高效液相色譜法測定苦荬菜中木犀草苷和菊苣酸的含量

曾文輝，龔千鋒，廖寶源

1.江西省藥品檢查員中心贛南藥品檢查所，江西 贛州 341000；2.江西中醫藥大學，江西 南昌 330000；3.贛州市食品藥品檢驗檢測中心，江西 贛州 341000

苦荬菜Ixeris chinensis（Thunb.）Nakai 為菊科植物山苦荬、抱莖小苦荬的新鮮或干燥全草，主要分布在浙江、江蘇、廣西、貴州、福建、湖南、江西、安徽等地，具有清熱解毒，消腫排膿，涼血止血，生津止渴等功效。在《湖南省中藥材標準（2009 版）》《藏藥標準》均有收載苦荬菜，但缺少含量測定項，不足以控制其藥材質量。據文獻報道［1-3］，苦荬菜主要含有黃酮類、木質素類、萜類，此外還有有機酸類、甾醇類、苯丙素類等。相關藥理實驗表明，苦荬菜具有抗菌、抗炎保肝、抗腫瘤、降脂、降糖的功效［4-10］。苦荬菜分布廣泛，營養成分豐富，化學成分較復雜，生理活性和藥理活性較高，具有廣闊的開發利用前景［11-14］。但目前缺乏有效的質量控制，對苦荬菜的應用開發具有的一定的限制，因此，本研究在參考相關文獻［15-16］基礎上，首次建立了高效液相色譜測量苦荬菜中木犀草苷和菊苣酸含量的方法，該方法簡單準確，可以為苦荬菜的質量標準研究提供參考。

1 材料與儀器

島津LC-20AT 型高效液相色譜儀，AUW220D型電子天平（十萬分之一，日本島津公司）；BS224S型電子天平（萬分之一，Sartorius）；KQ250DB 型數控超聲波清洗器（鞏義市予華儀器有限責任公司）；KQ5200 型水浴鍋（昆山市超聲儀器有限公司）。

木犀草苷對照品（批號：111720-201810，中國食品藥品檢定研究院），菊苣酸對照品（批號：111752-201703，中國食品藥品檢定研究院），甲醇、乙腈為色譜純；水為超純水；其余試劑均為分析純。

本實驗收集到不同批次的苦荬菜樣品共14 批，樣品信息見表1，樣品經江西中醫藥大學龔千鋒教授鑒定為苦荬菜Ixeris chinensis（Thunb.）Nakai。

表1 不同批次的苦荬菜樣品信息

2 方法與結果

2.1 苦荬菜藥材供試品溶液

精密稱取苦荬菜藥材粉末（過5 號篩）0.3 g，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇25 mL，稱重，回流提取30 min，稱重補重，經0.22 μm 微孔濾膜過濾，取續濾液作為供試品溶液。

2.2 對照品溶液制備

精密稱取木犀草苷、菊苣酸對照品適量，分別加甲醇制成每1 mL 含木犀草苷0.092 mg、菊苣酸0.043 mg 的溶液。

2.3 色譜條件

色譜柱：COSMOSIL C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；以乙腈-0.1%磷酸溶液（18∶82）為流動相；檢測波長：330 nm；體積流量：1.0 mL/min，柱溫40 ℃。理論塔板數按木犀草苷計算不低于8 000，菊苣酸不低于6 000。如圖1 中A、B 圖，苦荬菜藥材供試品溶液中木犀草苷、菊苣酸分離度良好。

圖1 混合對照品（A）和苦荬菜供試品（B）色譜圖

2.4 線性關系試驗

分別精密吸取木犀草苷、菊苣酸對照品溶液按按1、3、7、10、15、20 μL 注入液相色譜儀中，按“2.3”項下色譜條件測對照品峰面積，將進樣量與峰面積進行回歸處理，回歸方程為：木犀草苷為：Y=1 574 808.465 5X-38 375.035 7，r=0.999 7（n=6），木犀草苷對照品在0.092～1.84 μg 范圍內進樣量與峰面積呈良好的線性關系；菊苣酸為：Y=2 318 633.009 0X-7 358.214 3，r=0.999 9（n=6），菊苣酸對照品在0.043～0.86 μg 范圍內進樣量與峰面積呈良好的線性關系。

2.5 精密度試驗

分別精密吸取木犀草苷、菊苣酸對照品溶液10 μL，按“2.3”項下色譜條件，重復進樣6 次，測定木犀草苷和菊苣酸峰面積值，結果顯示木犀草苷RSD 為0.13 %，菊苣酸RSD 為0.32 %。表明儀器的精密性較好。

2.6 穩定性試驗

取供試品溶液，精密吸取供試品溶液10 μL，按“2.3”項下色譜條件，按一定的間隔時間進樣，測定供試品溶液中木犀草苷和菊苣酸峰面積值，結果顯示在24 h 內木犀草苷的RSD 為0.27 %，菊苣酸的RSD 為1.35 %。表明供試品在24 h 內穩定。

2.7 重復性試驗

取已知含量苦荬菜藥材約0.3 g，共六份，照“2.1”項下實驗方法制成供試品溶液，按“2.3”項下色譜條件進行測定，計算藥材中木犀草苷和菊苣酸的含量，結果顯示，木犀草苷平均含量為7.082 3 mg/g（RSD 為0.62 %）；菊苣酸平均含量為2.522 1 mg/g（RSD 為1.45 %）。表明該方法重現性良好。

2.8 平均加樣回收率試驗

稱取已知含量的樣品約0.15 g 六份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，按100 %加入木犀草苷和菊苣酸對照品適量，按照“2.1”項下實驗方法制成供試品溶液，測定溶液中木犀草苷和菊苣酸的含量，計算回收率，結果見表2。

2.9 樣品的含量測定

取10 批不同苦荬菜藥材，分別照“2.1”項下方法平行制備供試品溶液，按“2.3”項下色譜條件進行測定，每份進樣3 次，計算木犀草苷和菊苣酸的含量，結果見表3。

表2 木犀草苷和菊苣酸的加樣回收率

表3 木犀草苷和菊苣酸含量測定結果（mg/g）

3 討論

苦荬菜已有相關的研究表明乃是藥食兩用的藥材，對保肝、抗氧化都具有一定的作用。所測成分木犀草苷和菊苣酸分屬于黃酮和酚酸類，都具有抗氧化等作用，且預實驗中發現含量較高，因而本實驗選取此兩個成分進行定量分析。在考察不同溶劑的提取以及不同的提取方法時發現70%甲醇為最佳提取溶劑，提取方式選擇回流。在流動相的選擇上，比較了乙腈-水，乙腈-冰醋酸水溶液、乙腈-磷酸水溶液，發現乙腈-0.1%磷酸水溶液對色譜峰的分離效果好。

由表3 中數據可知，木犀草苷的含量至少在3 mg/g 以上，對比不同產地的苦荬菜中的菊苣酸含量，整體上低于木犀草苷。在已報道文獻中，苦荬菜的含量測定大多數是對木犀草苷進行限量考察［15］；同時，不同產地中，木犀草苷和菊苣酸含量亦有差異，地域差異可能是導致含量異同的主要因素。因此，在臨床用藥上，為選擇藥材的來源地提供科學實驗數據。