大瀧六線魚T型標志牌標志技術研究

李 莉，劉云凌，張樹東，王 雪，菅玉霞，高鳳祥，潘 雷，郭 文，胡發文*

(1.山東省海洋生物研究院，青島市海洋生物種質資源挖掘與利用工程實驗室，青島市淺海底棲漁業增殖重點實驗室，山東 青島 266104；2.青島市即墨區海洋發展服務中心，山東 青島 266200；3.日照市水產集團總公司，山東 日照 276800)

大瀧六線魚(Hexagrammosotakii)隸屬于鲉形目(Scorpaeniformes)、六線魚科(Hexagrammidate)、六線魚屬(Hexagrammos)，又名歐氏六線魚，主要分布于我國山東和遼寧近海多巖礁海區，也見于朝鮮、日本和俄羅斯遠東諸海，是我國北方重要的海水經濟魚類[1-2]。海洋水質的優劣，直接影響水產品的品質，加之大多數漁民對船舶水污染物造成海洋環境污染的危害性認識不夠，造成了海洋生態環境污染嚴重[3]。近年來，隨著近海漁業資源的過度開發利用，氮磷污染負荷和工廠化能耗等[4]，大瀧六線魚的漁獲量逐年降低，自然資源量銳減，漁業資源亟待修復。

在大瀧六線魚資源嚴重衰退的形勢下，科學規范地開展增殖放流是恢復其自然資源、改善生態環境、促進漁民增收的有效措施。2012年，大瀧六線魚全人工繁育技術獲得成功，以人工育苗技術為支撐，山東省開展了大規模大瀧六線魚增殖放流工作，取得了一定的成效。但重規模、輕評估導致了增殖放流效果沒有得到有效體現，開發并選取適宜大瀧六線魚增殖放流的苗種和標志牌規格對科學評估增殖放流效果具有重要意義。

標志放流技術是修復漁業資源、研究魚類洄游和魚類資源的方法，在魚類資源養護、增殖效果評估中具有重要作用，是研究魚類生活史及其資源時空分布格局的有效手段[5-8]。選擇適合的標志技術應綜合考慮兩方面因素：標志成本、標志對個體存活生長的影響和標志持久度，兩者均是評價標志技術是否合適的重要指標。常用的標志技術主要分為體外標志法和體內標志法，其中T型標志牌標志法應用較為廣泛，具有易操作、性價比高、標志保持率高、易于識別等優點，適合長時間的標志追蹤研究，目前其仍是魚類批量標志放流的主要方法之一[9-10]。國外開展了較多海水魚類的體外掛牌標志放流技術研究，包括金頭鯛(Sparusaurata)[11]、鮭魚(Salmosalar)[12]等。我國標志放流技術研究集中于蝦蟹類和魚類，包括中華絨螯蟹(Eriocheirsinensis)[13]、大黃魚(Pseudosciaenacrocea)[14]、真鯛(Pagrosomusmajor)[15]、魚免魚(Miichthysmiiuy)[16]、牙鲆(Paralichthysolivaceus)[17]、黑鯛(Sparusmacrocephalus)[18]、半滑舌鰨(Cynoglossussemilaevis)[19]等，主要使用的是體外掛牌標志法、化學物質標志法和剪鰭法。國內海水魚類的標志技術取得了一定的進展，但尚未見有關大瀧六線魚標志技術的報道。本文研究了3種不同規格的T型標志牌(T1、T2、T3)對3種規格大瀧六線魚的標志效果，篩選最適宜進行增殖放流的大瀧六線魚規格的T型標志牌，提出T型標志牌操作建議，旨在為大瀧六線魚追蹤調查和增殖放流效果評估提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗于2017年3—5月在山東省海洋生物研究院中試基地進行。試驗所用大瀧六線魚購自青島魯海水產技術發展公司。挑選體色正常、健康活潑、攝食良好的大瀧六線魚在室內水泥池中流水暫養7 d，采用砂濾海水流水養殖，水溫(15.0±0.5)℃，鹽度31，pH 7.9～8.1，投喂海水魚專用配合飼料。選用3種規格的大瀧六線魚用于試驗，分別為A1[全長(5.12±0.30)cm、體重(1.90±0.47)g]、A2[全長(8.26±0.60)cm、體重(5.27±0.54)g]、A3[全長(11.05±1.10)cm、體重(12.05±0.44)g]。試驗開始前禁食24 h。

1.2 試驗方法

T型標志牌及標志槍購自青島海星儀器有限公司，標志牌為聚乙烯材質，安全無毒。標志牌分為3種規格，記為T1、T2、T3(表1、圖1)，其中平均全長5 cm的大瀧六線魚僅以T1標志牌標志，8 cm和11 cm大瀧六線魚均分別以3種規格標志牌標志。共設置7個試驗組(A1-T1、A2-T1、A2-T2、A2-T3、A3-T1、A3-T2、A3-T3)和3個對照組(A1-C、A2-C、A3-C)，每組3個重復，每個重復200尾魚。試驗用魚先在25 m3的水泥池中暫養3 d后，再用于試驗。

表1 試驗用T型標志牌的規格

1.2.1 試驗用品消毒

在試驗開始前，將標志槍槍頭及T型標志牌用75%酒精浸泡5 min消毒。

1.2.2 麻醉

在進行標志操作之前，所有試驗魚用丁香酚(丁香酚∶酒精=1∶9，配比混合后溶于海水)進行麻醉，麻醉劑濃度的選擇標準為魚體入麻時間快、恢復時間短、無不良副作用。參照胡發文等[20]的方法，試驗魚用50 mg/L丁香酚進行麻醉處理。

1.2.3 標志操作

以專用的標志槍進行標志操作。具體操作步驟為：戴上乳膠手套，隨機選取處于麻醉狀態的試驗魚，左手輕壓魚體，右手持標志槍，標志槍與魚體呈45°～60°角，將槍頭自鱗下間隙插入魚背鰭基部下方肌肉最厚的部位，快速按壓扳機將標志牌錨定端打入魚體，切忌將標志槍頭穿透魚體(圖2)。用手指輕壓標志部位，快速抽出標志槍。

1.2.4 消毒

標志后將標志魚放入5 mg/L土霉素的海水溶液中藥浴30 min進行消毒處理，防止傷口感染，消毒過程中持續充氧。

1.2.5 標志魚存活率和脫標率試驗

標志完成后，將各試驗組和對照組的魚分別置于5 m3的小型水泥池中養殖15 d后，隨機從各組中撈取50尾測量全長和體重，開始生長試驗。期間觀察標志魚的行為狀態，統計存活率和脫標率情況，養殖管理同1.1。

1.2.6 標志魚的生長試驗

經工廠化養殖60 d后，各組再次隨機撈取50尾測量各組的全長和體重，以評估標志后生長情況。為減少誤差，標志操作和數據測定分析均由2名固定的專業人員完成。

1.3 數據分析

試驗數據均表示為每個試驗組3個重復的平均值。存活率、脫標率和生長試驗結果用平均值±標準差(Mean±SD)表示。采用SPSS 19.0軟件對全長、體重和存活率進行單因素方差分析(One-way ANOVA)，P<0.05為差異顯著，反之不顯著。

2 結果

2.1 標志大瀧六線魚暫養存活率和脫標率

標志大瀧六線魚麻醉和標志操作過程中均未出現死亡現象。在進行T型掛牌標志后的初期，標志魚一般不游動、不攝食，只有少數魚游泳時身體會向有標志的一側傾斜，對外界刺激的敏感度降低。三個對照組(A1-C、A2-C、A3-C)均無死亡，存活率為100%。平均全長5 cm的大瀧六線魚脫標率高達80.83%，存活率低至10.50%，在標志后的幾小時內就有死亡，標志后的2～5 d內大量死亡。平均全長8 cm的大瀧六線魚，T1標志的脫標率較低，僅為4.83%，存活率達到97.17%，部分試驗魚2 d后游泳行為正常且開始攝食，4 d后大部分試驗魚攝食逐漸正常；T2標志的試驗魚，存活率為87.33%，脫標率為15.33%，5 d后其行為和攝食開始恢復正常；T3標志的存活率為61.33%，脫標率達到31.50%，在標志后第2天開始有試驗魚死亡，9 d后無繼續死亡，8 d后攝食正常；三種標志牌標志的A2規格的大瀧六線魚存活率與對照組相比差異顯著(P<0.05)。平均全長11 cm的大瀧六線魚，T1和T2標志的存活率分別為100%和95.83%，脫標率分別為2.00%和5.67%，1 d后部分魚苗開始攝食，3 d后攝食正常；T3標志的試驗魚存活率為76.83%，脫標率為24.67%，在4 d后開始攝食，7 d后全部攝食正常；A3-T1存活率與對照組相比無顯著差異(P>0.05)，A3-T2和A3-T3存活率與對照組相比差異顯著(P<0.05)。在暫養過程中，各試驗組標志魚均有不同程度的傷口潰爛情況，及時在養殖池中加入20 mg/L高錳酸鉀消毒，并勤換水，癥狀稍輕的標志魚3 d左右傷口潰爛情況好轉，其余標志魚在6 d后傷口炎癥好轉并愈合。

表2 不同規格大瀧六線魚以不同規格T型標志牌標志后15 d的存活率和脫標率

2.2 標志大瀧六線魚苗種的生長情況

標志魚經過60 d養殖后，統計試驗魚的全長和體重數據。平均全長5 cm(A1)的大瀧六線魚由于規格較小，標志后存活率僅為13.00%，所以沒有進行生長試驗。方差分析結果顯示，不同規格標志牌標志對魚的生長無顯著影響。從表3可以看出，試驗開始時，各組大瀧六線魚的全長和體重均無顯著差異(P>0.05)，試驗結束時，各組與對照組的全長和體重及特定生長率也均無顯著差異(P>0.05)，表明標志效果良好。

表3 大瀧六線魚養殖60 d后生長情況對比

2.3 大瀧六線魚標志放流試驗

2017年6月在煙臺近海進行了大瀧六線魚規模化放流試驗，放流大瀧六線魚25×104尾，其中利用T1標志牌標志放流平均全長8 cm的大瀧六線魚1×104尾。

放流前，使用T1標志牌對大瀧六線魚進行標志后在室內養殖池中流水養殖7 d，再出池打包裝船放入大海。出池時，統計大瀧六線魚死亡數和脫標數，結果顯示存活率為99.80%，脫標率為0.70%，表明標志效果較好。

3 討論

3.1 標志對正常生理的影響及其與脫標率和存活率的關系

標志方法適合與否主要看存活率和脫標率這兩個重要指標，理想的標志方法應盡量不影響魚的正常生理活動和生長發育。從本研究生長試驗情況來看，標志魚與對照組生長無顯著差異(P>0.05)，這與大多數魚類標志試驗的結果[21-22]一致。有部分研究發現，標志會對魚的生長產生負面的影響，Rikardsen等發現標志操作后，北極紅點鮭(Salvelinusalpinus)有生長抑制的現象[23]；王茂元等發現鰱魚(Hypophthalmichthysmolitrix)在標志后，其生長與對照組差異顯著[24]。這也說明標志對魚體生長的影響因魚種而異。標志后的一段時間內部分魚苗有不攝食的現象，這與鰱[24]和青石斑魚(Epinephelusawoara)[25]的情況相似，推測可能是麻醉和標志操作過程的影響，一般標志后將魚苗放入養殖池適應一段時間后便可恢復正常。

T型標志牌的錨定端長度、連接線長度和T端直徑等直接影響標志牌的重量，進而影響到掛牌標志的效果。研究發現T型標志牌的連接線長度過短可能會導致較高的脫標率[26]，過長則會額外增加標志牌的重量，并且會增大標志魚在水中游泳時的阻力。因此，要綜合考慮以上因素來確定所需T型標志牌的規格。從脫標率、存活率和試驗魚的游泳、攝食和炎癥情況來看，平均全長5 cm及以下的大瀧六線魚不適合采用T型標志牌標志，即使使用規格最小的T1標志牌進行標志，魚苗也有較高的死亡率；平均全長8 cm的大瀧六線魚適宜用T1標志牌標志；平均全長11 cm的大瀧六線魚適宜用T1和T2標志牌標志。從本試驗的研究結果來看，直徑較大和錨定端長度較長的標志牌會對標志魚的體表造成較大的創傷，從而導致傷口發炎，出現較高的死亡率。T1標志牌對魚體錨定部位的創傷較小，標志后5～7 d傷口基本愈合，標志魚的脫標率與死亡率都較低，標志效果較好。

由此可見，在本試驗條件下，平均全長5 cm及以下的大瀧六線魚不適合以標志牌標志進行放流，平均全長8 cm的大瀧六線魚，可以使用T1標志牌標志，平均全長11 cm的大瀧六線魚可使用T1和T2標志牌標志。

3.2 其他影響標志存活率和脫標率的因素

在對試驗魚進行標志時，為了避免對試驗魚造成創傷，一般會先對試驗魚進行麻醉，目前，丁香酚和MS-222被認為是最安全有效的麻醉藥物[27-28]，被廣泛應用于魚類催產、運輸、標志放流等漁業生產和研究中[29]。使用麻醉劑能使魚保持鎮靜，減少因應激引起的創傷，提高存活率[30]。若麻醉劑的劑量過大或麻醉時間過長，會導致魚類死亡，所以一次麻醉的魚類數量不宜過多[31]。大瀧六線魚應激反應強烈，若苗種不經過麻醉而直接進行標志操作，標志魚劇烈掙扎，極易對標志魚造成機械損傷，從而導致苗種標志后死亡，因此，有必要使用適量麻醉劑對其麻醉后進行標志操作。

標志操作會對體表造成創傷，選擇魚體背部肌肉較厚的位置進行操作，這個部位遠離中樞神經和血液循環系統，對標志魚的影響較小。將標志槍與魚體呈45°～60°角斜插入背部進行標志，可使標志牌向整個魚體斜后方傾斜，減少魚體在水中游泳時的阻力。在對鮭魚(Salmosalar)進行標志研究時，標志操作過程如果操作不當，或者標志后標志魚不進行暫養就放入野生環境，會造成標志魚標志部位傷口潰爛，導致死亡或生長抑制[32]。因此，在標志操作前，應對標志槍和T型標志牌進行消毒處理，并對標志魚進行消毒處理，在標志后暫養7 d再進行放流，標志魚的創口可在較短時間愈合，提高標志放流成功率。

3.3 適宜標志苗種規格的選擇

掛牌標志一般用于體長15 cm以上的魚[33]。但大瀧六線魚的放流規格一般為5～8 cm，在本研究中，平均全長8 cm的大瀧六線魚適宜用T1規格的標志牌標志，存活率達到98.00%，脫標率4.00%。但是對于不同種類和不同規格的魚種，應選用合適的T型標志牌，標志牌過大會對標志魚的游泳和攝食行為產生影響，標志牌過小會導致較高的脫標率。因此，建議在往后的大瀧六線魚標志放流時，選擇平均全長8 cm及以上的魚種為宜。

4 建議

鑒于本文研究結果，結合以往資料，建議：1)停食：標志操作前待標志魚停食24 h；2)消毒：標志槍槍頭和T型標志牌使用前用75%酒精浸泡消毒5 min；3)麻醉操作：選用50 mg/L丁香酚溶液進行麻醉，待魚體失去平衡、腹部向上翻轉時迅速進行標志；4)標志操作：標志槍與魚體呈45°～60°角，將槍頭斜插入魚體背部肌肉最厚處，迅速按下扳機將標志牌打入魚體內部后按壓抽出標志槍；5)魚體消毒：標志完成后，將標志魚放入5 mg/L土霉素的海水溶液中藥浴消毒30 min；6)標志后暫養：消毒后的標志魚暫養5～7 d后再放流。