病毒性腦炎患兒血清和腦脊液中ficolin-3、C3和C4的變化分析

汪學(xué)靜 馬燕 奚玉廷

病毒性腦炎(viral encephalitis，VE)是臨床常見的神經(jīng)系統(tǒng)感染疾病，以兒童多見，是造成兒童殘疾和死亡的重要原因之一。VE發(fā)病率高，且病情一般較危急，常因不能及時治療而留有后遺癥，影響預(yù)后。因此，探討與VE發(fā)病相關(guān)因子顯得尤為重要，以期為早期診治VE提供幫助。VE是由病毒感染引起的腦部炎性反應(yīng)，研究發(fā)現(xiàn)纖維膠凝蛋白3(ficolin-3)介導(dǎo)的補體凝集素途徑激活，可參與腦損傷炎性反應(yīng)等多種病理生理過程[1]。補體C3、C4活化后在多種炎性反應(yīng)過程中發(fā)揮重要作用[2,3]。已有研究報道[4]，血清ficolin-3及補體C3、C4相互作用參與原發(fā)性高血壓發(fā)展進程，對判斷預(yù)后有一定價值。而ficolin-3、C3、C4與VE患兒關(guān)系尚不十分清楚。鑒于此，本研究通過檢測VE患兒血清和腦脊液中ficolin-3、C3、C4水平，探討三者與VE患兒病情嚴重程度關(guān)系，并分析對VE患兒急性發(fā)作的預(yù)測價值。報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年5月至2019年7月我院兒科住院治療的70例VE患兒作為VE組，其中男38例，女32例；年齡0.5～11歲，平均年齡(7.15±2.23)歲。另選取同期在本院進行外科手術(shù)且需腰麻的非感染性疾病患兒30例作為對照組，其中男17例，女13例；年齡0.5～11歲，平均年齡(7.24±2.30)歲。本研究符合本院倫理委員會要求。根據(jù)入院時臨床體征將70例VE患兒分為2組：輕癥組39例，其中男22例，女17例；年齡1～10歲，平均年齡(6.89±2.28)歲；重癥組31例，其中男16例，女15例；年齡0.5～11歲，平均年齡(7.19±2.20)歲。按照入院時病情緩急程度將70例VE患兒分為非急性期和急性期。非急性期34例，其中男17例，女17例；年齡1～11歲，平均年齡(7.21±2.25)歲；急性期36例，其中男21例，女15例；年齡0.5～10歲，平均年齡(7.07±2.18)歲。

1.2 納入與排除標(biāo)準 納入標(biāo)準：(1)均符合VE相關(guān)診斷標(biāo)準[5]；(2)未合并其他感染性疾病；(3)臨床資料完整；(4)家屬均知情同意。排除標(biāo)準：(1)合并其他顱腦病變患兒；(2)伴有先天性心臟病；(3)生長發(fā)育異常患兒；(4)合并免疫系統(tǒng)疾病患兒。

1.3 樣本采集與貯存 采集所有患兒入院第2天清晨空腹肘靜脈血3 ml，分別置于真空采血管中，離心(3 000 r/min，半徑6 cm)10 min取上清，保存于-40℃冰箱備用。并使用腰脊髓池穿刺抽取腦脊液3 ml，在3 000 r/min、半徑6 cm離心機中離心15 min，留取上清置于-40℃冰箱待測。

1.4 檢測方法 血清和腦脊液中ficolin-3水平檢測，均使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)雙抗體夾心法，人ficolin-3試劑盒購自上海欽誠生物科技有限公司，操作步驟按試劑盒說明書進行。血清和腦脊液中C3、C4水平使用散射比濁法進行檢測。

2 結(jié)果

2.1 2組患兒血清和腦脊液中ficolin-3、C3、C4水平比較 VE組患兒血清和腦脊液中ficolin-3、C3、C4水平均明顯高于對照組(P<0.05)。見表1。

表1 2組患兒血清和腦脊液中ficolin-3、C3、C4水平比較

2.2 VE輕癥組與重癥組患兒血清和腦脊液中ficolin-3、C3、C4水平比較 VE重癥組患兒血清和腦脊液中ficolin-3、C3、C4水平均顯著高于輕癥組患兒，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 VE輕癥組與重癥組患兒血清和腦脊液中ficolin-3、C3、C4水平比較

2.3 VE非急性期與急性期患兒血清和腦脊液中ficolin-3、C3、C4水平比較 VE急性期患兒血清和腦脊液中ficolin-3、C3、C4水平均明顯高于非急性期患兒，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 VE非急性期與急性期患兒血清和腦脊液中ficolin-3、C3、C4水平比較

2.4 VE患兒血清和腦脊液中ficolin-3、C3、C4水平的相關(guān)性 VE患兒血清和腦脊液中ficolin-3水平呈正相關(guān)(r=0.689，P<0.05)，血清和腦脊液中C3水平呈正相關(guān)(r=0.733，P<0.05)，血清和腦脊液中C4水平呈正相關(guān)(r=0.628，P<0.05)。見圖1。

圖1 VE患兒血清和腦脊液中ficolin-3、C3、C4水平的相關(guān)性

2.5 血清ficolin-3、C3、C4水平預(yù)測VE患兒急性發(fā)作的ROC曲線 血清ficolin-3、C3、C4水平聯(lián)合預(yù)測VE患兒急性發(fā)作的曲線下面積(AUC)高于三者單獨預(yù)測，其預(yù)測敏感度為93.50%，特異度為87.50%。見表4，圖2。

2.6 腦脊液ficolin-3、C3、C4水平預(yù)測VE患兒急性發(fā)作的ROC曲線 腦脊液ficolin-3、C3、C4水平聯(lián)合預(yù)測VE患兒急性發(fā)作的AUC高于三者單獨預(yù)測，其預(yù)測敏感度為85.00%，特異度為91.00%。見圖3，表5。

圖3 ROC曲線分析腦脊液ficolin-3、C3、C4水平對VE患兒急性發(fā)作的預(yù)測價值

表5 腦脊液ficolin-3、C3、C4水平對VE患兒急性發(fā)作的預(yù)測價值

3 討論

VE是由病毒直接侵犯腦實質(zhì)導(dǎo)致的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病，病毒可通過中樞神經(jīng)系統(tǒng)進入神經(jīng)網(wǎng)或血液循環(huán)，直接損傷神經(jīng)細胞和腦組織，且能間接激活顱內(nèi)免疫應(yīng)答反應(yīng)，并產(chǎn)生大量炎性因子，持續(xù)存在可造成腦損傷，影響兒童健康成長。研究發(fā)現(xiàn)VE患兒病情嚴重程度與預(yù)后有關(guān)，重癥和急性發(fā)作患兒常預(yù)后不良[6]，因此尋找能早期判斷VE病情程度的因子至關(guān)重要，以期為個體化治療VE提供有力依據(jù)。

纖維膠凝蛋白(ficolin)是一類廣泛存在于脊椎或無脊椎動物體內(nèi)的凝集素蛋白，可與病原體表面的糖類配體結(jié)合并經(jīng)由凝集素激活補體，參與多種疾病發(fā)生、發(fā)展[7]。人ficolin-3(即H-ficolin)屬于ficolin，主要存在于血清中[8]。ficolin-3可通過激活甘露糖結(jié)合凝集素相關(guān)的絲氨酸蛋白酶，裂解補體(C3、C4)產(chǎn)生C3b、C4b等調(diào)理素，從而發(fā)揮抗感染作用[9]。楊永康等[10]研究發(fā)現(xiàn)，血清ficolin-3水平變化與創(chuàng)傷性腦損傷患者發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，并可作為評估創(chuàng)傷性腦損傷患者預(yù)后的有效指標(biāo)。南子晴等[11]研究報道，肺炎支原體肺炎急性期患兒血漿ficolin-3水平明顯高于恢復(fù)期患兒，參與兒童肺炎支原體肺炎發(fā)病過程。而補體C3、C4可提高免疫細胞的吞噬作用，當(dāng)機體遭受病毒感染時，補體C3、C4將大量釋放，參與局部組織損傷[12]。郭飛波[13]報道，血清補體C3、C4水平變化與慢性乙肝患者肝纖維化程度有關(guān)，檢測二者水平對病情評估有所幫助。李愛國等[14]研究發(fā)現(xiàn)，甲型流感患者血清補體C3、C4水平遠高于健康對照組，二者水平升高與甲型流感發(fā)病有關(guān)。此外，鄒小衛(wèi)等[15]研究發(fā)現(xiàn)，腸道病毒感染患兒血清補體C3、C4水平較對照組明顯升高，通過檢測C3、C4水平有利于制定合理的治療方案。綜上發(fā)現(xiàn)，探討VE患兒血清和腦脊液中ficolin-3及補體C3、C4水平變化，具有重要意義。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，VE組患兒血清和腦脊液中ficolin-3、C3、C4水平均遠高于對照組患兒，與李愛國等[14，15]研究類似，提示血清和腦脊液中ficolin-3、C3、C4水平升高，可能參與VE發(fā)病。進一步研究發(fā)現(xiàn)，VE重癥組患兒血清和腦脊液中ficolin-3、C3、C4水平較輕癥組患兒明顯升高，且急性期患兒血清和腦脊液中ficolin-3、C3、C4水平較非急性期患兒明顯升高，與南子晴等[11]研究結(jié)果相似，提示血清和腦脊液中ficolin-3、C3、C4水平升高，可能與VE患兒病情嚴重程度有關(guān)。Pearson檢驗分析發(fā)現(xiàn)，VE患兒血清與腦脊液中ficolin-3、C3、C4水平均呈正相關(guān)，提示VE患兒血清ficolin-3、C3、C4水平可能在一定程度上影響腦脊液中ficolin-3、C3、C4水平。此外，ROC曲線分析顯示，血清ficolin-3、C3、C4水平預(yù)測VE患兒急性發(fā)作的AUC分別為0.681、0.773、0.866，腦脊液ficolin-3、C3、C4水平預(yù)測VE患兒急性發(fā)作的AUC分別為0.738、0.826、0.654，提示血清和腦脊液中ficolin-3、C3、C4水平均可作為預(yù)測VE患兒急性發(fā)作的有效指標(biāo)，但單獨使用敏感度和特異度均較低，臨床應(yīng)用價值不高。因此，本研究進一步使用血清ficolin-3、C3、C4水平聯(lián)合，及腦脊液ficolin-3、C3、C4水平聯(lián)合預(yù)測VE患兒急性發(fā)作情況，發(fā)現(xiàn)AUC分別為0.938、0.916，且血清三者聯(lián)合敏感度高達93.50%，腦脊液三者聯(lián)合特異度高達91.00%，提示血清和腦脊液中ficolin-3、C3、C4水平聯(lián)合應(yīng)用，可能更有利于早期預(yù)測VE患兒急性發(fā)作情況。

綜上所述，VE患兒血清和腦脊液中ficolin-3、C3、C4水平明顯升高，檢測三者水平有助于判斷VE患兒病情嚴重程度，且聯(lián)合檢測血清和腦脊液中ficolin-3、C3、C4水平對評估VE患兒急性發(fā)作具有一定作用，可為VE患兒臨床治療提供參考。本研究僅初步分析血清和腦脊液中ficolin-3、C3、C4水平變化與VE發(fā)生關(guān)系，尚需擴大樣本量進行驗證。