質量控制對免疫組化病理技術制片質量的影響

吉莉莉

免疫組化病理技術制片為很多疾病檢測提供幫助，技術水平日益提升[1]。像腫瘤惡性病變、良性病變等在免疫組化病理技術制片的幫助下都取得了較大成績，臨床檢驗、診斷、治療效率變高。但免疫組化病理技術制片過程中依然存在著較多問題，成為檢驗中的困擾，像制片質量不佳等，會降低檢驗準確性，免疫組化病理技術制片也成為檢驗重點關注對象，檢驗人員也根據實際工作對制片進行改善。質量控制后免疫組化病理技術制片比傳統方法制片更高效，切片質量從多方面進行保障，切片污染、樣本質量不佳等較少發生[2]。質量控制對制片流程進行要求，切片選擇、樣本提取、試劑使用/選擇等都變的更嚴格，免疫組化病理技術制片水平被提高，制片良好率上升，報道如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選擇2018年3月—2019年4月住院的42例患者進行本次研究，遵循擲硬幣法均分為參照組和觀察組，各21 例。所有患者或家屬皆簽署了知情同意書，且經由醫院倫理委員會批準。參照組有17例男和4 例女，年齡均值（47.19±11.98）歲，包括6 例肝類疾病、10 例胃腸道相關疾病、5 例泌尿系統相關疾病。觀察組有14 例男和7 例女，年齡均值（47.82±12.46）歲，包括9 例肝類疾病、5例胃腸道相關疾病、7 例泌尿系統相關疾病。兩組基線資料差異無統計學意義（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 參照組 傳統方法制片：樣本固定：從組織樣本提取開始計時，30 分鐘內必須放置到固定液中，用超過固定液體積4 ～10倍的甲醛溶液（生產廠商：浙江普洛康裕制藥有限公司；批準文號：國藥準字H20065487；規格：15 mL/瓶）（濃度為10%）對組織樣本固定8 ～24 小時。抗原修復：以熱修復法為主，溫度要在100℃以上，修復時間為3 ～15 分鐘，修復液pH 值為7.5 ～8.5。脫蠟處理：試劑添加時要均勻操作，避免邊緣效應，試劑面積要超出切片組織界線0.05 ～0.35 cm，對浸液溫度和烘烤切片溫度要進行控制，直到封固完成。

1.2.2 觀察組 質量控制免疫組化病理技術制片：（1）常溫下先將組織樣本制作成脫蠟切片，控制好浸泡在雙氧水中的時間，一般20 分鐘，雙氧水（生產廠商：廣東恒健制藥有限公司；批準文號：國藥準字H44023919；規格：500 mL/瓶）濃度為3%，時間到達后用磷酸鹽（生產廠商：福安藥業集團煙臺只楚藥業有限公司；批準文號：國藥準字H37020894；規格：1 mL）對切片進行沖洗，每次5 分鐘，共進行3 次。（2）將700 mL 檸檬酸緩沖液（生產廠商以上海遠慕生物科技公司為主；未查到生產批號，此種緩沖液可以用檸檬酸等材料自行配比，一般規格在500 mL）（pH 值控制在6.0）放在1 000 mL 容積的燒杯中加熱，再放入標記好的細胞角蛋白19（Cytokeratin 19，CK19）、Ki-67、乙型肝炎核心抗原（hepatitis B core antigen，HBcAg）等抗體，燒杯加熱至沸騰15 min 后，往每個切片中滴入相應抗體，將切片放置在4℃的冰箱中進行孵育。（3）用磷酸鹽沖洗液（phosphate buffered saline，PBS）沖洗液（pH 值為7.4）開始沖洗切片，每次5 分鐘，共進行3 次。（4）常溫下為每個切片滴入抗溶液并孵育15 min，再用PBS 沖洗，每次5 min，連續3 次。（5）將切片放到二氨基聯苯氨（diaminobezidine，DAB）顯色劑中5 ～10 min 后用蘇木精進行襯染和水洗，完成后進行封固。

表1 兩組的制片良好率對比

1.3 觀察指標

統計兩組的制片優良例數，生成制片良好率。統計并比較兩組的制片平均時間、誤差率等相關情況。

1.4 統計學分析

數據處理使用SPSS 19.0 統計學軟件，計數資料制片良好率用χ2檢驗，采用（%）表示，相關情況用（±s）表示，計量資料采用t檢驗，檢驗水準α=0.05，P＜0.05 表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 比較兩組的制片良好率

控制后，參照組制片良好率較低，差異具有統計學意義（P＜0.05）。詳見表1。

2.2 對比兩組的相關情況

控制后，參照組和觀察組的制片平均時間分別為（1.95±0.36）d 和（0.97±0.22）d，比值為（t=10.645，P=0.000）；參照組和觀察組的誤差率分別為（8.98±3.46）%和（4.07±2.53）%，比值為（t=5.249，P=0.000），觀察組相關情況更好，差異具有統計學意義。

3 討論

免疫組化病理技術制片對轉移癌來源、腫瘤預后、臨床用藥、正確診斷等提供幫助[3]。免疫組化病理技術制片雖較常用，但樣本固定不當、溫度控制不到位等容易導致檢測失敗，誤差明顯，制片質量變差，影響診斷結果。質量控制后免疫組化病理技術制片比傳統方法制片質量更好，操作更嚴謹，流程更清晰[4]。質量控制對免疫組化病理技術制片要求更細膩，制片方式被改善，抗體選擇更明確。質量控制后免疫組化病理技術制片編號清晰、樣本固定效果變佳、切片中氣泡、刀痕等不明顯或不存在，顯微鏡觀察效果好。有效控制免疫組化病理技術制片需要管理層和檢查人員共同執行才能發揮出巨大效力，本次研究中的質量控制以具體操作方法呈現，簡明扼要的規范了免疫組化病理技術制片流程，讓樣本提取、試劑處理等操作都更直觀，制片中的失誤點被規避[5]。控制好免疫組化病理技術制片質量從操作角度保障了檢查人員對樣本提取、檢驗需求的分析、解決能力，加強檢查人員對免疫組化病理技術制片的要求，減少制片中的問題。像病變組織壞死、變形；樣本組織位置描述等在質量控制后較少出現。檢查人員在接收到樣本后能對相關問題進行思考，直接將其制作成切片，縮短樣本到保存的時間，樣本活性、形狀等得到良好保存，減少環境因素對樣本的影響，降低樣本污染率[6]。質量控制對樣本切片問題也進行了改善，將組織樣本提取后脫蠟處理制作成切片，保障了組織樣本的活性，且通過雙氧水浸泡等處理，樣本保存時間更長，而且能在切片中有效固定，后續染色、觀察等質量更佳[7]。如果按照傳統方法制片，固定環節需要8 ～24 h，樣本在固定液中的活性、分解、抵抗等會發生變化，像組織樣本中的蛋白質，會在組織液中進行分解等，釋放二氧化碳、水、尿素等，在后續處理中會增加切片中的氣泡、水分等，樣本組織性狀、形態也容易與提取時不同，這樣完成的制片會出現較大誤差，臨床無法結合其他檢查結果對患者病情進行判斷，用藥準確性受到影響[8]。質量控制對免疫組化病理技術制片中的抗體、試劑等使用進行規范，控制好使用種類、時間、次數等，減少試劑過多停留對切片的影響，讓染色順利進行。質量控制較好的規避了免疫組化病理技術制片對溫度的要求，讓切片制作盡可能在常溫下完成，減少切片出現假陽性的情況[9]。切片孵育良好，能避免染色劑對切片的污染，提高染色質量。在顯微鏡觀察中切片中的抗體會清晰顯示，檢查結果能根據抗體標記找到對應抗原，檢查質量變高[10]。質量控制后免疫組化病理技術制片變得清晰明了，從樣本提取到完成封固都有詳細的步驟，檢查人員可按照規范進行操作，加快制片效率，減少樣本提取到制片完成后的時間，盡可能在一天內完成制片和后續檢測。質量控制對免疫組化病理技術制片提供質量保障，從樣本提取、脫蠟、抗體處理、孵育、沖洗等多個方面保障樣本在切片中的良好性，縮短制片時間，降低誤差率[11]。質量控制后影響免疫組化病理技術制片的因素變少，制片質量受到更好的保護，檢查效率變高，免疫組化病理技術制片為臨床檢查、診斷可提供更多支持，減少反復制片、檢測率。質量控制后免疫組化病理技術制片良好率不斷上升，提高制片有效性[12-13]。經過本次研究發現，控制后，參照組制片良好率較低；觀察組相關情況更好，差異具有統計學意義（P＜0.05）。說明質量控制加強對免疫組化病理技術制片的要求具有深遠意義，在保障制片質量的前提下提高制片效率。

綜上所述，質量控制可提高免疫組化病理技術制片質量，提高制片良好率，縮小誤差率。