外周血胃饑餓素水平與幽門螺桿菌感染患者胃黏膜萎縮程度的關系研究

胡靜嫻 張紹仁 蔣 淼

萎縮性胃炎是一種以胃黏膜腺體萎縮和(或)腸上皮化生為主要特征的慢性疾病，其發(fā)生、發(fā)展是一個復雜的過程，可能是由于長期的幽門螺桿菌(Hp)感染或自身免疫性胃炎所致[1]。一項薈萃分析顯示中，Hp感染與萎縮性胃炎患病率比值為2.4～7.6，總估計數(shù)為5.0(95%CI：3.1～8.3)[2]。在沒有Hp感染的情況下，慢性萎縮性胃炎的發(fā)生率較低，提示慢性萎縮性胃炎的發(fā)生與Hp感染密切相關。慢性萎縮性胃炎被認為是胃癌發(fā)病機制中的首要環(huán)節(jié)，并且萎縮程度越嚴重，胃癌的發(fā)生率越高[3]。2005年國際萎縮研究小組提出了胃黏膜萎縮程度及范圍的分期標準，即慢性胃炎評價標準——OLGA分期系統(tǒng)[4-6]，這是基于胃炎新悉尼系統(tǒng)[7]對胃黏膜萎縮程度的半定量評分方法，采用胃炎分期代表胃黏膜萎縮范圍及程度, 將慢性胃炎的組織病理學與癌變風險聯(lián)系起來，為臨床醫(yī)生提供較為直觀的信息。然而OLGA分期系統(tǒng)需要在胃鏡下取活組織檢查，是一種創(chuàng)傷性檢查，不能被所有患者接受，因此尋找能替代活組織檢查的血清標志物顯得尤為重要。

胃饑餓素是生長激素促分泌受體的天然配體，是Kojima等[8-9]于1992年在小鼠胃黏膜里首次發(fā)現(xiàn)的，并且被認為是胃內(nèi)生長激素釋放的調(diào)節(jié)劑。有研究采用免疫組織化學法發(fā)現(xiàn)，分泌胃饑餓素的Gr細胞和胃底黏膜X/A細胞同時存在，分別位于胃體和胃底酸腺的較低位置。空腹情況下胃饑餓素被分泌出來進入體循環(huán)，而不是進入胃腸道。本研究旨在探究Hp感染患者外周血清胃饑餓素水平與OLGA不同分期之間的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年8月至2019年8月在復旦大學附屬金山醫(yī)院消化內(nèi)科門診就診，并經(jīng)14C尿素呼氣試驗檢測呈陽性的217例Hp感染患者作為研究對象。所有患者均留取外周血標本，行電子胃鏡檢查，并取胃黏膜組織(胃竇3塊，胃體2塊)行病理檢查，按OLGA分期系統(tǒng)將胃黏膜萎縮程度分為5期。排除標準：(1)年齡<18歲；(2)有糖尿病；(3)有甲狀腺疾病及神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤；(4)有糖皮質(zhì)激素、孕酮、睪酮服用史；(5)腎衰竭或肝衰竭；(6)曾接受化學治療；(7)酗酒史；(8)近4周內(nèi)曾使用質(zhì)子泵抑制劑(PPI)、H2受體拮抗劑、抑酸藥、抗生素治療；(9)體質(zhì)量指數(shù)(BMI)≥30 kg/m2；(10)妊娠期婦女；(11)既往有上消化道切除手術史；(12)胃鏡檢查未能完成；(13)胃鏡活組織取材不完全(按照胃炎新悉尼系統(tǒng)標準[7]分別于胃竇、胃角切跡、胃體取材，否則為取材不完全)。排除上述患者后，胃鏡下診斷為胃炎、胃潰瘍或胃癌(非神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤)等患者均納入統(tǒng)計。所有患者均簽署知情同意書，本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準(批準號：金醫(yī)倫理科研-2017-03-01)。

1.2 Hp測定

Hp檢測采用14C尿素呼氣試驗，于清晨空腹時檢測，采用UBT-20型Hp測試儀(深圳市中核海得威生物科技有限公司)。

1.3 胃黏膜萎縮程度分期的評定

采用免疫組織化學法對胃鏡所取胃黏膜組織進行檢查。首先按照胃炎新悉尼系統(tǒng)標準[7]，對每塊胃黏膜組織進行萎縮程度的4級評分：(1)0分 腺體未發(fā)生萎縮；(2)1分 腺體輕度萎縮，萎縮腺體占比≤30%；(3)2分 腺體中度萎縮，萎縮腺體占比>30%、≤60%；(4)3分 腺體重度萎縮，萎縮腺體占比>60%。然后，綜合胃竇和胃體黏膜的萎縮評分結果，按照OLGA分期系統(tǒng)將胃黏膜萎縮程度分為5期，分別為0期、Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期，將這5期患者設為5組。見表1。

表1 OLGA分期的評定

1.4 檢測外周血胃饑餓素水平

本研究所有患者在禁食12 h后，于上午8～10點采集血樣，以檢測外周血胃饑餓素水平。將收集于血清分離管的全血標本在室溫下以1 000r/min離心20 min，取上清液放入EP管中，置于-80 ℃冰箱待測。所有標本分批采用人胃泌素(Gas)酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)試劑盒(上海酶聯(lián)生物科技有限公司)檢測外周血胃饑餓素水平，具體操作方法：(1)將試劑盒在室溫中平衡20 min后，取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4 ℃；(2)設置標準品孔和樣本孔，每個樣本孔設2個副孔；(3)除空白孔外，標準品孔和樣本孔每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體，用封板膜封住反應孔，37 ℃水浴鍋或恒溫箱溫育60 min；(4)棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1 min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次；(5)每孔加入底物，37 ℃避光孵育15 min；(6)每孔加入終止液，15 min內(nèi)在450 nm波長處測定各孔的光密度(OD)值；(8)以所測標準品的OD值為橫坐標，標準品的濃度值為縱坐標，在坐標紙上或用相關軟件繪制標準曲線，得到直線回歸的方程，將樣品的OD值代入方程，計算出樣品的濃度。

1.5 統(tǒng)計學方法

2 結果

2.1 不同性別患者的外周血胃饑餓素比較

本研究共納入患者217例，其中男性102例，女性115例，平均外周血胃饑餓素水平分別為(97.37±15.79)fmol/mL、(98.05±13.60)fmol/mL，兩組間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，提示性別與外周血胃饑餓素無明顯相關性。

2.2 不同年齡患者的外周血胃饑餓素比較

本研究患者年齡分布在18～84歲，Pearson相關性分析顯示，年齡與外周血胃饑餓素無明顯相關性(P>0.05)。見圖1。

圖1 年齡與外周血胃饑餓素的相關性分析

2.3 不同OLGA分期組患者的外周血胃饑餓素比較

不同OLGA分期組患者的性別、年齡及外周血胃饑餓素水平詳見表2。卡法檢驗和方差分析結果顯示，不同OLGA分期組性別、年齡間差異均無統(tǒng)計學意義(P均>0.05)。t檢驗、組間比較結果顯示，5組患者的外周血胃饑餓素水平差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。兩兩比較結果顯示，不同OLGA分期組間外周血胃饑餓素水平差異均有統(tǒng)計學意義(P均<0.05)。 結果提示，胃黏膜萎縮越嚴重，OLGA分期越高，則外周血胃饑餓素水平越低，兩者呈負相關。

表2 不同OLGA分期組患者的外周血胃饑餓素比較

3 討論

萎縮性胃炎的病因包括Hp感染和自身免疫性胃炎[10]。中國自身免疫性胃炎的發(fā)病率較低，絕大多數(shù)萎縮性胃炎是由于Hp感染引起的。本研究旨在探討外周血中活性胃饑餓素與胃黏膜腺體萎縮程度之間的關系，考慮到萎縮性胃炎在消化內(nèi)科門診患者中的比例較低，而Hp感染患者中胃黏膜萎縮的比例相對較高，因此選擇14C呼氣試驗陽性的Hp感染患者，這樣可提高本研究的可行性。有薈萃分析顯示，Hp感染與萎縮性胃炎的患病率比值為2.4～7.6[2]，本研究的數(shù)據(jù)是2.78。

胃饑餓素的羥基有絲氨酸殘基，根據(jù)絲氨酸殘基是否被正辛酸酰基化，分為酰基化胃饑餓素和非酰基化胃饑餓素，這種酰基化作用對胃饑餓素與其受體(GHS-R1a)的結合，以及對生長激素的釋放都有至關重要的作用[7,11-13]，非酰基化胃饑餓素無太多的生理功能。本研究所檢測的是酰基化胃饑餓素，即有生理活性的胃饑餓素。

胃饑餓素主要在胃中產(chǎn)生，少量分泌于其他器官，如腸、胰腺、腎臟、下丘腦等[14-15]。有研究表明，全胃切除后循環(huán)胃饑餓激素水平立即下降到術前水平的10%～20%，證明了胃是胃饑餓素的主要來源[16-17]。胃萎縮就是指胃內(nèi)腺體的消失[18-19]，由此推測胃內(nèi)腺體萎縮越嚴重，分泌胃饑餓素的Gr細胞和胃底黏膜X/A細胞損傷越嚴重，外周血胃饑餓素水平也越低。

本研究結果表明，外周血胃饑餓素水平與OLAG分期呈負相關，分期越高，胃黏膜萎縮程度越嚴重，則外周血胃饑餓素水平越低。此結果提示，外周血胃饑餓素有望成為胃黏膜萎縮程度的血清學標志物，可通過胃饑餓素水平來判斷胃黏膜萎縮的程度。本研究存在樣本量較小等不足之處，今后還需進行多中心大樣本的調(diào)查，以進一步驗證本研究結論。