胃癌患者血清miRNA-647水平及臨床意義

劉 倩，王宗艷

陜西省人民醫院消化二科，陜西 西安 710068

胃癌為常見的消化道腫瘤之一，具有高發病率、高病死率，嚴重威脅人類的生命健康，胃癌發生與否受生活條件、飲食習慣、幽門螺桿菌(Hp)的影響[1]。我國胃癌發病率和病死率約占全球45.0%，而診治率低于10.0%，胃癌患者就診時大多已到中晚期，所以及早進行胃癌篩查、早診早治對于胃癌患者具有重要意義，而檢測胃癌生物標志物特別是血清標志物是改善胃癌患者預后的關鍵。微小核糖核酸(miRNA)是胃癌患者血清中存在的一種腫瘤標志物，能夠調控細胞生長、凋亡[2]。本研究選取在本院行手術治療且術前未進行過放療、化療的60例胃癌患者作為研究對象，探討其血清miRNA-647水平及臨床意義，現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年6月至2019年8月在本院行手術治療且術前未進行過放療、化療的60例胃癌患者作為觀察組。納入標準：(1)癥狀及臨床診斷均符合胃癌診斷標準者；(2)臨床資料完整者；(3)患者及家屬簽署書面知情同意書。排除標準：(1)全身性疾病，包括嚴重肝、肺、心、腎功能不全者；(2)預計生存期不足3個月者；(3)嚴重精神疾病患者；(4)合并其他系統惡性腫瘤患者。同期選取本院胃潰瘍患者60例作為胃潰瘍組，以及體檢健康者60例作為對照組。觀察組男39例，女21例；年齡34～78歲，平均(56.17±5.36)歲；Hp陽性34例，陰性26例；TNM分期：Ⅰ期11例，Ⅱ期22例，Ⅲ期20例，Ⅳ期7例；病灶直徑≥5 cm 37例，<5 cm 23例；分化程度：低分化27例，中分化22例，高分化11例。胃潰瘍組男30例，女30例；年齡32～74歲，平均(55.81±5.69)歲；Hp陽性32例，陰性28例。對照組男32例，女28例；年齡35～75歲，平均(56.09±5.18)歲；Hp陽性35例，陰性25例。3組患者性別、年齡等一般資料比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。本研究經醫院倫理委員會批準。

1.2方法 空腹抽取4 mL靜脈血，室溫下放置1 h，4 000 r/min離心10 min，取1.5 mL上清液轉至無RNA酶離心管，于-80 ℃冰箱中保存。血清miRNA提取采用長沙維爾公司試劑盒，根據說明書進行操作，再根據北京康為生物公司提供的試劑盒說明書進行miRNA逆轉錄反應，反應條件：16 ℃ 30 min，42 ℃ 30 min，85 ℃ 5 min。采取TRIzol法提取總RNA，逆轉錄為cDNA，根據美國Thermo Forma公司相關試劑盒操作進行實時熒光定量PCR檢測，反應條件：95 ℃ 10 min，95 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，共40次循環。miRNA-647上游引物為5′-GCTACACAGAGGCCATTGAA-3′,下游引物為5′-TCCCGGAGTTCATCTATGTG-3′；內參GAPDH上游引物為5′-TGCGACTTCAACAGCAACTC-3′，下游引物為5′-CTTGCTCAGTGTCCTTGCTG-3′。根據2-ΔΔCt計算miRNA-647相對水平。觀察比較各組研究對象血清miRNA-647水平及其與胃癌臨床病理參數的關系。

2 結 果

2.1兩組患者血清miRNA-647水平比較 觀察組血清miRNA-647相對水平(5.06±1.48)高于胃潰瘍組(1.85±0.73)和對照組(0.97±0.49)，且胃潰瘍組高于對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)。

2.2血清miRNA-647水平與胃癌臨床病理參數的關系 血清miRNA-647水平與胃癌患者年齡、性別、分化程度等無相關(P>0.05)，與患者腫瘤大小、TNM分期、Hp感染有相關(P<0.05)。見表1。

2.3血清miRNA-647、癌胚抗原(CEA)、糖類抗原199(CA199)診斷胃癌的效能比較 ROC曲線分析顯示，血清miRNA-647診斷胃癌的曲線下面積(AUC)高于CEA、CA199。見表2。

表1 miRNA-647相對水平與臨床病理參數的關系

表2 血清miRNA-647、CEA、CA199診斷胃癌的效能比較

3 討 論

胃癌早期癥狀不明顯，容易復發、轉移，預后差，胃鏡檢查可診斷胃癌但不適應于早期胃癌篩查，而血清學標志物檢測作為新型、無創的檢測手段，對胃癌的診斷有重要意義[3]。

miRNA由19～25個核苷酸構成，為非編碼小分子RNA，長度約為22個核苷酸，可折疊形成前體轉錄物再合成為成熟的miRNA。miRNA配對結合靶mRNA致使其降解、翻譯改變蛋白質，轉錄后水平負性調節基因轉錄，在細胞生長、細胞分化、新陳代謝、增殖及凋亡等生物學進程中發揮重要的調控作用。血清miRNA與腫瘤的發生與發展有關，不同生物體、不同疾病類型、不同細胞生長周期，miRNA表達情況不同。在乳腺癌、肝癌、結腸癌等惡性腫瘤中miRNA-647水平較同，而關于胃癌組織miRNA-647水平的研究較少，調控機制尚不明確。有研究表明，胃癌組織miRNA-223水平較癌旁組織明顯升高[4]。血清miRNA的來源有3種：凋亡細胞破損后釋放；外泌體、穿梭囊泡運輸，細胞膜包裹傳導；分泌中與RNA結合蛋白結合后釋放。miRNA可長期儲存于人體血清、血漿中，可適應酸堿變化、溫度變化。不同惡性腫瘤特異性miRNA不同，起源的組織或器官可由低分化腫瘤組織的miRNA水平確定，miRNA是檢測惡性腫瘤的理想血清標志物[5]。

本研究結果顯示，觀察組血清miRNA-647水平顯著高于胃潰瘍組和對照組(P<0.05)，說明miRNA-647水平在胃癌患者血清中較胃潰瘍患者和體檢健康者明顯升高。本研究結果還顯示，血清miRNA-647水平與胃癌患者年齡、性別、分化程度等無相關性(P>0.05)，與患者腫瘤大小、TNM分期、Hp感染有相關(P<0.05)，這與徐娟等[6]、周欣亮等[7]研究結果一致。

綜上所述，血清miRNA-647水平與胃癌腫瘤大小、TNM分期、Hp感染有關，對胃癌有較好的診斷效能。