莆田市26 141例新生兒耳聾基因聯(lián)合聽力篩查的結(jié)果分析

蟻持纓，阮一君，陳益萍

我國新生兒耳聾的發(fā)病率約為1‰，5歲以下兒童聽力障礙的發(fā)病率達(dá)2.7%[1]。研究發(fā)現(xiàn)，65%的兒童期耳聾與遺傳因素有關(guān)[2]。對(duì)新生兒進(jìn)行遺傳性耳聾基因突變篩查，并進(jìn)行早診斷、早治療，可有效干預(yù)聾啞的發(fā)生。最重要的是通過基因突變篩查可發(fā)現(xiàn)常規(guī)物理聽力篩查無法檢出的藥物性致聾基因攜帶者和遲發(fā)性耳聾基因攜帶者，通過健康指導(dǎo)避免藥物性耳聾或減緩遲發(fā)性耳聾的發(fā)生[3]。2019年3月1日起，莆田市開始開展新生兒遺傳性耳聾基因與聽力聯(lián)合篩查，現(xiàn)總結(jié)分析如下。

1 對(duì)象與方法

1.1對(duì)象 收集2019年3月1日-12月31日在莆田市30家助產(chǎn)機(jī)構(gòu)出生且父母一方或雙方為莆田市戶籍同時(shí)接受耳聾基因和聽力聯(lián)合篩查的新生兒26 141例。納入標(biāo)準(zhǔn)：胎齡≥37周，體質(zhì)量≥2 500 g，Apgar評(píng)分≥3分。排除標(biāo)準(zhǔn)：胎齡<37周，體質(zhì)量<2 500 g，Apgar評(píng)分<3分。耳聾基因篩查和聽力篩查均在家屬知情同意情況下進(jìn)行。

1.2聽力篩查 所有新生兒均于出生2～3 d后由出生醫(yī)院采用耳聲發(fā)射檢測儀(MSOAE-IH, 河南邁松醫(yī)用設(shè)備有限公司)進(jìn)行初次聽力篩查，未通過者在出生后28～42 d進(jìn)行復(fù)篩，采用聽性腦干誘發(fā)電位法進(jìn)行檢測，>30 dBnHL判定為不通過。復(fù)篩未通過者建議3月齡時(shí)進(jìn)行聽力學(xué)診斷。

1.3耳聾基因篩查 所有新生兒均由出生醫(yī)院采集新生兒臍帶血，制成濾紙干血片，樣本均使用15項(xiàng)遺傳性耳聾基因芯片檢測試劑盒(北京博奧晶典生物技術(shù)有限公司)，應(yīng)用微陣列芯片法對(duì)GJB2、GJB3、SLC26A4和線粒體12S rRNA 4個(gè)常見耳聾基因的15個(gè)突變位點(diǎn)(35 del G、176 del 16、235 del C、299 del AT、538 C>T、2168 A>G、IVS 7-2 A>G、1174 A>T、1226 G>A、1229 C>T、IVS15+5 G>A、1975 G>C、2027 T>A、1494 C>T、1555 A>G)進(jìn)行檢測。篩查結(jié)果為純合或雜合突變、均質(zhì)突變、異質(zhì)突變均為陽性，共825例，均進(jìn)行復(fù)查質(zhì)控；篩查陰性的新生兒則采取隨機(jī)數(shù)字表法抽取1 266份標(biāo)本(占檢測總量中陰性結(jié)果的5%)進(jìn)行復(fù)查質(zhì)控，復(fù)查結(jié)果準(zhǔn)確率100%。同時(shí)對(duì)825份陽性標(biāo)本即時(shí)應(yīng)用一代測序法復(fù)核驗(yàn)證篩查的準(zhǔn)確性，準(zhǔn)確率100%。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用EXCEL進(jìn)行數(shù)據(jù)錄入，耳聾基因常見突變和聽力篩查情況的構(gòu)成比比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.2耳聾基因篩查結(jié)果 26 141例中，耳聾基因陽性825例(3.16%)。各類基因突變的檢出率由高到低依次為：GJB2,SLC26A4,12S rRNA,GJB3，雙基因及單基因雙位點(diǎn)突變，以GJB2基因235 del C雜合突變的檢出率最高，其次為SLC26A4基因IVS7-2 A>G雜合突變(表1)。

表1 26 141例新生兒耳聾基因常見突變及聽力篩查情況

2.3耳聾基因與聽力聯(lián)合篩查結(jié)果 26 141例中，耳聾基因篩查的結(jié)果為“金標(biāo)準(zhǔn)”，其靈敏度為3.64%，特異度為98.75%，陽性預(yù)測值8.68%，陰性預(yù)測值為96.92%(表2)。

表2 耳聾基因與聽力篩查試驗(yàn)的四格表

3 討 論

耳聾是人類常見的出生缺陷之一，嚴(yán)重影響出生人口的素質(zhì)。針對(duì)中國人群的流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，GJB2、SLC26A4、線粒體12S rRNA基因突變是導(dǎo)致中國人耳聾最高發(fā)的基因，約占30%，且均存在高發(fā)熱點(diǎn)突變[4]。GJB2基因是迄今報(bào)道引起我國綜合性耳聾的首要致病基因[5]，其突變引起的耳聾約占遺傳性耳聾的50%[6]。在中國人群中最常見的突變位點(diǎn)是235 del C突變[7]，在耳聾致病性突變中占78.79%[8]。本研究數(shù)據(jù)顯示，莆田市GJB2基因突變發(fā)生率最高，攜帶率為1.51%，略低于其他研究報(bào)告；而235 del C突變占該基因突變的84.85%，略高于其他研究報(bào)告，可能與本研究選擇的檢測位點(diǎn)有關(guān)。SLC26A4基因突變率1.14%，僅次于GJB2基因突變。線粒體12S rRNA基因、GJB3基因突變率分別為0.27%和0.21%，在莆田市新生兒中攜帶率較低。

單純聽力篩查可為耳聾發(fā)病原因提供部分依據(jù)，但新生兒聽力篩查存在局限性，因不是所有聽力損失均會(huì)在出生后立即表現(xiàn)出來，如藥物性耳聾突變(即線粒體12S rRNA突變)和PDS類型(即SLC26A4基因雜合突變)，一般的聽力篩查并不能檢出這些遲發(fā)型耳聾類型[9-10]。本研究顯示，有22例GJB2基因突變、5例SLC26A4基因突變、2例線粒體12S rRNA基因突變和1例雙基因雜合突變未通過聽力篩查，這些新生兒出生時(shí)已表現(xiàn)出聽力損失，應(yīng)早期給予干預(yù)措施，才能減少聽力障礙的發(fā)生，避免因聾致啞。有374例GJB2基因突變、292例SLC26A4基因突變、69例線粒體12S rRNA基因突變、5例雙基因雜合突變和1例單基因雙位點(diǎn)突變通過聽力篩查，特別是54例GJB3 538 C>T雜合突變?nèi)客ㄟ^聽力篩查。這部分患兒雖然早期沒有表現(xiàn)出聽力損失或障礙，但SLC26A4基因突變與大前庭水管綜合征有關(guān)，及時(shí)檢出SLC26A4基因突變，指導(dǎo)患兒采取有效的防護(hù)措施，避免激烈運(yùn)動(dòng)、顱腦外傷等環(huán)境因素，可避免或減緩聽力下降的速度。線粒體12S rRNA基因又被稱為藥物敏感性耳聾基因，正常劑量或小劑量的氨基糖苷類抗生素即可在短時(shí)間內(nèi)引起毛細(xì)胞損傷而出現(xiàn)不可逆的耳聾，對(duì)線粒體12S rRNA基因攜帶的新生兒做好終身禁用氨基糖苷類藥物的指導(dǎo)，可避免藥物性耳聾發(fā)生。本研究在通過聽力篩查的25 000例新生兒中檢出795例攜帶耳聾基因突變，表明遺傳性耳聾基因檢測從分子水平提早明確耳聾遺傳因素，在遲發(fā)性和藥物性耳聾的及早發(fā)現(xiàn)上具有明顯且不可替代的優(yōu)勢。耳聾基因與聽力聯(lián)合篩查，有助于及時(shí)發(fā)現(xiàn)聽力正常但基因突變的新生兒，對(duì)這部分患兒長期監(jiān)測聽力，同時(shí)對(duì)新生兒家屬做好遺傳咨詢、健康教育和隨訪，可避免、減少或延緩耳聾發(fā)生，指導(dǎo)患兒及其家族內(nèi)成員婚育，可避免再生育出類似的耳聾后代。

另外，本研究中346例聽力篩查未通過的新生兒中，有316例通過耳聾基因篩查，可能與耳聲發(fā)射易受噪聲、外耳道分泌物殘留等因素影響存在假陽性有關(guān)，也可能與患者存在除本研究篩查的4個(gè)常見耳聾基因外的其他基因突變有關(guān)，擴(kuò)大篩查位點(diǎn)有助于提高檢出率。本研究僅檢測4個(gè)常見耳聾基因，存在一定的局限性。受家長認(rèn)知等因素影響，在對(duì)346例聽力篩查未通過的新生兒隨訪中，家長均表示新生兒對(duì)聲音反應(yīng)良好，僅2名兒童在3月齡時(shí)進(jìn)行過聽力學(xué)評(píng)估和診斷(結(jié)果均顯示正常)，其他兒童仍存在遲發(fā)性或漸進(jìn)性聽力損失的可能，與阮一君的研究結(jié)果類似[11]。

新生兒耳聾基因篩查聯(lián)合聽力篩查，可以彌補(bǔ)常規(guī)聽力篩查不能發(fā)現(xiàn)的遲發(fā)性耳聾和藥物性耳聾基因攜帶者的不足，有助于準(zhǔn)確做出病因分析，開展聽力學(xué)檢測和診斷，及早確認(rèn)聽力狀況，針對(duì)性進(jìn)行康復(fù)指導(dǎo)、佩戴助聽器、人工耳蝸植入等早期干預(yù)指導(dǎo)以及生活和用藥指導(dǎo)，可減少聽力障礙的發(fā)生，最大可能避免由聾致啞，真正實(shí)現(xiàn)及早發(fā)現(xiàn)、及早診斷和及早干預(yù)，達(dá)到有效預(yù)防出生缺陷的目的，減輕家庭和社會(huì)負(fù)擔(dān)，促進(jìn)社會(huì)和諧發(fā)展。新生兒耳聾基因篩查聯(lián)合聽力篩查適合全面推廣。