胸腺激酶1聯(lián)合基質(zhì)金屬蛋白酶9對(duì)非小細(xì)胞肺癌患者1年病死率的預(yù)測價(jià)值

胡宇航 田光書 劉大治

隨著我國經(jīng)濟(jì)發(fā)展，環(huán)境污染的加重，肺癌的發(fā)病率和死亡率居高不下，均占據(jù)惡性腫瘤的首位[1]。非小細(xì)胞肺癌（Non-small cell lung cancer，NSCLC）是最常見的肺癌類型，約占肺癌的80%，該病早期臨床癥狀不易察覺，確診時(shí)多處于晚期，預(yù)后差，死亡率高[2]。而高死亡率除了與病情本身相關(guān)，亦與能否早期診斷、預(yù)判患者預(yù)后緊密相關(guān)。胸腺激酶1（Thymidine kinase 1，TK1）與基質(zhì)金屬蛋白酶9（Matrix metalloproteinase 9，MMP-9）均為血清腫瘤標(biāo)志物，在多種惡性腫瘤的診斷及藥物療效評(píng)估中具有較高的應(yīng)用價(jià)值[3～6]。但TK1、MMP-9對(duì)預(yù)測NSCLC患者病死率的報(bào)道較少。本研究通過回顧性分析探討血清TK1 與MMP-9 水平對(duì)NSCLC患者1年病死率的評(píng)估價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象選擇我院2017年1月～2018年9月收治的98例確診為NSCLC 的患者作為研究對(duì)象，患者均符合《中國原發(fā)性肺癌診療規(guī)范（2015年版）》[7]中NSCLC 的診斷，且均通過了我院倫理委員會(huì)的審查，患者均簽訂知情同意書。其中男52例，女46例，年 齡50～76歲，平均（64.67±13.52）歲，有吸煙史47例，無吸煙史51例。病理顯示鱗癌64例，腺癌34例，標(biāo)本均由經(jīng)驗(yàn)豐富的同一病理科醫(yī)師審核及篩選。根據(jù)《國際抗癌聯(lián)盟第8版》[8]依據(jù)TNM（Tumor Node Metastasis）分類法對(duì)入組的NSCLC患者進(jìn)行分期，多為中晚期，Ⅱ/Ⅲ期53例（54.08%）、Ⅳ期45例（45.92%）。電話隨訪1年，終點(diǎn)事件為肺癌或肺癌并發(fā)癥引起的死亡，排除其他突發(fā)疾病或者意外原因造成的死亡，其研究指標(biāo)為總生存期（Overall survival，OS）：自確診NSCLC 之日至患者死亡/最后一次隨訪日期（本研究記12個(gè)月）。

1.2 臨床資料的收集記錄患者年齡、性別、有無吸煙史、TNM分期、TK1、MMP-9濃度等情況。

1.3 研究方法標(biāo)本采集：入院后即刻抽取NSCLC患者靜脈血10ml，置于促凝管中，以低溫3 000r/min的速度（r=5cm）離心10min后取上清液，并置于-80℃冰箱凍存，血清TK1、MMP-9濃度采用微粒子酶免疫分析法檢測。

主要儀器：檢測儀器為AU480 全自動(dòng)免疫分析儀，試劑盒購自英國Abcam 公司，貨號(hào)分別為ab59266、ab38898，并嚴(yán)格按照說明書檢測。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS 22.0、Medcalc 軟件對(duì)樣本進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。其中計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料（符合正態(tài)分布）以±s表示，進(jìn)行兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。TK1、MMP-9 與OS 進(jìn)行Pearson 線性相關(guān)性分析。多因素Logistic回歸分析用于預(yù)測NSCLC患者死亡的危險(xiǎn)因素。受試者工作特征曲線（Receiver operator characteristics，ROC）分析比較TK1、MMP-9 水平對(duì)評(píng)估NSCLC患者預(yù)后的價(jià)值，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 NSCLC患者的一般情況NSCLC患者隨訪1年內(nèi)，42例死亡（死亡組），56例生存（生存組）。死亡組與生存組的年齡、性別、病理類型無明顯差異（P>0.05），死亡組Ⅳ期、有吸煙史的占比均高于生存組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），死亡組患者血清TK1、MMP-9濃度高于生存組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。見表1。

表1 NSCLC患者的一般情況[n（%）]

2.2 NSCLC患者血清TK1、MMP-9濃度與OS相關(guān)性分析NSCLC患者血清TK1、MMP-9濃度均與OS呈負(fù)相關(guān)（r=-0.797、-0.836，P<0.001）。見圖1。

2.3 NSCLC患者1年病死率的多因素Logistic回歸分析多因素Logistic回歸分析顯示，NSCLC患者血清TK1、MMP-9濃度及分期均為導(dǎo)致NSCLC患者死亡的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P<0.05）。見表2。

圖1 NSCLC患者血清TK1、MMP-9濃度與OS的相關(guān)性

表2 NSCLC患者1年病死率的多因素Logistic回歸分析

2.4 TK1、MMP-9預(yù)測NSCLC患者1年病死率的ROC曲線分析死亡組患者血清中TK1、MMP-9表達(dá)水平均高于生存組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），結(jié)果顯示TK1、MMP-9曲線下面積（AUC）分別為0.877、0.909。根據(jù)ROC曲線分析計(jì)算得出TK1、MMP-9 用于預(yù)測NSCLC患者死亡率的Cut-off以及其敏感度和特異度。多因素Logistic回歸分析顯示聯(lián)合檢測TK1、MMP-9 預(yù)測NSCLC患者1年病死率各因子前的系數(shù)（TK1＆MMP-9）=0.007 MMP-9+1.911 TK1-12.983，聯(lián)合檢測TK1、MMP-9 結(jié)果優(yōu)于單一檢測TK1、MMP-9，AUC 為0.925（P<0.001）。見表3、圖2。

表3 TK1、MMP-9 預(yù)測NSCLC患者1年病死率的ROC曲線分析

圖2 TK1、MMP-9 及聯(lián)合檢測預(yù)測NSCLC患者1年病死率的ROC曲線

3 討論

NSCLC是臨床上發(fā)病率、死亡率均較高的疾病，而腫瘤細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移是該病最重要的致死原因之一[1]。因此，尋找高靈敏性、高特異性、操作簡單、經(jīng)濟(jì)實(shí)惠，并可準(zhǔn)確預(yù)測NSCLC患者預(yù)后的血清標(biāo)志物成為目前亟待解決的問題。TK1 作為DNA 修復(fù)酶參與細(xì)胞合成，在多種惡性腫瘤中呈高表達(dá)狀態(tài)[9]。目前，有關(guān)TK1 研究多集中在評(píng)估NSCLC 的化療效果及早期診斷NSCLC 等領(lǐng)域，而TK1 預(yù)測NSCLC患者預(yù)后情況鮮有報(bào)道[10，11]。大量研究表明[4，6，10～12]，NSCLC患者血清中TK1 濃度明顯升高，且與該病轉(zhuǎn)歸相關(guān)。王總飛等[3]研究證實(shí)TK1 與肺部腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)化有關(guān)，可調(diào)控細(xì)胞合成周期，甚至與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移皆有關(guān)聯(lián)，有可能成為預(yù)測NSCLC患者預(yù)后指標(biāo)之一。MMP-9 隸屬M(fèi)MPs家族，具有相對(duì)分子質(zhì)量大的特點(diǎn)，其通過降解相對(duì)應(yīng)的細(xì)胞外基質(zhì)，削弱基底結(jié)締組織“屏障”作用，從而完成協(xié)助腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移的“任務(wù)”[13]。祝麗晶等[14]研究發(fā)現(xiàn)NSCLC患者血清MMP-9 水平顯著高于健康志愿者，且NSCLC 有淋巴轉(zhuǎn)移者血清MMP-9 高于無淋巴轉(zhuǎn)移者，認(rèn)為MMP-9 可作為判斷肺癌侵襲、轉(zhuǎn)移與否及評(píng)估肺癌預(yù)后的生物學(xué)指標(biāo)，與薛慧君等[15]的報(bào)道一致。腫瘤發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，單一檢驗(yàn)任何一種血清標(biāo)志物都不能全面反映腫瘤的分期或嚴(yán)重程度，而聯(lián)合檢測分析則成為預(yù)測腫瘤轉(zhuǎn)歸的有效途徑。本研究通過檢測NSCLC患者血清TK1、MMP-9濃度，并持續(xù)隨訪1年，評(píng)估TK1 及MMP-9 聯(lián)合檢測對(duì)NSCLC患者1年內(nèi)病死率的預(yù)測價(jià)值。

本研究顯示，NSCLC患者隨訪1年病死率為42.86%，與翟建霞等[16]研究結(jié)果相近。同時(shí)發(fā)現(xiàn)NSCLC患者血清TK1、MMP-9濃度與OS呈負(fù)相關(guān)，說明TK1、MMP-9 與NSCLC患者生存時(shí)間相關(guān)，TK1、MMP-9 越低，NSCLC患者生存時(shí)間越長。死亡組NSCLC患者血清TK1、MMP-9濃度明顯高于生存組，提示血清TK1、MMP-9濃度與NSCLC患者的危重程度緊密相關(guān)。ROC曲線分析結(jié)果顯示，患者血清TK1、MMP-9濃度對(duì)NSCLC 隨訪1年病死率評(píng)估的AUC分別為0.877、0.909，表明血清TK1、MMP-9濃度在NSCLC患者預(yù)后評(píng)估中具有理想的臨床應(yīng)用價(jià)值，并且兩者的預(yù)測價(jià)值均較高且差異較小。目前臨床上尚未發(fā)現(xiàn)權(quán)威、理想的檢測指標(biāo)用于評(píng)估NSCLC患者死亡的風(fēng)險(xiǎn)。針對(duì)評(píng)估NSCLC 的預(yù)后研究多采取同時(shí)檢測多個(gè)相關(guān)指標(biāo)，并通過統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行整合，以評(píng)估其嚴(yán)重程度[3，5]。牛玉峰等[6]研究提出多指標(biāo)聯(lián)合對(duì)NSCLC患者進(jìn)行評(píng)估，可以更有效、更準(zhǔn)確地預(yù)判NSCLC的嚴(yán)重程度，并制定個(gè)體化的有效干預(yù)措施，降低患者死亡率。本研究采用多元邏輯回歸計(jì)算TK1、MMP-9 在NSCLC患者隨訪1年死亡率評(píng)估時(shí)對(duì)TK1、MMP-9 的ROC曲線分析發(fā)現(xiàn)其AUC高達(dá)0.925，優(yōu)于單一檢測TK1 及MMP-9。祝麗晶等[14]對(duì)NSCLC患者隨訪1年，并對(duì)其危險(xiǎn)因素進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的晚期NSCLC患者死亡風(fēng)險(xiǎn)增高，提示伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移即腫瘤發(fā)展為晚期可能為NSCLC 病死率的一個(gè)獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

TK1 與MMP-9 聯(lián)合檢測可成為評(píng)估NSCLC患者預(yù)后理想的血清學(xué)指標(biāo)，并具有取材簡單、檢測簡便、快捷，且價(jià)格低廉等優(yōu)點(diǎn)，值得臨床推廣應(yīng)用。但本研究存在樣本量較小、隨訪時(shí)間較短等不足，并僅對(duì)患者入院時(shí)血清TK1、MMP-9濃度進(jìn)行檢測，沒有完善縱向時(shí)間上TK1、MMP-9 的檢測，僅初步探討了血清TK1、MMP-9濃度對(duì)NSCLC患者隨訪1年病死率預(yù)測價(jià)值，故有一定的局限性。在未來研究中，將充實(shí)上述內(nèi)容。