白細(xì)胞介素-1β、人附睪蛋白4及Sp1對(duì)上皮性卵巢癌的診斷及預(yù)后預(yù)測(cè)價(jià)值分析

丁竟成，黃磊，李婷，趙玉杰

信陽(yáng)市中心醫(yī)院婦產(chǎn)科，河南 信陽(yáng) 464000

卵巢癌是常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤，在女性生殖系統(tǒng)腫瘤中，患病率居于第3位，致死率居于首位；其中，上皮性卵巢癌占卵巢癌的90%以上，嚴(yán)重威脅女性的生殖健康及生命安全。卵巢癌患者的早期癥狀并不典型，多數(shù)患者確診時(shí)已處于中晚期階段，錯(cuò)過(guò)了最佳診療時(shí)機(jī)。研究證實(shí)，Ⅰ期確診患者數(shù)量不足25%，Ⅲ、Ⅳ期患者具有較高的復(fù)發(fā)率，5年生存率不足25%，因此，早期檢測(cè)至關(guān)重要。血清腫瘤標(biāo)志物水平的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)有助于卵巢癌患者臨床療效及預(yù)后情況的判斷。腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)是診斷惡性腫瘤的重要手段及腫瘤臨床研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)。人附睪蛋白4（human epididymis protein 4，HE4）屬于卵巢癌的新型標(biāo)志物，多表達(dá)于卵巢癌組織中，對(duì)卵巢癌具有較高的診斷靈敏度和特異度。轉(zhuǎn)錄因子Sp1能夠上調(diào)HE4的基本轉(zhuǎn)錄活性，在卵巢癌發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用。白細(xì)胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）能夠參與卵巢細(xì)胞的發(fā)育、成熟、排卵和妊娠等生殖過(guò)程，但是否參與卵巢癌的發(fā)生尚有待證實(shí)。鑒于此，本研究對(duì)IL-1β、HE4和Sp1對(duì)卵巢癌的診斷效能及預(yù)后預(yù)測(cè)價(jià)值進(jìn)行分析，以期為卵巢癌的臨床早期診療提供理論參考依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2013年1月至2016年1月信陽(yáng)市中心醫(yī)院收治的上皮性卵巢癌患者的臨床資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)組織病理學(xué)或細(xì)胞學(xué)確診為上皮性卵巢癌；②首發(fā)病例；③接受手術(shù)+術(shù)后輔助化療；④術(shù)前均未接受放化療及其他抗腫瘤治療；⑤病歷資料及隨訪資料完整，且均完成隨訪。排除標(biāo)準(zhǔn)：①生存期不超過(guò)半年；②合并其他部位惡性腫瘤；③合并結(jié)締組織疾病及心臟病、糖尿病、冠心病等其他慢性疾病；④病灶發(fā)生轉(zhuǎn)移；⑤合并免疫功能缺陷及全身性疾病；⑥合并嚴(yán)重的心、肝、腎功能不全；⑦伴有精神類(lèi)疾病；⑧并發(fā)全身急性、慢性感染；⑨存在嚴(yán)重自殺傾向；⑩妊娠期或哺乳期婦女。根據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，本研究共納入90例上皮性卵巢癌患者作為惡性組，年齡28～66歲，平均（49.75±8.69）歲。另選取同期收治的30例良性卵巢腫瘤患者作為良性組，年齡26～65歲，平均（48.76±9.01）歲；選取30例良性婦科疾病（組織病理學(xué)證實(shí)為健康卵巢組織）患者作為對(duì)照組，年齡28～65歲，平均（49.33±8.54）歲。3組患者的年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。分別收集惡性組、良性組和對(duì)照組患者的上皮性卵巢癌組織、良性卵巢腫瘤組織和健康卵巢組織。

1.2 檢測(cè)方法

3組患者均于清晨抽取空腹靜脈采血3～5 ml，以3000 r/min的速度離心10 min，離心半徑為10 cm，收集上層血清于干燥試管中，并置于-80℃低溫保存，于1周內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清IL-1β、HE4水平。所有操作步驟均嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟進(jìn)行，所有試劑盒均有正式批文，符合要求。3組患者的組織標(biāo)本均經(jīng)固定、染色、切片、脫水、滅活、顯色等操作后，采用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)Sp1的表達(dá)情況，根據(jù)染色強(qiáng)度和高倍鏡下陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比進(jìn)行分析。Sp1陽(yáng)性細(xì)胞主要定位于細(xì)胞核，陽(yáng)性顆粒呈棕黃色或棕褐色，且粗細(xì)均勻。陽(yáng)性細(xì)胞染色強(qiáng)度評(píng)分：無(wú)著色計(jì)0分，淺黃色計(jì)1分，棕黃色計(jì)2分，棕褐色計(jì)3分。陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比評(píng)分：未見(jiàn)陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)0分，0%＜占比＜10%計(jì)1分，10%≤占比＜50%計(jì)2分，50%≤占比＜75%計(jì)3分，≥75%計(jì)4分。Sp1陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)：陽(yáng)性細(xì)胞占比和染色強(qiáng)度評(píng)分相乘，0分為陰性，≥1分為陽(yáng)性。上述兩項(xiàng)得分的乘積為免疫組化最終得分，其中，≤2分為陰性，＞2分為陽(yáng)性。

1.3 觀察指標(biāo)

比較3組患者的血清IL-1β、HE4水平及組織中Sp1的陽(yáng)性表達(dá)情況，分析IL-1β、HE4、Sp1水平對(duì)上皮性卵巢癌的診斷效能。術(shù)后，采用門(mén)診、電話或走訪等形式對(duì)患者均進(jìn)行了為期4年的隨訪，每3個(gè)月隨訪1次，隨訪內(nèi)容包括常規(guī)體格檢查、實(shí)驗(yàn)室生化指標(biāo)檢測(cè)、影像學(xué)檢查等，隨訪截止時(shí)間為2020年1月。記錄所有上皮性卵巢癌患者的生存情況，并依據(jù)生存情況將其分為生存組和死亡組，分析臨床特征與上皮性卵巢癌患者生存情況的關(guān)系及其預(yù)后的影響因素。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 21.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ檢驗(yàn)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x-±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，組間兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)。繪制受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線，獲取曲線下面積（area under curve，AUC），并通過(guò)計(jì)算靈敏度、特異度等指標(biāo)分析IL-1β、HE4及Sp1對(duì)卵巢癌的診斷價(jià)值，確定臨界值。采用多因素Logistic回歸模型分析卵巢癌患者預(yù)后的影響因素。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清IL-1β、HE4水平及組織中Sp1表達(dá)情況的比較

3組患者血清中的IL-1β、HE4水平及組織中Sp1的陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。惡性組患者血清中的IL-1β、HE4水平均高于良性組和對(duì)照組患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；惡性組患者血清中Sp1的陽(yáng)性表達(dá)率高于良性組和對(duì)照組患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（表1）

表1 3組患者血清中IL-1β、HE4水平及組織中Sp1陽(yáng)性表達(dá)情況的比較

2.2 血清IL-1β、HE4水平及組織中Sp1表達(dá)對(duì)上皮性卵巢癌的診斷效能

ROC曲線分析結(jié)果顯示，血清IL-1β、HE4水平及組織中Sp1的表達(dá)診斷上皮性卵巢癌的AUC分別為0.872、0.918、0.817。血清IL-1β診斷上皮性卵巢癌的靈敏度最高（88.9%），HE4診斷上皮性卵巢癌的特異度最高（93.3%）。（表2、圖1）

表2 IL-1β、HE4及Sp1對(duì)上皮性卵巢癌的診斷效能

圖1 血清IL-1β、HE4水平及組織中Sp1的表達(dá)診斷上皮性卵巢癌的ROC曲線

2.3 生存情況

截至隨訪結(jié)束，所有患者均全部完成隨訪。90例上皮性卵巢癌患者中，30例患者生存，60例患者死亡，4年生存率為33.33%（30/90）。

2.4 上皮性卵巢癌患者生存情況影響因素的單因素分析

兩組患者的年齡、病理類(lèi)型比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

＞0.05）；兩組患者的腫瘤直徑、臨床分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、血清IL-1β水平、血清HE4水平及卵巢組織中Sp1的陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

＜0.05）。（表3）

表3 90例上皮性卵巢癌患者生存情況影響因素的單因素分析

2.5 卵巢癌預(yù)后影響因素的多因素Logistic回歸分析

將腫瘤直徑、臨床分期、分化程度、IL-1β水平、HE4水平、Sp1表達(dá)情況作為自變量，以患者預(yù)后情況作為因變量納入Logistic多因素回歸模型進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，腫瘤直徑、臨床分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、IL-1β水平、HE4水平及Sp1表達(dá)情況均是上皮性卵巢癌患者預(yù)后的獨(dú)立影響因素（

P

＜0.05）。（表4）

表4 卵巢癌患者預(yù)后影響的多因素Logistic回歸分析（n=90）

3 討論

卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)常見(jiàn)的惡性腫瘤，在全世界范圍內(nèi)，其患病率僅次于宮頸癌，而且，近年來(lái)，其發(fā)病率呈明顯上升趨勢(shì)。目前，關(guān)于上皮性卵巢癌的發(fā)病機(jī)制尚未完全明確，患者早期缺乏典型的臨床癥狀，難以進(jìn)行鑒別診斷，導(dǎo)致患者錯(cuò)過(guò)了最佳診療時(shí)機(jī)，因此，早期監(jiān)測(cè)病情并及時(shí)診斷治療有利于改善上皮性卵巢癌患者的預(yù)后。

HE4是一種附著于人附睪上皮細(xì)胞中的核心表位蛋白，屬于抑蛋白酶家族。研究證實(shí)，HE4在卵巢癌組織中呈高表達(dá)，在健康卵巢組織或非卵巢腫瘤組織中不表達(dá)或呈低表達(dá)，是臨床診斷卵巢癌的新型腫瘤標(biāo)志物。國(guó)外研究通過(guò)免疫組化法檢測(cè)卵巢癌患者卵巢癌組織中的HE4水平，發(fā)現(xiàn)患者的血清HE4水平普遍較高，認(rèn)為HE4對(duì)于卵巢癌具有一定的診斷意義。IL-1β屬于IL-1，能夠介導(dǎo)機(jī)體內(nèi)IL-1的活性，通過(guò)自分泌或旁分泌的方式刺激其他細(xì)胞因子和炎性遞質(zhì)的產(chǎn)生，誘發(fā)抗原呈遞細(xì)胞表面免疫分子的表達(dá)，為T(mén)淋巴細(xì)胞的活化提供第二信號(hào)，促進(jìn)B細(xì)胞的增生、分化，介導(dǎo)免疫球蛋白的分泌，由此激活補(bǔ)體，增強(qiáng)細(xì)胞免疫和體液免疫介導(dǎo)的組織損傷過(guò)程。研究表明，IL-1β參與了卵泡發(fā)育、卵子成熟及排卵等生殖過(guò)程，活性亦受到激素、促性腺激素等的調(diào)節(jié)，因此，推斷其在卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展中具有一定作用。研究指出，卵巢癌的發(fā)生還受到多種活性分子的影響，Sp1則是其中一種重要的轉(zhuǎn)錄因子。有研究指出Sp1可以結(jié)合并激活FOXM1啟動(dòng)子，促進(jìn)致癌蛋白FOXM1在卵巢癌中高表達(dá)進(jìn)而促進(jìn)卵巢癌病情進(jìn)展，干擾Sp1表達(dá)后可以下調(diào)FOXM1在卵巢癌的表達(dá)，提示Sp1可通過(guò)參與調(diào)控腫瘤細(xì)胞增殖相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子FOXM1在卵巢癌中的表達(dá)促進(jìn)卵巢癌病情進(jìn)展。

本研究結(jié)果顯示，惡性組患者血清中的IL-1β、HE4水平均高于良性組和對(duì)照組患者，Sp1的陽(yáng)性表達(dá)率均高于良性組和對(duì)照組患者（P＜0.05），與既往研究結(jié)果一致，說(shuō)明血清高IL-1β、HE4水平及卵巢組織中Sp1陽(yáng)性表達(dá)與卵巢癌的發(fā)生具有一定聯(lián)系，可作為診斷上皮性卵巢癌的重要腫瘤標(biāo)志物。同時(shí)，通過(guò)血清IL-1β、HE4水平及卵巢組織Sp1表達(dá)診斷上皮性卵巢癌ROC曲線可知，三者診斷卵巢癌的曲線下面積AUC分別為0.872、0.918、0.817，提示血清IL-1β、HE4水平及卵巢組織Sp1表達(dá)情況對(duì)上皮性卵巢癌均具有較高的診斷價(jià)值，能夠作為對(duì)于上皮性卵巢癌臨床診斷的輔助指標(biāo)。

血清IL-1β、HE4水平及卵巢組織Sp1表達(dá)與卵巢癌的進(jìn)展具有一定的聯(lián)系，推測(cè)其表達(dá)情況能夠預(yù)測(cè)卵巢癌患者的預(yù)后。本研究通過(guò)為期4年的隨訪發(fā)現(xiàn)，90例上皮性卵巢癌患者的4年生存率為33.33%（30/90），與既往研究結(jié)果基本相符。單因素分析結(jié)果顯示，腫瘤直徑、臨床分期、病理分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、血清IL-1β、血清HE4水平及卵巢組織Sp1表達(dá)均可能對(duì)上皮性卵巢癌患者的預(yù)后產(chǎn)生影響；多因素Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，腫瘤直徑、臨床分期、病理分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、IL-1β水平、HE4水平及卵巢組織Sp1陽(yáng)性表達(dá)情況均是卵巢癌患者預(yù)后的獨(dú)立影響因素（P＜0.05），提示淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、臨床分期為Ⅲ～Ⅳ分期、中低分化、血清IL-1β、HE4高水平及卵巢組織Sp1陽(yáng)性表達(dá)的患者，其預(yù)后往往更差，病死率更高，提示血清IL-1β、血清HE4水平及卵巢組織中Sp1表達(dá)能夠作為上皮性卵巢癌患者預(yù)后評(píng)估的重要輔助指標(biāo)。

綜上所述，上皮性卵巢癌患者血清中的IL-1β、HE4水平較高，上皮性卵巢癌組織中Sp1的陽(yáng)性表達(dá)率亦較高，均與患者的預(yù)后密切相關(guān)。臨床可將IL-1β、HE4及Sp1作為上皮性卵巢癌臨床診斷及預(yù)后預(yù)測(cè)的重要輔助指標(biāo)。