嘧霉胺替代多菌靈在柑橘貯藏過程中的降解及防效研究

平新亮 林 媚 王天玉 徐程楠 姚周麟 張偉清 馮先橘

（浙江省柑桔研究所，浙江臺州318020）

多菌靈是一種廣譜性殺菌劑，對多種作物上由真菌（如半知菌、多子囊菌）引起的病害有防治效果[1～2]。多菌靈因其較好的防治效果和實惠售價廣泛應(yīng)用于柑橘種植、貯存過程。溫州蜜柑是我國柑橘罐頭的生產(chǎn)原料，我國柑橘罐頭主要出口市場是美國和日本，占比高達70%。美國食品藥品監(jiān)督管理局 （FDA）從2011年開始對食品中多菌靈農(nóng)藥殘留的限量標(biāo)準(zhǔn)進行修改，針對柑橘類產(chǎn)品多菌靈殘留限量小于0.01 mg/kg[3～4]，遠低于國際食品法典委員會（CAC）規(guī)定的1 mg/kg、日本3 mg/kg以及我國5 mg/kg 的限量標(biāo)準(zhǔn)[5]。2016年我國有出口美國的柑橘罐頭被FDA 檢出多菌靈農(nóng)藥殘留超標(biāo)而退貨。為應(yīng)對美國貿(mào)易壁壘、破解多菌靈農(nóng)藥殘留超標(biāo)難題，本文對嘧霉胺替代多菌靈在柑橘貯藏期使用的安全性及防治效果進行了研究。

一、材料與方法

（一）供試藥劑50%多菌靈可濕性粉劑，江蘇藍豐生物化工股份有限公司生產(chǎn)； 400 g/L 嘧霉胺懸浮劑，德國拜耳公司生產(chǎn)； 色譜乙腈，霍尼韋爾公司生產(chǎn)； N－丙基乙二胺固相吸附劑 （PSA）、石墨化炭黑 （GCB）、十八烷基硅膠 （C18），美國安捷倫科技有限公司生產(chǎn)。

（二）主要儀器氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用儀（GCMS）7890A－5975C（美國安捷倫科技有限公司）；液相色譜 （LC）1200 （美國安捷倫科技有限公司）；旋渦混勻器IKA MS3 （德國IKA）；高速離心機ANKE TDL－40B （上海安亭科學(xué)儀器廠）；氮吹儀N－EVAP111TM111（美國ORGANOMATION 公司），勻漿儀FA25（上海弗魯克流體械制造有限公司）。

（三）試驗方案試驗對象選擇溫州蜜柑以及紅美人兩個柑橘品種。依據(jù)農(nóng)藥產(chǎn)品施藥說明，嘧霉胺防治灰霉病推薦使用濃度為1000～1500 倍，多菌靈用于水果病害防治推薦制劑用藥量為500～1000 倍，所以試驗設(shè)置嘧霉胺1000 倍液、嘧霉胺1500 倍液、多菌靈600 倍液以及空白對照4 個處理，每個處理重復(fù)3 次。

試驗浸藥處理： 柑橘裝入浸藥筐中，讓果實保持浸入藥液1 min 后取出，自然晾干藥液后裝入塑料筐，底部墊上報紙，置于陰涼通風(fēng)處貯藏[6～7]。

嘧霉胺殘留試驗： 浸藥后第0、1、2、3、4、5、7、14、21 d 取樣檢測柑橘果皮、全果以及果肉中嘧霉胺含量； 多菌靈殘留試驗： 浸藥后第1、5、10、14、21、28、35、55 d 取樣檢測柑橘果皮、全果以及果肉中多菌靈含量； 嘧霉胺與多菌靈處理溫州蜜柑貯藏防效試驗： 于浸藥后15、30 和60 d 調(diào)查果實腐爛率并計算防治效果。

（四）嘧霉胺殘留檢測方法

1.樣品處理。準(zhǔn)確稱取柑橘樣品10 g，加入20 mL 正己烷∶乙酸乙酯 （1∶1），加入1 g NaCl，4 g MgSO4，勻漿30 s，4000 r/min 離心3 min。移取上清液10～15 mL 至離心管； 加入100 mgPSA、100 mgC18、100 mg GCB、150 mgMgSO4旋渦混勻30 s，過膜，進行GC－MS 測定[8～9]。

2.氣相色譜條件。采用不分流進樣； 載氣為氦氣，純度≥99.999%，恒流模式，載氣流量為1 mL/min，進樣口溫度為250℃； 毛細管柱為VF 1701 （30 m×0.25 mm i.d.×0.25 μm d.f）； 程序升溫，初溫50℃保持1 min，以20℃/min 升至170℃保持1 min，以10℃/min 升至270℃保持7 min；進樣量為1 μL。

3.質(zhì)譜條件。電離方式為電子轟擊電離（EI），電子轟擊源能量70 eV，離子源溫度230℃，四極桿溫度為150℃； GC－MS 接口溫度為280℃。選擇離子監(jiān)測方式（SIM）：選擇1 個定量離子198，2個定性離子199 和200。

（五）多菌靈殘留檢測方法

1.樣品處理。準(zhǔn)確稱取柑橘樣品10 g 至50 mL 離心管中，加入5 mL 鹽酸（0.1 mol/L）和10 mL乙腈，勻漿，超聲10 min，用氫氧化鈉 （1 mol/L，約0.7 mL）調(diào)節(jié)pH 值至7.5 左右； 加入5 g 氯化鈉，搖勻并離心10 min，取上清液1 mL 加入吸附劑（50 mgPSA+50 mgC18），過0.22μm 膜，進樣。

2.液相色譜條件。色譜柱為Agilent C18 不銹鋼柱（4.6×250 mm i.d.，5 μm）；流動相A 為乙腈，B為10 mmol/L 乙酸銨； 流速為1 mL/min； 采用梯度洗脫，0～8.5 min，A 為20%～42%，8.5～15 min，A 為42%～70%，15～21 min，A 為70%～20%，進樣量為20 μL； 柱溫為35℃； 檢測波長為280 nm； 以保留時間定性，外標(biāo)法峰面積定量。

二、結(jié)果與分析

圖1 紅美人經(jīng)1000 倍嘧霉胺浸藥后的殘留動態(tài)

圖2 溫州蜜柑經(jīng)1000 倍嘧霉胺浸藥后的殘留動態(tài)

圖3 紅美人經(jīng)1500 倍嘧霉胺浸藥后的殘留動態(tài)

圖4 溫州蜜柑經(jīng)1500 倍嘧霉胺浸藥后的殘留動態(tài)

（一）經(jīng)浸藥后的紅美人及溫州蜜柑嘧霉胺殘留動態(tài)紅美人、溫州蜜柑經(jīng)嘧霉胺浸藥后，其全果和果皮中嘧霉胺殘留動態(tài)曲線如圖1～圖4 所示。結(jié)果表明，經(jīng)嘧霉胺1000 倍液與1500 倍液處理后，紅美人和溫州蜜柑果實中嘧霉胺殘留動態(tài)趨勢相似，浸藥后前5 d，嘧霉胺快速降解，之后進入緩慢降解過程，最終穩(wěn)定在1 個較低濃度。嘧霉胺在柑橘中的農(nóng)藥殘留主要集中在果皮中，且紅美人果皮中嘧霉胺含量顯著高于溫州蜜柑，其中，紅美人果皮中嘧霉胺含量約為全果的7 倍，而溫州蜜柑果皮中嘧霉胺含量約為全果含量的5 倍； 浸藥后的紅美人及溫州蜜柑全果嘧霉胺含量處于較低含量水平，其最高含量小于0.5 mg/kg，全果中嘧霉胺降解規(guī)律與果皮中嘧霉胺含量變化曲線一致； 紅美人、溫州蜜柑經(jīng)1000 倍嘧霉胺浸藥后，果肉中嘧霉胺含量始終低于0.01 mg/kg。

（二）經(jīng)浸藥后的溫州蜜柑果肉中的多菌靈殘留動態(tài)經(jīng)多菌靈600 倍液浸藥后，溫州蜜柑果肉中多菌靈殘留動態(tài)如圖5 所示，多菌靈在溫州蜜柑果肉中含量呈現(xiàn)先增后減[10]，浸藥后14 d 果肉中多菌靈達到峰值，隨后逐漸降低，35 d 后進入緩慢減少階段，60 d 后果肉中多菌靈含量仍處于相對較高值，含量為0.116 mg/kg。

圖5 溫州蜜柑經(jīng)多菌靈600 倍液浸藥后的殘留動態(tài)

（三）多菌靈與嘧霉胺浸藥處理對溫州蜜柑及紅美人柑橘的防效溫州蜜柑、紅美人的浸藥防治效果如表1 所示，由結(jié)果可見，溫州蜜柑和紅美人經(jīng)嘧霉胺1000 倍液、嘧霉胺1500 倍液以及多菌靈600 倍液處理后，在藥劑處理30 d 內(nèi)，3 個處理對溫州蜜柑均有較好防治效果[11]，其防效比較結(jié)果為嘧霉胺1000 倍液處理＞多菌靈600 倍液處理＞嘧霉胺1500 倍液處理，而3 個處理的60 d 防治效果均不理想，其中多菌靈600 倍液處理防效相對較好，防效為52.6%。3 個處理對紅美人防治效果不佳，處理后30 d 內(nèi)防效順序為嘧霉胺1000 倍液處理＞嘧霉胺1500 倍液處理＞多菌靈600 倍液處理，60 d 防治效果以多菌靈600 倍液處理相對較好。

表1 多菌靈與嘧霉胺浸藥處理對溫州蜜柑及紅美人的防治效果

三、結(jié)論

本研究結(jié)果表明，從柑橘浸藥處理后30 d 內(nèi)的短期保鮮效果看，嘧霉胺1000 倍液處理略好于多菌靈600 倍液處理，各處理在60 d 以上的保鮮效果均不理想。殘留動態(tài)試驗表明，嘧霉胺在浸藥處理后快速降解，5 d 后其殘留就降到1 個較低水平，之后進入緩慢降解過程，且各處理的嘧霉胺在果肉中含量均低于0.01 mg/kg； 多菌靈在柑橘果肉中含量呈先增后減，浸藥后14 d 達到峰值，60 d后果肉中多菌靈含量仍有0.116 mg/kg。

以對出口美國柑橘制品規(guī)定的殘留限量應(yīng)低于0.01 mg/kg 為參照，加工用柑橘原材料應(yīng)嚴禁多菌靈用于保鮮，若使用后可能會導(dǎo)致多菌靈殘留超標(biāo)。嘧霉胺浸藥處理不僅在30 d 內(nèi)的防治效果優(yōu)于多菌靈，且使用后迅速降解，5 d 后嘧霉胺殘留到達較低水平，且在果肉中含量始終低于0.01 mg/kg。綜上所述，嘧霉胺可作為替代多菌靈的柑橘短期保鮮農(nóng)藥。