檢測TNFα與PTEN在肝細胞癌中的價值研究

孔凡榮

(錦州市中心醫院 消化一科,遼寧 錦州121000)

肝細胞癌(HCC)是原發性肝癌最常見的類型，大約占所有原發性肝癌的70%-90%[1-3]。HCC的早發現、早治療是提高患者生存率的關鍵要素。Jianjun Zhu等發現，腫瘤壞死因子α(TNFα)能夠通過瞬時受體電位通道促使Ca2+從細胞外流入細胞內，從而激活鈣蛋白酶/IAP/caspase3 信號通路促進HCC細胞凋亡[4]。Hang X等發現NEDD4基因沉默將導致磷酸酶和張力蛋白同源物(PTEN)表達增加，從而使STAT3、AKT和ERK1/2表達失活，最終抑制HCC細胞生長[5]。Zhang G等實驗表明MAGI1能夠通過上調PTEN表達從而抑制HCC細胞的遷移和侵襲[6]。本試驗通過檢測HCC患者TNFα與PTEN表達水平，分析二者在HCC中的診斷價值。

1 材料與方法

1.1 組織獲取

選取錦州市中心醫院2017年10月-2019 年10月HCC病人(所有病人均為男性，年齡40歲±2.0歲)30例。取癌區、癌旁區(距癌邊緣2-5 cm)組織標本，分別記為CT(carcinoma tissue)組和PCT (para-carcinoma tissue)組。所有標本均經病理學檢查證實。

1.2 定量PCR(qRT-PCR)試驗

根據試劑盒說明書(Ambion,Austin,TX,USA)，使用Trizol裂解液提取樣本總RNA，并且逆轉錄合成 cDNA。PTEN基因的PCR反應總體系25 μl，反應條件為：95℃ 12 min，94℃ 30 s，58℃ 30 s，72℃ 45 s，共40個循環。TNFα基因的PCR反應總體系25 μl，反應條件為：94℃ 5 min，94℃ 30 s，58℃ 30 s，72℃ 30 s，共40個循環。基因引物序列見表1。PCR產物置于1.5%瓊脂糖凝膠電泳，并且使用Quantity One Imager version 4.6.2 (Bio-Rad Laboratories,Inc.,Hercules,CA,USA)對圖像進行分析。同時，選取甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)作為內參。

表1 基因引物信息

1.3 癌組織TNFα與PTEN基因表達水平與HCC臨床病理因素的關系

利用PCR技術分別檢測癌組織TNFα與PTEN基因表達水平。同時，分析TNFα與PTEN基因表達與癌組織分化和衛星灶的關系。

1.4 統計學方法

采用SPSS19.0統計學軟件進行數據分析，計量資料表示為均數±標準差(means±SD)。采用t檢驗對兩組數據進行比較，P<0.05差異有統計學意義。

2 結果

2.1 TNFα與PTEN mRNA表達水平

結果表明，與PCT組比較，CT組PTEN和TNFα mRNA表達水平均明顯降低(圖1、圖2)。

2.2 癌組織TNFα與PTEN基因表達水平與HCC臨床病理因素的關系

低分化HCC TNFα與PTEN基因表達水平明顯低于高、中分化HCC，有衛星灶HCC TNFα與PTEN基因表達水平明顯低于無衛星灶HCC，差異有統計學意義(P<0.05),見表2。

2.3 PTEN和TNFα相關性分析

PTEN和TNFα呈正相關(r=0.47,P<0.05)。

圖1 TNFα基因PCR擴增產物電泳結果

圖2 PTEN基因PCR擴增產物電泳結果

表2 TNFα與PTEN基因表達水平與HCC臨床病理因素的關系

3 討論

HCC是一種嚴重威脅人類健康的疾病，也是癌癥相關死亡第三常見的原因[2,7]，隨著環境的惡化和乙/丙肝病毒傳染率的增加，HCC的發病率逐年升高[8]。研究表明，HCC具有特定的流行病學特征，包括動態的時間趨勢、地理區域、種族和族群之間的顯著變異、性別差異和環境潛在危險因素[9]。雖然手術、放療和化療等已經被廣泛用于HCC的治療，但是其預后依舊較差[8]。此外，HCC術后高的復發率和遠處轉移率使得其5年生存率保持較低水平[10]。因此，HCC的早診斷和早治療，成為了緩解其癥狀，并且大幅改善其預后的有效措施。研究表明，TNFα是一種特異性的高效抗癌劑，可以對抗多種腫瘤[11]。Li D等發現生存素失活能夠促發TNFα的協同致死作用，從而引起HCC細胞的死亡[12]。PTEN基因突變或沉默與多種腫瘤的發生密切相關[13-14]。PTEN基因表達下調將導致腫瘤血管生成，從而促進腫瘤的增殖和發生[15]。本研究分別測定HCC癌組織和癌旁組織的TNFα和PTEN基因表達水平。結果表明，HCC癌組織TNFα和PTEN基因表達水平明顯低于癌旁組織。同時，病理分析結果顯示，癌組織TNFα和PTEN基因表達水平越低，HCC分化越低，衛星灶轉移率越高。此外，相關性分析結果顯示，PTEN和TNFα表達呈正相關。檢測TNFα和PTEN基因表達水平將有助于對HCC惡性程度和轉移潛能的評估和預測，對HCC患者的早期診斷和治療有著重要的意義。