病毒VEA-IgA檢測陽性率，分別為55.56%、3.00%，同時所得出的χ2=57.52，P＜0.05，2組比較差異有統計學意義,見表3。

表3 不同人群感染VEA-IgA檢測陽性率

2.4 2組受檢者血清中聯合三項檢測，敏感度和特異度分別是90.74%和98.00%,其χ2=124.67,P＜0.05，2組比較差異有統計學意義,見表4。

2.5 2組受檢者血清中單項抗體檢測與三項聯合檢測比較 從表5可見，單獨應用一項指標檢測鼻咽癌患者時，以NA1-IgA的敏感度最高，VEA-IgA的特異度最高。EB病毒的VCA-IgA、EBNAl-IgA、VEA-IgA聯合檢測在敏感度、特異度、準確度、陰性預測值和陽性預測值比這三項抗體單獨檢測時有明顯提高。

表4 不同人群感染抗體3項檢測陽性率

表5 抗體三項聯合檢測和單一抗體檢測的比較（%）

3 討論

鼻咽癌是發生于鼻咽粘膜的上皮性惡性腫瘤，目前的研究認為，環境與飲食、遺傳因素、EB病毒感染都與鼻咽癌的發生密切相關。鼻咽癌具有明顯的區域性和人種傾向性,中國南部發病率高[5]。鼻咽癌早期基本無癥狀，出現癥狀就醫時基本已到晚期。因此，高發區人群中的例行臨床篩查意義重大。EB病毒在鼻咽癌中是以潛伏期感染為主，恒定地表達潛伏期抗原。EBNA1是EB病毒的潛伏期的抗原，是病毒潛伏感染狀態必需的蛋白，在細胞轉化和維持狀態中起重要作用。目前在國內外逐漸推廣應用檢測EB-NAl抗原抗體作為鼻咽癌的血清學指標[6]。VCA為晚期合成的結構蛋白，存在于細胞質和細胞核中，可在宿主體內終生存在，有助于早期診斷鼻咽癌，并提示凡抗體陽性者均應定期隨訪觀察VCA，具有很高靈敏度和較好的特異性[7]。VEA提示EBV增殖活躍，是細胞進入溶解周期的信號，出現于EB感染的早期。VEAIgA由于靈敏度稍遜，限制了EA-IgA在鼻咽癌初篩中的應用，但是由于其具有極高的疾病特異性，仍然是VCA-IgA的很好的補充[8]。

與以往研究比較，程偉民[9]等測EBNA1在診斷NPC的敏感度和特異度均可達95%,而近5年內有研究顯示NA1的靈敏度和特異度都有波動，如王春陽等[10]研究結果提示靈敏度和特異度分別為78.56%、77.98%，杜滿興[11]等研究結果顯示為靈敏度88.34%、特異度96.37%。VCA-IgA和EA-IgA與NA1相似,靈敏度和特異度亦有波動，楊雪娟[12]等測其在診斷NPC的靈敏度和特異性度90.0%、89.5%。近5年有研究提示VCA-IgA診斷NPC的靈敏度和特異度分別為35.8%～81.67%、59.5%～86.67%[13,14]；羅耀凌等[15]檢測EA-IgA診斷NPC的靈敏度和特異度達75.0%、94.7%，進5年內研究提示EA-IgA診斷NPC的靈敏度和特異度分別為48.33%～68.40%、47.6%～91.67%[13,14]。本研究中EBNAl診斷NPC的靈敏度和特異度分別為81.48%、94%。VCA-IgA為74.07%、93%,EA-IgA為55.56%、97%，與以往研究比較大致相符。此3項中EBNAl靈敏度最高，而EA-IgA最低，3項特異度都達到了90%以上，說明EB病毒VCA-IgA、NAI-IgA、VEA-IgA作為鼻咽癌的血清學指標，在診斷鼻咽癌方面有很好的臨床應用價值。上訴結果中3個項目敏感度和特異度的差異,尤其是敏感度的差異可能是由于不同廠家商品化的試劑盒制作不同、受檢人群限制或是檢測人員之間的差異等多因素導致。如何提高此3項檢測質量，因具體分析本實驗室影響檢測的各個因素和環節。

鑒于上訴3項單一的抗體檢測對NPC靈敏度和特異度波動、偏低，抗體的聯合檢測是目前研究NPC診斷的主要發展方向。目前國內外有多種EB抗體聯合檢測研究多項抗體對NPC的診斷價值，而此3項在診斷鼻咽癌方面有比較廣泛的應用，均提示聯合檢測可提高其診斷的靈敏度和特異度。以往研究少有研究VCA-IgA、EBNAl-IgA、VEA-IgA聯合檢測診斷鼻咽癌效能，本研究評價3項指標聯合檢測對鼻咽癌診斷的價值。結果顯示3項指標聯合檢測時，靈敏度可達90.74%，準確度提高到84.42%，而特異性98%為最佳，說明聯合檢測有互補作用，能提高其診斷價值。本研究存在一定的局限性,尚未對其中兩項聯合檢測鼻咽癌的靈敏度和特異度進行計算,也未對不同鼻咽癌分期患者血清抗體進行分析。

綜上所述,EB病毒的VCA-IgA、EBNAl-IgA、VEA-IgA聯合檢測在靈敏度、特異度、準確度、陰性預測值和陽性預測值比這三項抗體單獨檢測時有提高。因此，可在臨床工作中推薦使用EB病毒的VCA-IgA、EBNAl-IgA、VEA-IgA聯合檢測，以更有效的輔助診斷鼻咽癌。