水溫和孵化裝置對大口黑鱸優鱸3號受精卵孵化的影響

肖善勢，張愛菊，羅偉，郝雅賓，費晨陽，周志明*

(1.浙江省淡水水產研究所中國水產科學研究院東海水產研究所浙江研究中心 農業部淡水漁業健康養殖重點實驗室浙江省淡水水產遺傳育種重點實驗室，浙江 湖州 313001； 2.湖州湖旺水產種業有限公司，浙江 湖州 313000)

大口黑鱸(Micropterussalmoides)是鱸形目、太陽魚科、黑鱸屬的一種肉食性魚類，原產美國密西西比河流域，于1983年引進中國，具有生長快速、抗病強、營養豐富且味道鮮美的特點，是我國重要的名優淡水養殖品種[1-2]。大口黑鱸優鱸3號是以大口黑鱸優鱸 1號與大口黑鱸北方亞種引進群體作為親本選育出的新品種，其生長速度更快，比優鱸1號平均提高17.1%[3]。目前，大口黑鱸人工繁殖多是半人工的形式，即自然交配產卵、人工孵化[4]，而水溫是人工孵化的關鍵因素之一。有研究[5-6]表明，水溫可通過影響孵化酶的分泌及活性來影響孵化率：過低水溫會放緩胚胎的發育速度；較高水溫會影響胚胎的分裂、分化，降低孵化酶的活性。因此，設置適宜的孵化水溫十分重要。至今，有關水溫對魚類胚胎發育影響的研究較多[7-11]，但由于大口黑鱸產黏性卵，繁殖時親魚將卵產在魚巢上，受精卵計數困難，不利于計算孵化率和出苗率，有關大口黑鱸優鱸3號最適孵化溫度的研究較少[4]。因此，本研究通過設置不同的溫度梯度和孵化裝置，探究大口黑鱸優鱸3號胚胎孵化的適宜水溫及裝置，以期為提高大口黑鱸優鱸3號孵化率和出苗率提供一定的數據參考。

1 材料與方法

1.1 受精卵的獲取

試驗在湖州湖旺水產種業有限公司的繁殖基地進行，親魚在公司溫棚中培育。受精卵的獲取采用人工魚巢、自然交配產卵的方式獲得。將兩片50 cm×30 cm的棕片用鐵絲固定在一起做成魚巢，用竹片將魚巢固定在親魚池池底，以魚巢能平鋪在池底為準。魚巢距離岸邊約1.5 m，魚巢間距1.0～1.5 m。待觀察到親魚產卵后將棕片取出，計數受精卵。

1.2 方法

試驗設20、22、24、26和28 ℃共5個孵化用水溫度梯度。孵化用水為基地沉淀池水經過濾、滅菌處理后的水，置于60 L加蓋泡沫箱中。用加熱棒進行控溫，水溫變化幅度不超過0.5 ℃。試驗開始前一天將水溫加熱到設計溫度，并開啟增氧泵24 h連續曝氣，孵化期間孵化水體溶氧在7 mg·L-1以上，pH 7.5～8.5。

取出后的棕片置于盆中，輕輕抖動棕片使黏附在其上的受精卵掉落，每300粒受精卵為一組置于泡沫箱中的孵化裝置。孵化裝置為自制孵化框(用80目篩絹網黏附在直徑25 cm的帶孔塑料筐內，框內外水體可自由交換，以保證孵化框內溶氧充足)和孵化盆(直徑20 cm的不銹鋼盆)。為避免水體溫差過大對受精卵造成的應急反應，將泡沫箱內水體溫度在2 h內緩慢從26 ℃逐步升/降到設置溫度。孵化框組和孵化盆組分別設2次和3次重復。為保證水中溶氧充足，孵化盆組每4 h換水1次，更換用水為泡沫箱中的水。計算孵化率和出苗率[12]。

1.3 數據處理

用Excel 2013和SPSS 20.0對數據進行統計分析。采用獨立樣本t檢驗和單因素方差分析，P< 0.05為差異顯著，P< 0.01為差異極顯著。

2 結果與分析

2.1 對受精卵孵化時間的影響

觀察發現，在孵化盆組中試驗4 h，26 ℃處理胚胎發育已至肌節效應期；28 ℃處理胚胎多數在肌節效應期，同時，有少量受精卵達到心跳期。試驗12 h，28 ℃處理已全部出膜；26 ℃處理發育至出膜期，僅少數未出膜；24 ℃處理胚胎處于出膜期，但未出膜數量明顯多于26 ℃處理；22 ℃處理仍處于心跳期，僅少量出膜；20 ℃處理處于心跳期，未發現出膜仔魚。試驗23 h，僅20 ℃處理少量未出膜，其他各處理均已完全出膜。孵化盆和孵化框的大口黑鱸優鱸3號受精卵在20～28 ℃水溫下均可孵化，但各溫度處理孵化所需時間不同，隨著水溫的升高仔魚出膜所需時間逐漸變短，28 ℃處理出膜最快。

2.2 對受精卵孵化率和出苗率的影響

試驗結果(圖1)顯示，2種孵化裝置的孵化率不同，整體上隨著水溫的增高，孵化率呈先升高、后降低的趨勢。除26 ℃水溫處理孵化框組孵化率高于孵化盆組外，其他各溫度下均低于孵化盆組。但獨立樣本t檢驗分析發現，孵化裝置對孵化率的影響無顯著差異。孵化盆中各溫度處理出膜仔魚在24～72 h陸續死亡，導致各溫度處理平游仔魚數量為0。孵化盆組中孵化率最大值和最小值分別出現在24和26 ℃處理，為67.3%和39.4%。

圖1 在孵化盆和孵化框裝置下不同水溫處理的孵化率

采用孵化框孵化時，20～26 ℃處理孵化率和出苗率均呈增加趨勢，在26 ℃達到最大值，分別為66.0%和62.5%(圖1～2)；在28 ℃水溫下孵化率和出苗率均最低，分別為27.2%和23.5%。多重比較發現，28 ℃處理孵化率同24和26 ℃處理孵化率之間差異顯著，其余各處理之間差異不顯著；26 ℃處理與20、22和28 ℃處理之間出苗率差異顯著，24與28 ℃處理出苗率之間差異顯著，其余各處理之間出苗率差異不顯著。

圖2 在孵化框裝置下不同水溫處理的出苗率

3 小結與討論

魚類屬于變溫動物，其整個生活史都不同程度地受到水溫的影響。水溫是決定魚類胚胎發育時間、孵化率、出苗率的重要因子。在一定水溫范圍內，胚胎發育速度與孵化水溫成正比，當水溫升高時，發育加快；而當水溫降低時則發育緩慢[13]。胡振禧等[14]研究發現，斑鱖胚胎發育最適水溫為20～26 ℃，在此溫度區間通過提高水溫可縮短孵化時間，但當水溫達28 ℃時，孵化率顯著下降。也有研究[15]報道，大口黑鱸在17～28 ℃水溫下可自然繁殖。本研究共設5個溫度處理，發現水溫在20～28 ℃時，大口黑鱸優鱸3號受精卵均可孵化，同時，溫度越高胚胎發育越快，出膜時間越短，與四川華鳊(Sinibramataeniatus)[16]、拉薩裸裂尻魚(Schizopygopsisyounghusbandi)[17]、大口黑鱸(Micropterussalmoides)[18]和條石鯛(Oplegnathusfasciatus)[19]等的胚胎發育對水溫的響應一致。由此說明，在不影響孵化率的情況下，可以適當提高水溫來縮短大口黑鱸優鱸3號受精卵孵化時間。試驗結果顯示，各溫度處理下優鱸3號孵化時數小于吳慶龍等[20-21]的研究結果。分析可能是由于以下3個原因造成：1)人工控溫使親魚池水溫保持在25 ℃上下，水溫較高；2)采集魚巢前受精卵在高水溫環境下已經開始發育；3)試驗中為避免胚胎應激反應，逐步升/降溫的過程中也可能對孵化時長造成一定的影響。

孵化盆和孵化框對孵化率的影響差異不顯著。但孵化盆組出膜仔魚陸續死亡，出苗率為0，可能是由于孵化盆水體過小，沒有形成一定的水流，單個仔魚占據的水體空間過小導致的結果；也可能是由于初孵仔魚喜側臥于魚巢[20]，而孵化盆表面過于光滑，與天然魚巢差異過大所致。說明在孵化盆中的小水體靜水條件下可進行大口黑鱸優鱸3號的受精卵孵化，但不宜作為初孵仔魚培育裝置。

試驗表明，孵化框的孵化效果較好，水溫26 ℃時孵化率和出苗率均達最大值，分別為66.0%和62.5%。24和26 ℃處理孵化率、出苗率差異不顯著，當水溫達28 ℃時孵化率和出苗率顯著低于24和26 ℃處理。馮曉宇等[4]研究認為，大口黑鱸優鱸1號孵化期間水溫可控制在20～26 ℃，最佳孵化水溫為22～24 ℃，與本研究結果基本一致，但最適孵化水溫略低于本研究的24～26 ℃，可能與大口黑鱸多次產卵有關，不同批次的受精卵質量不同。魚類胚胎孵化受孵化酶的影響，而水溫則是影響孵化酶分泌及活性的重要物理因子，在適宜水溫之內，提高水溫可刺激孵化酶的分泌、加快孵化進程，但過高的水溫會降低孵化酶的活性甚至是不可逆性的失活，導致胚胎畸形、死亡、無法出膜[22-24]。同時，較高的水溫也不利于初孵仔魚對卵黃囊的利用、生長和器官分化，導致初孵仔魚體長較短[25-27]，進而影響出苗率。因此，研究認為，24～26 ℃是大口黑鱸優鱸3號的適宜孵化溫度，在孵化時可盡量提高水溫縮短胚胎發育時間。