特發(fā)性肛門瘙癢癥患者直腸黏膜感覺(jué)受體表達(dá)情況研究

徐利，代群，何孝康，李敏

本研究背景：

雖然特發(fā)性肛門瘙癢癥為肛腸外科醫(yī)生與皮膚科醫(yī)生所熟悉，但其發(fā)病機(jī)制目前尚不明確。引起特發(fā)性肛門瘙癢癥的原因有很多，涉及糞便稀疏、糞便污濁、直腸肛門抑制反射過(guò)度導(dǎo)致肛門括約肌松弛等，這些廣泛但有時(shí)相互矛盾的病因?qū)W表明特發(fā)性肛門瘙癢癥的病因、病理生理機(jī)制復(fù)雜多樣。

本研究創(chuàng)新性及價(jià)值：

本研究采用免疫組化、實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）對(duì)特發(fā)性肛門瘙癢癥患者直腸黏膜感覺(jué)受體進(jìn)行定性檢測(cè)與定量分析，發(fā)現(xiàn)其瞬時(shí)感受器電位香草酸受體1（TRPV1）、5-羥色胺（5-HT）明顯升高，其直腸順應(yīng)性降低、感覺(jué)閾值升高可能與TRPV1、5-HT的過(guò)表達(dá)有關(guān)，并可能是由于直腸黏膜感覺(jué)傳遞中遞質(zhì)敏化或表型改變所致，這一推斷不僅可初步解釋特發(fā)性肛門瘙癢癥患者多伴有肛門潮濕、滲漏、墜脹感，瘙癢多在排便后或夜間加劇的原因，也為深入研究特發(fā)性肛門瘙癢癥的病理生理機(jī)制奠定了分子生物學(xué)基礎(chǔ)。

特發(fā)性肛門瘙癢癥是臨床常見(jiàn)肛周疾病之一，患者通常僅有肛周瘙癢癥狀而無(wú)特定病理因素。很多特發(fā)性肛門瘙癢癥患者經(jīng)常抱怨糞便刺激后肛門瘙癢癥狀加重，同時(shí)盡管多數(shù)特發(fā)性肛門瘙癢癥患者肛門括約肌并未受到任何損傷，但仍有很多患者可能會(huì)出現(xiàn)肛門潮濕、肛門墜脹感等直腸感覺(jué)閾值異常現(xiàn)象及低擴(kuò)張容積、低直腸順應(yīng)性、直腸高壓等，進(jìn)而引發(fā)直腸收縮。因此，導(dǎo)致特發(fā)性肛門瘙癢癥患者肛門潮濕、肛門墜脹感的原因除與肛管括約肌功能失調(diào)有關(guān)外，還可能與直腸黏膜感覺(jué)功能障礙有關(guān)。本研究旨在分析特發(fā)性肛門瘙癢癥患者直腸黏膜感覺(jué)受體表達(dá)情況，以探討肛門直腸感覺(jué)閾值異常與直腸黏膜感覺(jué)相關(guān)信號(hào)分子變化在特發(fā)性肛門瘙癢癥患者中的作用。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 選取2017年1月—2019年6月浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院肛腸外科與消化內(nèi)科收治的門診及住院特發(fā)性肛門瘙癢癥患者30例作為瘙癢組，同期在浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院體檢健康者29例作為健康組。受試前一周未服用任何藥物。特發(fā)性肛門瘙癢癥的診斷參照中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)制定的《中醫(yī)肛腸科常見(jiàn)病診療指南》［1］中的肛門瘙癢癥診斷標(biāo)準(zhǔn)，并伴有肛門潮濕。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）年齡19～64歲；（2）性別不限；（3）無(wú)消化系統(tǒng)或全身性疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）有肛門直腸手術(shù)史；（2）伴有其他肛周疾病，如外痔、肛瘺、肛裂及炎癥性腸病相關(guān)肛周疾病等；（3）肛周皮膚疾病。本研究經(jīng)浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院審查通過(guò)（意見(jiàn)號(hào)：2017-b-155）。

1.2 標(biāo)本采集 獲得兩組受試者知情同意后，采用直腸鏡采集其直腸黏膜組織，具體如下：（1）標(biāo)本采集前囑兩組受試者使用開塞露以排空大便，并告知其在標(biāo)本采集過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)輕微疼痛和肛門墜脹感，且短期內(nèi)可能會(huì)出現(xiàn)便血，但一般3～5 d會(huì)緩解；（2）采樣時(shí)囑患者取左側(cè)屈膝臥位，在直腸鏡表面涂抹石蠟油進(jìn)行潤(rùn)滑后將直腸鏡經(jīng)肛門緩慢插入直腸腔內(nèi)，然后緩慢退鏡并在直腸下段（距離齒狀線約3 cm）采用活檢鉗鉗夾直腸下段黏膜組織2～3塊；（3）將鉗取的直腸下段黏膜組織先分別置于4%甲醇溶液中進(jìn)行固定、保存，再置于液氮進(jìn)行急凍并在-80 ℃冰箱中保存。

1.3 試劑與儀器 RNA提取試劑盒（RNAiso Plus）及反轉(zhuǎn)錄、實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）試劑盒購(gòu)自TaKaRa生物股份有限公司，引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，其中瞬時(shí)感受器電位香草酸受體1（TRPV1）上游引物序列為5'-CATTGTGCAGATTGAGCAT-3'，下游引物序列為5'-TTCCTGCAGAAGAGCAAGAAGC-3'；5-羥色胺（5-HT） 上游引物序列為5'-TGATTTGCTGGTTGGATTGTTTG-3'， 下游引物序列為5'-ATGGATGCGGTTGAAAAGAGAA-3'；三磷酸腺苷受體受體P2X2抗體上游引物序列為5'-GCCTCTCCGACGCCGACTG-3'， 下游引物序列為5'-GGCCATCGTACCCAGAAATTG-3'； 甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）上游引物序列為5'-ATGTGTCCGTCGTGGATCTGA-3'，下游引物序列為5'-CTGTFGAAGTCGCAGGAGACA-3'。 一抗：TRPV1（PTG，22686-1），5-HT（GeneTex，GTX31099），三磷酸腺苷受體受體P2X2抗體（GeneTex，GTX119003）；兔二抗（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，貨號(hào)：sp-90015）。顯色劑：二氨基聯(lián)苯胺（DAB）（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，貨號(hào)：ZLI-9018）。日本奧林巴斯BX51T-PHD-J11顯微鏡，北京離心機(jī)廠LDZ5型離心機(jī)，切片機(jī)（萊卡RM2235），美國(guó)ABI7900實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀等。

1.4 方法

1.4.1 免疫組化 （1）采用磷酸鹽緩沖液（PBS）對(duì)鉗取的直腸下段黏膜組織進(jìn)行沖洗，選取＜0.5 cm×0.5 cm×0.1 cm的組織塊。（2）先采用4%多聚甲醛〔0.1 mol/L PBS，pH值為7.0～7.6，含0.1%焦碳酸二乙酯（DEPC）〕進(jìn)行固定，再采用70%、90%、80%、100%乙醇進(jìn)行洗滌、脫水，最后進(jìn)行浸蠟、包埋。（3）采用切片機(jī)進(jìn)行切片，切片厚度為5 μm。（4）將切片附于經(jīng)多聚賴氨酸附膜的載玻片上，過(guò)夜后進(jìn)行脫蠟、入水及梯度乙醇浸泡，依次進(jìn)行自來(lái)水沖洗、PBS沖洗。（5）抗原修復(fù)：滴加正常山羊血清封閉液后分別滴加按比例稀釋（1∶1 000）的一抗，過(guò)夜后滴加生物素化二抗（IgG）。（6）采用PBS進(jìn)行沖洗，滴加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液，再次采用PBS沖洗后加入DAB以顯色，蘇木素復(fù)染細(xì)胞核1 min。（7）充分水洗后采用中性樹脂封片。（8）采用顯微鏡（×400）進(jìn)行觀察并選擇兩組受試者陽(yáng)性和陰性標(biāo)本相進(jìn)行顯微照相、圖像分析及HIS評(píng)分，其中顯微鏡下細(xì)胞核呈藍(lán)色、細(xì)胞質(zhì)呈深淺不一的棕色為陽(yáng)性表達(dá)，否則為陰性表達(dá)；圖像分析采用Image軟件，并自動(dòng)計(jì)算平均光密度值（MOD值）；HIS評(píng)分為陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)評(píng)分（陽(yáng)性范圍0～25%計(jì)1分，26%～50%計(jì)2分，51%～75%計(jì)3分，76%～100%計(jì)4分）與陽(yáng)性細(xì)胞顯色強(qiáng)度評(píng)分（陰性計(jì)0分，淡黃色計(jì)1分，淺褐色計(jì)2分，深褐色計(jì)3分）的乘積。

1.4.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 采用Trizol法提取兩組受試者直腸下段黏膜組織總RNA，采用核酸儀測(cè)定其濃度并按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書反轉(zhuǎn)錄出cDNA，95 ℃預(yù)變性5 min后，95 ℃變性15 s→60 ℃變性40 s（40個(gè)循環(huán)）；經(jīng)PCR擴(kuò)增后采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀自帶軟件ABI Prism 7500 SDS Software分析TRPV1、5-TH、三磷酸腺苷受體受體P2X2抗體mRNA表達(dá)情況：（1）根據(jù)陰性對(duì)照調(diào)整閾值和基線以確定各標(biāo)本Ct值，并根據(jù)熔解曲線確定該Ct值是否有效；（2）采用2-ΔΔCt法計(jì)算目的基因相對(duì)表達(dá)量，其中ΔΔCt=ΔCt樣本均值-ΔCt陰性對(duì)照均值，ΔCt=Ct目的基因-Ct內(nèi)參基因。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以（±s）表示，組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2 兩組患者治療前、后雙側(cè)卵巢AFC數(shù)比較 治療前兩組患者AFC數(shù)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療后兩組患者AFC數(shù)高于治療前，且觀察組高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

2 結(jié)果

免疫組化結(jié)果顯示，瘙癢組患者直腸黏膜組織TRPV1、5-HT呈陽(yáng)性表達(dá)，三磷酸腺苷受體受體P2X2抗體呈陰性表達(dá)（見(jiàn)圖1）。瘙癢組患者TRPV1 MOD值（t=8.233）及HIS評(píng)分（t=22.370）、5-HT MOD值（t=8.249）及HIS評(píng)分（t=5.980）高于健康組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），而兩組受試者直腸黏膜組織三磷酸腺苷受體受體P2X2抗體MOD值（t=1.488）及HIS評(píng)分（t=1.303）比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05，見(jiàn)圖 2～3）。

圖1 兩組受試者直腸黏膜組織TRPV1、5-HT、三磷酸腺苷受體受體P2X2抗體表達(dá)情況（免疫組化，×400）Figure 1 The expression of TRPV1，5-HT and P2X2 in rectal mucosal tissue in pruritus and healthy groups

圖2 兩組受試者直腸黏膜組織TRPV1、5-HT、三磷酸腺苷受體受體P2X2抗體MOD值比較Figure 2 Comparison of the MOD value of TRPV1，5-HT and P2RX2 polyclonal antibody in rectal mucosal tissue between pruritus and healthy groups

圖3 兩組受試者直腸黏膜組織TRPV1、5-HT、三磷酸腺苷受體受體P2X2抗體HIS評(píng)分比較Figure 3 Comparison of the HIS score of TRPV1，5-HT and P2RX2 polyclonal antibody in rectal mucosal tissue between pruritus and healthy groups

實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示，瘙癢組患者直腸黏膜組織TRPV1、5-HT mRNA相對(duì)表達(dá)量高于健康組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t值分別為7.306、8.144，P＜0.01），而兩組受試者直腸黏膜組織三磷酸腺苷受體受體P2X2抗體mRNA相對(duì)表達(dá)量比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.457，P＞0.05，見(jiàn)圖4）。

圖4 兩組受試者直腸黏膜組織TRPV1、5-HT、三磷酸腺苷受體受體P2X2抗體mRNA相對(duì)表達(dá)量比較Figure 4 Comparison of the relative expression quantity of mRNA of TRPV1，5-HT and P2RX2 polyclonal antibody in rectal mucosal tissue between pruritus and healthy groups

3 討論

目前，關(guān)于特發(fā)性肛門瘙癢癥病因?qū)W的嚴(yán)格的、系統(tǒng)性的研究很少見(jiàn)，多數(shù)研究者從細(xì)菌學(xué)角度考慮特發(fā)性肛門瘙癢癥的主要病因。早期研究表明，特發(fā)性肛門瘙癢癥患者會(huì)出現(xiàn)過(guò)度的直腸肛門抑制反射并導(dǎo)致肛管滲漏發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)升高［2］，因此推測(cè)特發(fā)性肛門瘙癢癥患者直腸感覺(jué)閾值異常主要由內(nèi)臟感覺(jué)傳遞神經(jīng)敏化或表型改變所致，但是何種原因?qū)е铝酥蹦c感覺(jué)功能障礙，直腸感覺(jué)閾值異常是否與直腸黏膜相關(guān)感覺(jué)信號(hào)分子表達(dá)有關(guān)？本研究以直腸黏膜感覺(jué)受體為切入點(diǎn)，比較了特發(fā)性肛門瘙癢癥患者與體檢健康者直腸黏膜TRPV1、5-HT、三磷酸腺苷受體受體P2X2抗體表達(dá)情況。

3.1 TRPV1 TRPV1是當(dāng)前許多胃腸道疾病研究的“明星”分子，與許多胃腸道疾病的病理生理機(jī)制及治療密切相關(guān)：TRPV1敏感傳入神經(jīng)激活對(duì)小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸和直腸擴(kuò)張后內(nèi)臟運(yùn)動(dòng)反應(yīng)（VMR）的傳遞至關(guān)重要，在內(nèi)臟反應(yīng)中已有通過(guò)改變表達(dá)、增強(qiáng)或降低激活閾值來(lái)調(diào)節(jié)TRPV1功能的描述［3］；攝入TRPV1拮抗劑5周可有效減輕功能性消化不良志愿者內(nèi)臟疼痛，但有明顯不良反應(yīng)［4］；TRPV1通道參與結(jié)腸高敏反應(yīng)相關(guān)疾病，腸易激綜合征（IBS）患者結(jié)腸黏膜TRPV1表達(dá)升高，但TRPV1的表達(dá)在IBS亞組〔混合型IBS（IBS-M）、IBS腹瀉型（IBS-D）、BS便秘型（IBS-C）〕間并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，提示TRPV1表達(dá)升高與IBS患者內(nèi)臟高敏性相關(guān)［5］。BRIERLEY等［6］進(jìn)行的小鼠體外實(shí)驗(yàn)證明，辣椒素直接激活了61%的腰內(nèi)臟神經(jīng)（LSN）傳入纖維和47%的骶盆腔神經(jīng)（PN）傳入纖維，82%的胸腰和50%的腰骶結(jié)腸不同大小背根節(jié)（DRG）神經(jīng)元顯示瞬時(shí)受體樣免疫樣反應(yīng)（TRPV1-like immunoreactivity，TRPV1-LI），PN的配對(duì)終止于腰骶脊髓并主要支配直腸感覺(jué)信號(hào)的傳導(dǎo)，這些不同的受體表達(dá)譜意味著遠(yuǎn)端結(jié)腸和直腸區(qū)域?qū)ο悴莼蜞堰誓艽碳さ幕瘜W(xué)敏感性略低于遠(yuǎn)端結(jié)腸近端區(qū)域。由上述可知，TRPV1在遠(yuǎn)端結(jié)腸和直腸敏感性、腸道動(dòng)力調(diào)節(jié)方面均具有重要作用。

CHAN等［7］通過(guò)對(duì)30例健康志愿者直腸黏膜組織進(jìn)行活檢發(fā)現(xiàn)，其平均直腸熱感覺(jué)閾值與排便欲望、最大耐受量密切相關(guān)，靜脈注射辣椒素后其直腸產(chǎn)生劑量依賴的感覺(jué)，提示直腸黏膜組織存在高密度功能性TRPV1，而TRPV1能感受腸腔內(nèi)各種刺激。本研究結(jié)果顯示，瘙癢組患者直腸黏膜組織TRPV1 MOD值、HIS評(píng)分及mRNA相對(duì)表達(dá)量均高于健康組，提示特發(fā)性肛門瘙癢癥患者直腸感覺(jué)閾值增高、直腸順應(yīng)性降低與TRPV1表達(dá)增高有關(guān)。需要指出的是，雖然目前有多項(xiàng)關(guān)于TRPV1在內(nèi)臟高敏性結(jié)直腸動(dòng)力紊亂性疾病中的機(jī)制研究，但關(guān)于特發(fā)性肛門瘙癢癥患者直腸黏膜組織TRPV1表達(dá)情況的研究報(bào)道較少見(jiàn)，且很多有爭(zhēng)議的治療效果和病理生理機(jī)制還需要進(jìn)一步驗(yàn)證，因此推測(cè)特發(fā)性肛門瘙癢癥患者可能存在傳入神經(jīng)敏化，或可能僅通過(guò)增加纖維密度而引起機(jī)械或熱閾值降低，繼而導(dǎo)致肛門瘙癢感覺(jué)增強(qiáng)。

3.2 5-HT 5-HT是腸道中重要的信號(hào)分子，在腸道感覺(jué)傳導(dǎo)和腸道動(dòng)力調(diào)節(jié)方面發(fā)揮著重要作用。研究表明，5-HT具有調(diào)節(jié)腸道運(yùn)動(dòng)分泌與黏膜感覺(jué)的作用，腸道5-HT的表達(dá)減少可導(dǎo)致腸道蠕動(dòng)功能減弱及便秘，而5-HT過(guò)表達(dá)則可導(dǎo)致直腸感覺(jué)、運(yùn)動(dòng)過(guò)敏，造成便意頻繁、肛門墜脹、排便不盡感等直腸高敏反應(yīng)；腸嗜鉻細(xì)胞是壓力傳感器，可將5-HT分泌到腸壁中，刺激黏膜下主要傳入神經(jīng)元而引起蠕動(dòng)反射［8］；腸內(nèi)5-HT在感覺(jué)傳導(dǎo)中具有重要作用，可激活結(jié)腸黏膜內(nèi)固有初級(jí)傳入神經(jīng)元和外在初級(jí)傳入神經(jīng)元末端［9］，而結(jié)腸黏膜5-HT主要受色氨酸氫化酶1（TPH-1）和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（SERT）調(diào)控。MATSUMOTO等［10］通過(guò)建立葡聚糖硫酸酯鈉（DSS）小鼠結(jié)腸炎模型發(fā)現(xiàn)，小鼠直腸黏膜神經(jīng)元/非神經(jīng)元TRPV1通道激活，5-HT3受體表達(dá)增加，5-HT4受體表達(dá)減少，TRPV1拮抗劑和5-HT3受體拮抗劑可使內(nèi)臟痛覺(jué)過(guò)敏減輕至正常對(duì)照組水平，提示腸黏膜TRPV1通道和5-HT信號(hào)改變可能是導(dǎo)致結(jié)腸炎小鼠內(nèi)臟高敏反應(yīng)的原因之一，而內(nèi)臟高敏狀態(tài)與初級(jí)傳入神經(jīng)纖維的高敏反應(yīng)相關(guān)。

本研究結(jié)果顯示，瘙癢組患者直腸黏膜組織5-HT MOD值、HIS評(píng)分及mRNA相對(duì)表達(dá)量高于健康組，提示特發(fā)性肛門瘙癢癥直腸感覺(jué)閾值異常可能與5-HT表達(dá)升高有關(guān)。由于5-HT可刺激直腸分泌、調(diào)節(jié)直腸收縮運(yùn)動(dòng)并導(dǎo)致直腸感覺(jué)閾值升高，而特發(fā)性肛門瘙癢癥患者直腸容量增加、直腸壁反射性壓力及直腸順應(yīng)性下降，因此特發(fā)性肛門瘙癢癥患者肛門潮濕、滲漏除與短暫性括約肌松弛引起的括約肌功能失調(diào)有關(guān)外，還與5-HT的過(guò)表達(dá)導(dǎo)致直腸感覺(jué)閾值異常相關(guān)，進(jìn)一步深入了解5-HT在腸道中的合成、分布、儲(chǔ)存、釋放及其對(duì)腸道感覺(jué)、運(yùn)動(dòng)的調(diào)控機(jī)制對(duì)治療特發(fā)性肛門瘙癢癥具有重要意義。

3.3 三磷酸腺苷受體受體P2X2抗體 三磷酸腺苷受體受體P2X2抗體廣泛分布于胃腸道，參與多種胃腸道疾病的發(fā)病，并與多種腸道功能障礙性疾病密切相關(guān)。同時(shí)，胃腸道運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元與感覺(jué)神經(jīng)元中均有三磷酸腺苷受體受體P2X2抗體的表達(dá)，說(shuō)明其與胃腸道運(yùn)動(dòng)和感覺(jué)功能均有密切聯(lián)系。吳璐一等［11］通過(guò)電針刺激IBS大鼠天樞穴、上巨虛穴發(fā)現(xiàn)，電針刺激能降低IBS內(nèi)臟痛大鼠結(jié)腸肌間神經(jīng)叢神經(jīng)元三磷酸腺苷受體受體P2X2抗體的表達(dá)。DEVRIES等［12］通過(guò)評(píng)估野生型（WT）、三磷酸腺苷受體受體P2X2抗體和三磷酸腺苷受體受體P2X3抗體亞基敲除（KO）小鼠體內(nèi)外結(jié)腸運(yùn)動(dòng)能力發(fā)現(xiàn)，煙堿受體主要分布于供給小鼠結(jié)腸縱肌的抑制性運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元，且包含三磷酸腺苷受體受體P2X2抗體或三磷酸腺苷受體受體P2X3抗體亞基的受體并不局限于供應(yīng)縱向肌肉的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元，因此由包含三磷酸腺苷受體受體P2X2抗體或三磷酸腺苷受體受體P2X3抗體亞基的受體介導(dǎo)的突觸傳遞對(duì)于小鼠結(jié)腸的運(yùn)動(dòng)性并不是必需的。OHMAN等［13］通過(guò)對(duì)初生大鼠結(jié)腸注射乙酸而誘導(dǎo)內(nèi)臟高敏反應(yīng)，發(fā)現(xiàn)其嘌呤類受體（P2XR）的表達(dá)會(huì)大幅度增加以維持內(nèi)臟高敏性，慢性功能性內(nèi)臟痛覺(jué)過(guò)敏與三磷酸腺苷（ATP）誘發(fā)的反應(yīng)增強(qiáng)和結(jié)腸特異性感覺(jué)神經(jīng)元三磷酸腺苷受體單體（P2X3Rs）的表達(dá)升高有關(guān)。以上研究一定程度上揭示了功能性結(jié)腸高敏反應(yīng)的特定分子機(jī)制，可能為開辟IBS及相關(guān)疾病的新治療策略鋪平道路。

WYNN等［14］采用1種新型大鼠離體結(jié)腸直腸抑制劑研究腸擴(kuò)張時(shí)黏膜是否釋放5-三磷酸腺苷，并評(píng)價(jià)其對(duì)直腸擴(kuò)張時(shí)感覺(jué)神經(jīng)放電的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)三磷酸腺苷受體受體P2X3抗體在供應(yīng)大鼠結(jié)腸直腸的背根神經(jīng)節(jié)L1和S1神經(jīng)元亞群中表達(dá)，結(jié)直腸擴(kuò)張導(dǎo)致結(jié)腸上皮細(xì)胞釋放的5-三磷酸腺苷壓力依賴性增加，并引起盆腔神經(jīng)興奮。目前，關(guān)于三磷酸腺苷受體受體P2X2抗體的表達(dá)情況及可能的調(diào)控機(jī)制研究主要集中于動(dòng)物模型，關(guān)于人三磷酸腺苷受體受體P2X2抗體調(diào)控機(jī)制的研究主要集中于IBS這一消化道功能性疾病，但三磷酸腺苷受體受體P2X2抗體作為一種腸道擴(kuò)張感覺(jué)信號(hào)傳導(dǎo)分子，是否參與了特發(fā)性肛門瘙癢癥患者直腸順應(yīng)性降低及直腸感覺(jué)閾值增強(qiáng)仍是一個(gè)具有爭(zhēng)議性的問(wèn)題。本研究結(jié)果顯示，兩組受試者直腸黏膜三磷酸腺苷受體受體P2X2抗體MOD值、HIS評(píng)分及mRNA相對(duì)表達(dá)量間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，因此三磷酸腺苷受體受體P2X2抗體是否未參與直腸感覺(jué)閾值異常，或由于直腸順應(yīng)性降低、直腸擴(kuò)張反應(yīng)而未導(dǎo)致興奮傳導(dǎo)，或因?yàn)楸狙芯繕颖玖枯^小？這些均需進(jìn)一步研究證實(shí)。

內(nèi)臟高敏感狀態(tài)指機(jī)體空腔臟器對(duì)有害刺激產(chǎn)生的過(guò)激反應(yīng)和對(duì)生理刺激產(chǎn)生的不適感，與各種離子通道的激活、中樞神經(jīng)致敏性、外周神經(jīng)致敏性、直腸順應(yīng)性降低均相關(guān)，發(fā)病機(jī)制復(fù)雜。直腸高敏感狀態(tài)屬于內(nèi)臟高敏狀態(tài)，與直腸腸壁感覺(jué)功能相關(guān)，多種直腸高敏性直腸疾病患者均存在TPRV1、5-HT表達(dá)升高，如功能性腸病IBS、直腸炎（包括放療后直腸炎）、直腸前切除術(shù)后綜合征等。筆者所在課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，TRPV1在辣椒素誘導(dǎo)的肛門瘙癢模型小鼠肛門皮膚中的表達(dá)明顯升高，而通過(guò)溫和灸治療后TRPV1的表達(dá)明顯減少，提示TRPV1通路的異常激活是特發(fā)性肛門瘙癢癥的發(fā)病機(jī)制之一［15］；與正常人和便秘患者相比，特發(fā)性肛門瘙癢癥患者直腸順應(yīng)性降低但直腸敏感性增加，同時(shí)特發(fā)性肛門瘙癢癥患者直腸黏膜感覺(jué)受體TRPV1、5-HT的表達(dá)異常升高，因此推斷特發(fā)性肛門瘙癢癥患者直腸感覺(jué)閾值升高及直腸順應(yīng)性降低可能與直腸黏膜TRPV1、5-HT的表達(dá)升高有關(guān)，且TRPV1、5-HT的表達(dá)可能是由于直腸黏膜感覺(jué)傳遞中遞質(zhì)敏化或表型改變所致［16］。

綜上所述，特發(fā)性肛門瘙癢癥患者直腸黏膜感覺(jué)受體TRPV1、5-HT的表達(dá)明顯升高，其直腸順應(yīng)性降低、感覺(jué)閾值升高可能與TRPV1、5-HT的過(guò)表達(dá)有關(guān)，并可能是由于直腸黏膜感覺(jué)傳遞中遞質(zhì)敏化或表型改變所致，但直腸黏膜感覺(jué)受體對(duì)直腸感覺(jué)與運(yùn)動(dòng)功能的調(diào)控是一個(gè)復(fù)雜的病理生理過(guò)程，本推斷還需要謹(jǐn)慎地進(jìn)一步研究。

作者貢獻(xiàn)：徐利進(jìn)行研究的構(gòu)思、設(shè)計(jì)及可行性分析，撰寫論文并對(duì)文章整體負(fù)責(zé)；代群負(fù)責(zé)指導(dǎo)試驗(yàn)技術(shù)操作等；何孝康進(jìn)行文獻(xiàn)資料收集及整理、數(shù)據(jù)分析；李敏負(fù)責(zé)論文的修訂。

本文無(wú)利益沖突。