氯化鈉濃度對鱸鯉精子活力的影響

譚中林，鄧思紅，陳修松，徐大勇，何學福

(1.涼山科華水生態工程有限公司，四川 西昌 615013；2.喜德正源水產有限公司，四川 西昌 615013；3.西昌學院動物科學學院，四川 西昌 615013；4.西南大學生命科學學院，重慶 400000)

鱸鯉(Percocyprispingi)屬于鯉形目、鯉科、鲃亞科、鱸鯉屬，又名花魚、青脖、花鯉，在四川境內僅有一種，主要分布于四川的岷江、青衣江、馬邊河(岷江支流)、金沙江下段、雅礱江、烏江等水系，是四川省珍貴的魚類之一，也是四川省重點保護的魚類之一。鱸鯉個體較大，體質量一般為1～3 kg，野外漁獲中最大個體質量達到16.5 kg。鱸鯉為肉食性兇猛魚類，魚肉口感鮮美，營養豐富，又有很高的藥用價值和保健作用，為上等優質食用魚，具有很高的經濟價值。

近幾十年來，隨著長江上游新一輪水電大開發和水利樞紐工程的修建，鱸鯉的產卵場不復存在，其索餌場也遭到了極大的破壞，再加之其生態環境的日益惡化以及人為的過度捕撈等因素，鱸鯉的資源量急劇下降，瀕臨絕滅。目前，該種魚的人工繁殖與增養殖已引起重視，國內學者們已對其某些生物學特性以及養殖技術方面做了大量的工作[1-24]，但關于鱸鯉的精子生理特性未見報道，而研究這種魚的精子生物學和了解其精子壽命，在理論與生產上均具有一定的意義。為此，本文就氯化鈉溶液對精子活力的影響做了初步觀察，旨在了解在不同的滲透壓條件下鱸鯉精子的生理特性，積累鱸鯉精子的生物學資料。

1 材料與方法

1.1 材料

2012年4月6日，精液取自江河幼魚經涼山州喜德正源水產有限公司內塘養殖的成熟健康的鱸鯉親魚。選取繁殖季節體格健壯、外無損傷、輕擠腹部精液自動流出的成熟雄魚，魚體質量2.0～6.0 kg，體長460～550 mm。

1.2 方法

1.2.1 溶液配制

用氯化鈉加蒸餾水配制不同百分比濃度的溶液：0%(蒸餾水)、0.10%、0.20%、0.30%、0.35%、0.40%、0.45%、0.50%、0.55%、0.60%、0.65%、0.70%、0.90%。溶液水溫為18.0℃，pH 6.5～7.5。

1.2.2 精液采集

每次取材前先用干布將其生殖孔周圍擦干，輕擠魚腹兩側，精液盛于小培養皿中，加蓋待檢。要求采集的精液無水、無尿、無血。

1.2.3 精子觀察

采用平板載片法，用吸管滴一滴氯化鈉溶液在平板載片上，調節好顯微鏡。然后用解剖針尖蘸取少許精液與氯化鈉溶液調勻，立即移至10×10倍顯微鏡下觀察記錄其精子活動情況。以精液與溶液接觸的瞬間開始啟動秒表來計錄精子活動的時間，室溫為16.4～19.4℃，每個濃度組重復6次。

1.2.4 精子群體運動階段的劃分

精子群體運動階段的劃分參照吳景貴[25]的方法。根據鱸鯉精子在水中的運動狀態，可以分為激烈運動、緩慢運動、搖尾運動三個連續的階段。這三個階段時間的總和即為精子的壽命。各階段的具體劃分標準如下：

1)激烈運動：自精液與溶液相遇的瞬間開始，在10×10倍鏡面下只見到翻動的黑點，看不清精子的形態和運動路線。

2)緩慢運動：精子向前運動，速度較慢，能分清其運動路線。

3)搖尾運動：精子失去前進運動能力，只能在原地做微弱搖尾擺動，直到停止運動而死亡。

以視野中約70%精子由前一運動階段轉為后一運動階段時，即認為該批精子前一運動階段的終結和后一運動階段的開始。搖尾運動階段的終了，精子運動停止，即90%以上精子都停止活動而死亡。

1.2.5 數據分析

試驗數據處理分析采用Excel和SPSS 17.0軟件進行統計學分析。

2 結果與分析

不同濃度氯化鈉溶液中鱸鯉精子各階段的持續時間不同，具體詳見表1。

表1 鱸鯉精子在不同濃度氯化鈉溶液中各個階段的持續時間

續表1

當氯化鈉溶液濃度為0%～0.35%時，鱸鯉精子壽命隨氯化鈉溶液濃度升高而相對延長。在濃度為0.35%時激烈運動時間和精子壽命最長，分別為(66.33±7.99)s、(635.66±95.78)s。在氯化鈉溶液濃度超過0.35%后，精子的活動強度減弱，存活時間縮短。當氯化鈉溶液濃度達0.70%時，精子活動受到嚴重抑制，觀察不到被激活的精子。由此可見，氯化鈉溶液對鱸鯉精子活力具有影響。

統計學分析顯示，當氯化鈉溶液濃度為0.35%時，鱸鯉精子的激烈運動時間僅顯著高于0.60%組和0.65%組(P<0.05)，而與其余各組之間差異不顯著(P>0.05)；當氯化鈉溶液濃度為0.35%時，鱸鯉精子的壽命極顯著高于其他處理組(P<0.01)；當氯化鈉濃度為0.40%時，鱸鯉精子的壽命極顯著高于除0.35%處理組外的其余處理組(P<0.01)。

3 討論

滲透壓是影響魚類精子激活和活力的眾多因素中最關鍵的影響因子[26-27]。一般認為淡水魚類精子的激活是由低滲環境所致，并且存在精子活動時間最長的最適滲透壓[28-29]。體外受精的魚類精子儲存的能量有限，一旦被激活，一般只有幾十秒至幾分鐘就被消耗完。這種精子的短暫運動與精子新陳代謝、細胞的興奮性和滲透壓的調節有關[30]。鱸鯉精子同其他魚類的精子一樣，在精巢中是不活動的，一旦與適合精子活動的溶液接觸就會被激活而開始激烈運動，其最具有受精意義的時相是激烈運動階段。隨著本身能源物質的消耗，運動速度逐漸轉慢，最后完全失去運動能力，細胞隨之死亡、分解。

對于生物來說，決定體液濃度的主要物質是鹽分。換句話說，體液的滲透壓比較高就是指體液里鹽分的濃度比較高。通常淡水中的滲透壓非常低，這是因為水中基本沒有溶入鹽分，所以淡水魚類體液的鹽分濃度一般比外界水環境要高些，系高滲性溶液，而淡水本身則接近于零。當鱸鯉的精子接觸淡水后勢必消耗大量的能量來抵抗外界水的滲入，這就加快了其精子的死亡。在淡水中添加氯化鈉，則可以提高溶液的滲透壓，使其盡可能接近鱸鯉精子本身的滲透壓，進而延長精子壽命，提高受精率。從上述分析比較可以得出：當氯化鈉溶液濃度為0.35%時，鱸鯉精子激烈運動時間和壽命最長，因而在生產實踐中配制鱸鯉精子激活劑時，0.35%氯化鈉溶液可作為參考值，以延長精子活力，保持精子的激烈運動狀態。同時，當氯化鈉溶液濃度為0.35%時，鱸鯉精子激烈運動時間雖然最長，但除與0.60%和0.65%差異顯著外，和其他處理組均差異均不顯著，參考鄧岳松等關于魚類精子活力的研究進展，體外受精魚類的精子活力不僅與自身質量有關，還受到pH、滲透壓、溫度及離子等因子的調節和影響[31]，究竟哪種因子能夠顯著影響鱸鯉精子活力尤其是激烈運動狀態，有待進一步研究。Morisawa等[32]在研究鯉(Cyprinuscarpio)、鯽(Carassiusauratus)、歐鯽(Carassiuscarassius)和兩種雅羅魚(Leuciscus)精子活動中指出，鯉科魚類精子在與其精漿等滲的電解質(NaCl或KCl)或非電解質(甘露糖或葡萄糖)溶液中是不活動的，精漿的滲透壓濃度是抑制精子活動的因子。當氯化鈉溶液濃度大于0.70%時，鱸鯉精子不活動，由此推測與鱸鯉精漿等滲的氯化鈉濃度為0.70%，故該結果可作為鱸鯉精子保存液的參考值。