泌尿生殖道標(biāo)本解脲脲原體和人型支原體檢測及抗菌藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果分析

殷怡華，張賢華

解脲脲原體（Ureaplasma urealyticum）和人型支原體（Mycoplasma homini）均屬柔膜體綱，是泌尿生殖道常見病原體，可引起男、女性非淋球菌性尿道炎，女性子宮內(nèi)膜炎、絨毛膜羊膜炎、不孕不育、妊娠自然流產(chǎn)，新生兒早產(chǎn)、低體重及小兒肺炎、腦膜炎等[1-3]。由于此類微生物沒有細(xì)胞壁，對(duì)青霉素、頭孢菌素β內(nèi)酰胺類，以及萬古霉素等糖肽類抗菌藥物天然耐藥。臨床常用治療藥物為四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類和喹諾酮類。近年來解脲脲原體和人型支原體耐藥株增多，臨床治療藥物選擇日益困難[4]。本研究對(duì)同濟(jì)大學(xué)附屬上海市第一婦嬰保健院連續(xù)3年泌尿生殖道標(biāo)本解脲脲原體和人型支原體培養(yǎng)鑒定及藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析總結(jié)，為臨床合理選用抗感染藥物提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 標(biāo)本來源及采集 收集2016年1月—2018年12月本院臨床常規(guī)送檢的泌尿生殖道標(biāo)本，標(biāo)本類型包括女性宮頸分泌物或男性精液。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)操作流程采集標(biāo)本。

1.1.2 試劑 采用珠海麗拓發(fā)展有限公司生產(chǎn)的支原體鑒定、藥敏試劑盒（微生物檢驗(yàn)法，生產(chǎn)許可證編號(hào)粵食藥監(jiān)械生產(chǎn)許20010312號(hào)）；試劑盒藥敏板A列和B列所含抗菌藥物終濃度見表1。

表1 藥敏板中抗菌藥物濃度Table 1 Concentration of antimicrobial agents in susceptibility testing plate

1.2 方法

1.2.1 藥敏試驗(yàn) 根據(jù)支原體鑒定、藥敏試劑盒操作說明書進(jìn)行培養(yǎng)鑒定和藥敏試驗(yàn)。藥敏結(jié)果判讀：藥敏板接種樣品后經(jīng)培養(yǎng)，培養(yǎng)液呈紅色判定為陽性，即支原體生長，黃色判定為陰性，即不生長；A列含低濃度抗菌藥物，B列含高濃度抗菌藥物，A列和B列均為黃色判定為對(duì)抗菌藥物敏感（S），A列呈紅色、B列呈黃色判定為中介（I），A列和B列均為紅色判定為對(duì)抗菌藥物耐藥（R）。

1.2.2 數(shù)據(jù)分析 采用上海佰冠信息科技有限公司的lis360軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)、分析。

2 結(jié)果

2.1 標(biāo)本培養(yǎng)陽性率及病原體分布

2016年1月—2018年12月共采集臨床標(biāo)本35 006份，其中解脲脲原體檢出率35.9%，解脲脲原體與人型支原體混合檢出率3.1%，人型支原體檢出率0.04%。解脲脲原體檢出占泌尿生殖道標(biāo)本所有分離株的92.0%（12 572/13 660），而單純檢出人型支原體者少見，僅為0.11%（15/13 660）。解脲脲原體和人型支原體的檢出結(jié)果見表2。

表2 2016—2018年泌尿生殖道人型支原體和解脲脲原體檢出及分布Table 2 Annual detection rate of Ureaplasma urealyticum and Mycoplasma hominis in urogenital tract

2.2 藥敏試驗(yàn)

藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示，單一檢出的解脲脲原體對(duì)四環(huán)素類和克拉霉素、交沙霉素的敏感率高，單一檢出的人型支原體對(duì)上述藥物敏感性也較高，但較解脲脲原體略低，解脲脲原體與人型支原體混合檢出體對(duì)四環(huán)素類和大環(huán)內(nèi)酯類的敏感性較單一檢出者低些，但對(duì)多西環(huán)素、米諾環(huán)素敏感率仍＞70%。解脲脲原體和人型支原體對(duì)喹諾酮類耐藥率均較高。藥敏試驗(yàn)結(jié)果見表3。

表3 解脲脲原體和人型支原體對(duì)12種抗菌藥物的敏感性Table 3 Susceptibility of Ureaplasma urealyticum and Mycoplasma hominis strains to 12 antimicrobial agent

3 討論

解脲脲原體和人型支原體等柔膜體綱微生物是體外能獨(dú)立生存的最小微生物。CLSI M43-A推薦的支原體培養(yǎng)及藥敏試驗(yàn)需采用液體-固體培養(yǎng)基進(jìn)行分離培養(yǎng)，然后使用肉湯微量稀釋法進(jìn)行藥敏測定。但是由于體外培養(yǎng)條件苛刻，對(duì)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)要求高，很難在臨床微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)開展。因此目前國內(nèi)各臨床實(shí)驗(yàn)室多采用支原體培養(yǎng)-藥敏一體化試劑盒進(jìn)行臨床標(biāo)本檢測。但由于此類試劑盒培養(yǎng)方法和藥敏判斷標(biāo)準(zhǔn)與CLSI M43-A推薦方法相差較大，其檢測結(jié)果與采用CLSI標(biāo)準(zhǔn)方法所獲結(jié)果可能存在一定差異，故僅可作為藥敏趨勢分析及臨床抗菌藥物選擇的有限參考[5]。本院2016—2018年送檢標(biāo)本解脲脲原體和人型支原體總檢出率為39.0%，與先前結(jié)果相比，總檢出率相仿[5]。多年的臨床檢測結(jié)果顯示，此檢測方法所獲得的結(jié)果較為穩(wěn)定[5]。

由于此類微生物沒有細(xì)胞壁，對(duì)于β內(nèi)酰胺類、糖肽類等通過抑制細(xì)胞壁合成的抗菌藥物天然耐藥。大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素類和喹諾酮類藥物為解脲脲原體和人型支原體感染的常用抗菌藥物。本研究藥敏結(jié)果顯示，單一檢出的解脲脲原體對(duì)四環(huán)素類抗菌藥物四環(huán)素、多西環(huán)素、米諾環(huán)素，大環(huán)內(nèi)酯類克拉霉素（十五元環(huán)）和交沙霉素（十六元環(huán)）的體外敏感率均≥94.3%；相較我院2013年檢測結(jié)果，解脲脲原體對(duì)多西環(huán)素和米諾環(huán)素的耐藥率略有上升，但對(duì)四環(huán)素的耐藥率下降（13.4%對(duì)4.2%）[5]。單一檢出的人型支原體對(duì)上述藥物亦較為敏感，體外敏感率≥86.7%。泌尿生殖道解脲脲原體和人型支原體對(duì)喹諾酮類藥物，尤其是對(duì)諾氟沙星、氧氟沙星具有較高的耐藥率，這與國內(nèi)相關(guān)報(bào)道結(jié)果相似[6-7]。需要注意的是，本研究所用試劑盒解脲脲原體對(duì)四環(huán)素耐藥判讀標(biāo)準(zhǔn)高于CLSI M43-A標(biāo)準(zhǔn)，故耐藥率可能被低估。

人型支原體在本研究中被單獨(dú)檢出的比例很低（0.04%），但解脲脲原體和人型支原體同時(shí)檢出比例達(dá)3.1%。臨床送檢標(biāo)本同時(shí)檢出解脲脲原體和人型支原體的報(bào)道并不少見[5，8]，提示存在解脲脲原體和人型支原體混合感染可能。盡管解脲脲原體和人型支原體混合藥敏目前沒有統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，其檢測結(jié)果對(duì)臨床預(yù)測解脲脲原體和人型支原體對(duì)抗菌藥物的敏感性仍有一定參考價(jià)值。本研究顯示解脲脲原體和人型支原體混合檢出體，對(duì)四環(huán)素類敏感性較早年有所下降[5]，但對(duì)多西環(huán)素、米諾環(huán)素敏感率仍可保持70%以上，而大環(huán)內(nèi)酯類僅有交沙霉素敏感率較高（＞70%）。解脲脲原體和人型支原體混合檢出體對(duì)喹諾酮類藥物耐藥率高，與我院早先數(shù)據(jù)相仿[5]。

總之，本研究結(jié)果顯示，泌尿生殖道標(biāo)本送檢數(shù)及支原體檢出率較早年增多，且有逐年增多趨勢，提示臨床解脲脲原體和人型支原體所致泌尿生殖道感染逐漸增多，部分患者可能存在解脲脲原體和人型支原體混合感染，值得關(guān)注。解脲脲原體和人型支原體對(duì)四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類和喹諾酮類的敏感性存在一定差異。四環(huán)素類多西環(huán)素及米諾環(huán)素和大環(huán)內(nèi)酯類中的交沙霉素對(duì)解脲脲原體或人型支原體有著較為良好的體外抗菌活性；但解脲脲原體或人型支原體對(duì)喹諾酮類藥物耐藥率高。