血清外泌體ERG、PSMA在前列腺癌患者中的表達(dá)及其預(yù)后評(píng)估價(jià)值

姜 慶

(成都上錦南府醫(yī)院 泌尿外科，四川 成都610000)

前列腺癌(PCa)是男性的一種常見惡性腫瘤，全球患PCa的人數(shù)大約占全部患癌人數(shù)的15%[1]。當(dāng)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移之后，PCa患者的存活率大幅度下降，中位生存期僅12-15個(gè)月[2]，因此及時(shí)監(jiān)測癌細(xì)胞的狀態(tài)對(duì)PCa患者有著重要的作用。前列腺特異性抗原(PSA)被廣泛的應(yīng)用于臨床PCa篩查及治療后監(jiān)測[3]。ETS相關(guān)基因(ERG)屬于E-26轉(zhuǎn)化特異性(ETS)轉(zhuǎn)錄因子，在血管生成、造血和骨骼發(fā)育等過程中起著重要作用[4]。大部分PCa患者體內(nèi)均能觀察到ERG與跨膜蛋白酶絲氨酸2(TMPRRSS2)基因的啟動(dòng)子區(qū)基因融合，因此其可能與PCa的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)[5]。前列腺特異性膜抗原(PSMA)由于其高度的特異性被認(rèn)為是PCa最好的靶抗原[6]。本研究旨在探討PCa患者血清外泌體中ERG、PSMA表達(dá)情況及對(duì)患者治療后生存情況的預(yù)后價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年7月-2019年7月期間成都上錦南府醫(yī)院收治的105例PCa患者，平均年齡(69.87±6.12)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)[7]診斷為PCa，臨床和病理資料完整的患者；②檢測本研究中涉及到的指標(biāo)前未接受內(nèi)分泌治療及抗癌治療的患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①指標(biāo)檢測期間服用過抗生素或其他影響檢測指標(biāo)變化的藥品；②合并嚴(yán)重感染、心腎等臟器損傷；③合并嚴(yán)重心血管及中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病。另選取同期良性前列腺增生患者100例，平均年齡(70.35±5.68)歲；健康志愿者95人，平均年齡(68.95±6.48)歲。

1.2 檢測指標(biāo)及方法

1.2.1分離外泌體 所有血樣均為早晨空腹采血，采集靜脈血5 ml，離心20 min，取上清，于4℃下13 000 g離心2 min，收集上清待檢。根據(jù)上海宇玫博生物科技有限公司血清外泌體抽提試劑盒說明，參考文獻(xiàn)[8]中具體方法獲得外泌體。

1.2.2檢測ERG、PSMA的表達(dá)量 按照試劑盒中說明書操作步驟提取血清外泌體中的總RNA,提取后用紫外分光光度計(jì)檢驗(yàn)，并用凝膠電泳檢測RNA的完整性；符合標(biāo)準(zhǔn)后進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，擴(kuò)增后采用RT-PCR檢測血清外泌體ERG以及PSMA在各組受試者中的相對(duì)表達(dá)量。

1.3 前列腺癌危險(xiǎn)因素等級(jí)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)

根據(jù)D’Amico等[9]提出的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)PCa患者血清PSA、Gleason評(píng)分和臨床分期將PCa分為低、中、高危三個(gè)等級(jí)，見表1。

1.4 隨訪情況

所有患者在其治療出院后均獲得1年的隨訪時(shí)間，調(diào)查并記錄患者的生存死亡情況。

表1 前列腺癌危險(xiǎn)因素等級(jí)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 三組血清外泌體ERG、PSMA相對(duì)表達(dá)量

癌癥組與疾病組的血清外泌體ERG、PSMA的相對(duì)表達(dá)量明顯高于健康組(P<0.05)；癌癥組的血清外泌體ERG、PSMA的相對(duì)表達(dá)量明顯高于疾病組(P<0.05)，見表2。

表2 三組血清外泌體ERG、PSMA相對(duì)表達(dá)量比較

2.2 不同危險(xiǎn)因素等級(jí)PCa患者的血清外泌體ERG、PSMA的表達(dá)量

PCa患者高危組的血清外泌體EGR、PSMA的表達(dá)水平明顯高于中危組和低危組(P<0.05)，中危組與低危組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見表3。

表3 不同危險(xiǎn)等級(jí)的PCa患者血清外泌體ERG、PSMA的表達(dá)量比較

2.3 不同預(yù)后的PCa患者血清外泌體ERG、PSMA的表達(dá)量

105例PCa患者中有32例死亡，存活率為69.52%；PCa患者死亡組的血清外泌體EGR、PSMA的表達(dá)水平明顯高于存活組(P<0.05)；見表4。

表4 不同預(yù)后結(jié)局PCa患者的血清外泌體ERG、PSMA的表達(dá)量比較

2.4 血清外泌體ERG、PSMA的表達(dá)量評(píng)估PCa患者預(yù)后的ROC分析

ROC分析結(jié)果顯示：血清外泌體ERG、PSMA評(píng)估PCa預(yù)后的AUC分別為0.705、0.780，95%CI分別為0.598-0.812，0.693-0.866；見圖1，表5。

表5 血清外泌體ERG和PSMA水平對(duì)PCa患者預(yù)后的效能

圖1 血清外泌體ERG、PSMA表達(dá)量對(duì)PCa預(yù)后的ROC曲線

3 討論

ERG與細(xì)胞增殖、分化、凋亡等多種生物學(xué)過程相關(guān)[10]。據(jù)報(bào)道，ERG與雄激素誘導(dǎo)的TMPRSS2基因的啟動(dòng)子區(qū)基因融合是人類前列腺癌中最常見的基因融合類型[11]，這種基因融合導(dǎo)致ERG在雌雄激素雙反應(yīng)基因TMPRSS2的5'控制區(qū)的前列腺上皮細(xì)胞異位表達(dá)[5]；并且這種融合大部分是由于TMPRSS2和ERG之間的間質(zhì)區(qū)的染色體缺失而產(chǎn)生的[10]。本研究結(jié)果顯示PCa患者的血清外泌體ERG表達(dá)量明顯高于前列腺增生患者和健康人群,因此ERG的表達(dá)水平具有PCa輔助診斷的潛在價(jià)值[12]。有報(bào)道稱TMPRSS2與ERG融合還可以促進(jìn)PCa細(xì)胞向骨骼方向遷移和侵襲[13]。本研究結(jié)果還顯示，PCa高危患者的血清外泌體EGR的表達(dá)水平明顯高于PCa中危患者，其預(yù)后的AUC為0.705，說明ERG的表達(dá)水平可以在一定程度上提示癌細(xì)胞的發(fā)展?fàn)顟B(tài)，從而起到對(duì)PCa患者的預(yù)后評(píng)估作用。

PSMA主要在前列腺上皮細(xì)胞表面表達(dá)，可作為載體參與物質(zhì)的跨膜運(yùn)輸[14]。據(jù)報(bào)道，在雄激素非依賴性、晚期和轉(zhuǎn)移性疾病中，PSMA的過表達(dá)與腫瘤進(jìn)展的階段和程度成正比；并且PSMA在良性前列腺組織中的表達(dá)遠(yuǎn)低于其在PCa組織中的表達(dá)[13]。本研究結(jié)果顯示PCa患者的血清外泌體PSMA表達(dá)量明顯高于前列腺增生患者和健康人群。此外，PSMA在前列腺增生與PCa之間的表達(dá)沒有重疊[15]，這體現(xiàn)了PSMA高度的特異性和靈敏度。本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，PCa高危患者的血清外泌體PSMA的表達(dá)水平明顯高于PCa中危患者，其預(yù)后的AUC為0.780，說明PCa患者PSMA的表達(dá)水平與腫瘤狀態(tài)關(guān)系密切，對(duì)PCa的預(yù)后評(píng)估有著重要價(jià)值。

綜上所述，血清外泌體ERG和PSMA在PCa患者的表達(dá)量明顯高于前列腺增生患者和健康人群，并且與危險(xiǎn)因素分級(jí)密切相關(guān)，可以為PCa的預(yù)后評(píng)估提供參考依據(jù)，對(duì)臨床的治療有一定借鑒價(jià)值。