CCR7蛋白在肝細胞癌中的表達及臨床意義

王博，范瑞，吳光峰

（南陽市第一人民醫院 病理科，河南 南陽 473000）

肝細胞癌在全球惡性腫瘤發病率居于第5 位，死亡率居于第2 位，臨床常通過手術治療，但治療效果及預后較差，5 年內復發率約達80%［1］。因此，尋找早期即可預測肝細胞癌的標志物是目前臨床研究的重點。CC 趨化因子受體7（CCR7）具有細胞生存、類固醇激素受體活化及調節免疫等功能，為G 蛋白偶聯受體［2］。近年來有研究指出，CCR7 與惡性腫瘤的發生、發展具有密切關系［3］，提示CCR7 可能與肝細胞癌的發生及病情發展存在一定聯系。本文選取52 例肝細胞癌患者，對組織中CCR7 蛋白在肝細胞癌中的表達及臨床意義進行研究，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016 年1 月至2017 年6 月南陽市第一人民醫院收治的52 例肝細胞癌患者作為研究對象，通過手術切除癌組織及癌旁2 cm 外的正常組織，采用免疫組織化學及組織芯片技術測定CCR7表達水平。根據CCR7 蛋白在肝細胞癌組織中的高低表達情況分為高表達組34 例和低表達組18 例。其中，男性35 例，女性17 例；年齡34～68 歲，平均（53.82±6.83）歲；腫瘤最大直徑<3 cm。所有患者符合肝細胞癌診斷標準［4］，且經手術病理診斷確診，術前未接受藥物治療、放化療。本研究通過醫院倫理委員會批準。患者及其家屬簽署知情同意書。

1.2 檢測方法

組織標本用石蠟包埋后進行切片，厚度為2.5 mm，脫蠟、水化后進行抗原堿性修復，并冷卻。用磷酸鹽緩沖液（PBS）進行充分洗滌3 次，3 min/次，滴加3% 過氧化氫，室溫放置10 min 孵育。用PBS 浸洗3 次，3 min/次，將正常山羊血清封閉液滴入，室溫放置30 min；滴加50 mL/片的一抗（英國Abcam 公司），以4℃溫度過夜。PBS 浸洗3次，5 min/次，滴加50 mL/片二抗（美國Santa Cruz 公司），以37℃溫度放置30min。PBS 浸洗3次，5 min/次，滴加50 mL/片的辣根過氧化物酶標記鏈酶卵白素。PBS 浸洗3 次，5 min/次，用二氨基聯苯胺（DAB）顯色5 min。蘇木精復染，經過脫水、透明固定后，用PBS 作陰性對照。

1.3 評價指標

①肝功能分級標準［5］：A 級為血清蛋白>35 g/L，血清膽紅素<20 mg/L，無腹水、營養正常；B 級為血清蛋白30～35 g/L，血清膽紅素20～30 mg/L，少量腹水、營養尚可。②通過腫瘤細胞、間質細胞的染色深淺分為0～3 分，依次為無著色至強著色；根據陽性腫瘤細胞占比分為0～3 分，依次為<10%、10%～49%、50%～75%、>76%。CRR7 陰陽性判定：兩項相加分數0～1 分為陰性，2 分為弱陽性，3～4 分為中陽性，5～6 分為強陽性。③用灰度掃描儀分析灰度值，以肝癌組織CCR7 灰度值/對應β-actin 灰度值為CCR7 蛋白的表達量。

1.4 統計學方法

數據分析采用SPSS 25.0 統計軟件。計量資料以均數±標準差（±s）表示，比較用獨立樣本t檢驗，組內比較用配對t檢驗；計數資料以率（%）表示，比較用χ2檢驗；P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 CCR7 在肝細胞癌及癌旁組織中的表達情況

52 例患者肝細胞癌組織中CCR7 陽性率為65.38%（34/52），配對癌旁組織中CCR7 陽性率為26.92%（14/52）。肝細胞癌組織與配對癌旁組織中CCR7 陽性率比較，差異有統計學意義（χ2=15.476,P<0.001）。

2.2 CCR7 表達與臨床病理特征的關系

分析52 例患者的相關資料，CCR7 表達與性別、年齡、肝功能分級、肝硬化及乙肝病史無關（P>0.05），而與甲胎蛋白（AFP）水平、包膜完整有關（P<0.05）。見表1。

2.3 CCR7 表達與患者預后的關系

CCR7 高表達組中1 年生存率及無復發率低于低表達組，差異無統計學意義（P>0.05）。CCR7高表達組3 年生存率及無復發率低于低表達組，差異有統計學意義（P<0.05）。見表2。

表1 CCR7 表達與臨床病理特征的關系

表2 CCR7 表達與患者預后的關系 ［n(%)］

3 討論

惡性腫瘤轉移的機制較為復雜，目前包括以下三點：①種子與土壤學說，即腫瘤可在適宜的靶器官上生長發育，具有特異性；②歸巢學說，即腫瘤細胞表面具有CD44 蛋白、細胞間黏附分子1 及CCR7 等歸巢受體，可通過歸巢作用機制進入靶器官；③趨化因子學說，即類似與白細胞炎性趨化，腫瘤細胞可分泌趨化因子受體，并通過與具有特異性配體的靶器官結合，由原發灶向靶器官轉移［6-8］。因此，對肝細胞癌患者進行敏感性的分子標志物檢測，可對腫瘤預后、復發進行評估。

本研究結果顯示，52 例患者肝細胞癌組織中CCR7 陽性率高于配對癌旁組織，52 例患者中CCR7 表達與性別、年齡、肝功能分級、肝硬化及乙肝病史無關，而與AFP 水平、包膜完整有關。其中，10 例患者出現復發。CCR7 高表達組中1 年生存率及無復發率高于低表達組，但3 年生存率及無復發率低于低表達組，說明CCR7 的表達與肝細胞癌患者臨床特征具有一定的相關性，且CCR7 可能參與了肝細胞癌的轉移過程，對肝細胞癌患者的預后具有評估價值。

CCR7 主要通過淋巴細胞表達，是CC 類趨化因子受體，在不同類型的細胞上均可表達，其配體人趨化因子配體21（CCL21）主要通過淋巴器官、次級淋巴組織表達［9-10］。CCR7 與CCL21 結合后，可使細胞內肌動蛋白發生聚合反應，并且可引起鈣離子內流，形成細胞偽足［11］。另外，CCR7與CCL21 結合后可使基質金屬蛋白酶分泌增多，從而使腫瘤細胞周圍基質發生降解，促進肝細胞癌的淋巴轉移；并且還能夠促進β-1 整合素的分泌，從而促使肝癌細胞黏附于淋巴管內皮細胞，促使淋巴轉移的發生，影響肝細胞癌的預后［12-13］。

綜上所述，CCR7 的表達與肝細胞癌患者臨床特征具有一定的相關性，且CCR7 可能參與了肝細胞癌的轉移過程，對肝細胞癌患者的預后具有評估價值。