UN2000尿液全自動化流水線系統在尿液紅細胞檢測中的應用分析

紀鳳卿

廈門市中醫院檢驗科，福建廈門 361009

UN2000尿液全自動化流水線系統包括UC3500尿干化學分析儀和UF5000尿沉渣分析儀兩臺檢測儀器。經過優化后系統在檢測尿液紅細胞方面的鏡檢符合率、假陽性率、假陰性率等方面國外有見報道[1]，但在國內未見報道，故本研究將作簡單報道。本研究隨機選取廈門市中醫院2020年5—6月537份尿液標本同時采用UN2000尿液全自動化流水線系統、普通光學顯微鏡法、相差顯微鏡法進行尿液紅細胞分析，統計前二者鏡檢符合率、假陽性率、假陰性率，將流水線法與相差顯微鏡法這兩種檢測方法的尿液紅細胞形態學分類信息進行一致性分析，并分析原因。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機選取廈門市中醫院2020年5—6月門診及住院患者的尿液標本537例，其中男性標本208例，女性標本329例，年齡1～90歲，平均42歲。

1.2 儀器和試劑

日本sysmex公司UN2000尿液全自動化流水線系統，sysmex廠家提供配套尿液自動化流水線的原廠試劑及質控品；Olympus公司CX-21雙目顯微鏡；湘儀牌SC2542離心機低速離心；Nikon ECLIPSE E200相差顯微鏡。

1.3 檢測方法

在本實驗室室間質評合格基礎上，嚴格按照本實驗室儀器操作規程完成每日尿液室內質控檢測，確保儀器檢測的準確性。確保所收集的門診及住院患者尿液均為中段尿，混勻后倒入一次性尿管約10 ml。所有標本先用UN2000尿液全自動化流水線系統檢測，UN2000檢測完離心后，接著用CX-21顯微鏡鏡檢尿液紅細胞項目，需要檢測尿液紅細胞形態學信息的標本離心后，再用相差顯微鏡鏡檢。離心鏡檢時按照第4版《全國臨床檢驗操作規程》[2]操作，約10 ml尿液置于離心管，離心5 min，轉速1500 r/min，棄去上清液，剩余尿液0.2 ml混勻后取20 μl滴入干凈載玻片上，用蓋玻片覆蓋后鏡檢，進行尿液紅細胞鏡檢及尿液紅細胞形態學檢查。

1.4 結果判斷標準

UN2000尿液全自動化流水線系統中UC3500干化學陽性標準：隱血為（±）、（+）、（2+）、（3+）；UF5000尿液沉渣分析儀檢測陽性標準：女性紅細胞＞18個/μl、男性紅細胞＞15個/μl；顯微鏡鏡檢陽性標準：紅細胞＞3個/HPF。兩種檢測方法結果判斷紅細胞形態學信息以及血尿來源的標準[3]，UF5000尿液沉渣分析儀診斷標準：①非均一性紅細胞（Dysmorphic）：70%紅細胞前向散射光強度（RBC-P70FSC）＜70 ch；②均一性紅細胞（Isomorphic）：RBC-P70FSC≥100 ch且紅細胞前向散射光強度分布寬度（RBC-Fsc-DW）≤50，提示非腎小球性血尿可能；③混合性紅細胞（Mixed）：不滿足Dysmorphic和Isomorphic判定標準時，則判斷為混合性血尿。相差顯微鏡判斷血尿來源標準[4]：尿中紅細胞＞8000/ml，異形紅細胞率≥80%，且大部分（＞70%）為2種以上異形改變的紅細胞形態判斷為多形性即腎源性血尿；尿中紅細胞＞8000/ml，異形紅細胞率≤50%，且大部分（＞70%）為正常或者單一型紅細胞形態判斷為均一性即非腎源性血尿；尿中紅細胞＞8000/ml，尿液中含有均一性和非均一性紅細胞，異形紅細胞率＞50%且＜80%判斷為混合性血尿。尿紅細胞檢查當離心鏡檢陰性而UN2000尿液全自動化流水線系統檢測結果為陽性時為假陽性；當離心鏡檢陽性而UN2000尿液全自動化流水線系統結果為陰性時為假陰性。

1.5 統計學處理

應用SPSS 18.0統計學軟件進行數據處理，計數資料以%表示，兩種檢測方法所檢測尿液紅細胞結果比較采用四格表Fisher確切概率法，兩種檢測方法所檢測尿液紅細胞信息的分類結果一致性采用Kappa分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 UN2000尿液全自動化流水線系統和顯微鏡鏡檢尿液紅細胞結果

兩種方法檢測537例標本紅細胞陽性符合率為61.45%，陰性符合率為35.57%，總符合率為97.02%。顯微鏡檢測尿液紅細胞陽性332例，陽性率為61.82%；UN2000尿液全自動化流水線系統檢測紅細胞陽性344例，陽性率為64.06%。假陽性率為2.61%，假陰性率為0.37%。兩種紅細胞檢測方法比較，差異有統計學意義（P=0.000＜0.05）。見表1。

表1 UN2000尿液全自動化流水線系統和顯微鏡鏡檢紅細胞結果

2.2 相差顯微鏡法和UN2000尿液全自動化流水線系統檢測尿液紅細胞形態信息結果

兩種方法在尿液紅細胞形態學的混合性與均一性的信息方面符合率較好，分別為91.25%和95.10%，紅細胞多形性、未提示信息方面符合率較差，為78.57%和86.57%。相差顯微鏡法和UN2000尿液全自動化流水線系統檢測尿液紅細胞形態學提示多形性、均一性、混合性、未提示紅細胞信息分類方面一致性采用Kappa分析，Cohen'skappa系數為0.835，P＜0.001，具有強一致性。見表2。

表2 UN2000尿液全自動化流水線系統與相差顯微鏡檢法一致性分析

3 討論

尿液的有形成分較為復雜，某些有形成分如紅細胞與細菌、酵母菌、結晶等顆粒之間在流式細胞儀器的前側向激光散射強度、高低靈敏度熒光強度等指標大小相似，儀器散點圖上分布位置接近導致儀器形態識別錯誤。為此日本希斯美康公司針對實驗室用戶應用中儀器出現的檢測不足之處對其進一步升級優化，從而誕生了最新一代UF5000尿液沉渣分析儀。UF5000尿液沉渣分析儀通過檢測試劑、激光升級優化，多了去偏振側向散射光，從而使尿液各有形成分分辨力增強，粒子識別力增加；細菌等小顆粒物質識別更清晰，各種抗干擾能力增強。王燕鳳等[5]也對UF5000性能驗證表明其是一臺性能優良的全自動尿沉渣定量分析儀。故其與UC3500尿液干化學儀組成的新一代UN2000尿液全自動化流水線系統綜合檢測性能也得到提升。該UN流水線產品特點為區分細菌革蘭氏染色；紅細胞形態檢測抗干擾能力增強，運用流式細胞分析技術+核酸熒光染色技術，計算方法革新；給予臨床可報告項目增多。對于該流水線系統的區分細菌革蘭染色國內外學者均已有報道[6-8]，國內未見報道該流水線系統檢測紅細胞方面應用研究。本研究重點探討UN2000尿液全自動化流水線系統在尿液紅細胞檢測的臨床應用價值。

本研究使用UN2000尿液全自動化流水線系統與顯微鏡檢查對尿液中的紅細胞進行檢測，結果顯示，兩種方法檢測尿液紅細胞標本537例，陽性符合率為61.45%，陰性符合率為35.57%，總符合率為97.02%。可見運用該流水線系統紅細胞檢測方面與顯微鏡鏡檢法的總符合率較高，可以很大程度的降低鏡檢率。本研究結果顯示，顯微鏡檢測尿液紅細胞陽性332例，陽性率為61.82%；UN2000尿液全自動化流水線系統檢測紅細胞陽性344例，陽性率為64.06%。假陽性率為2.61%，假陰性率為0.37%。兩種紅細胞檢測方法比較，差異有統計學意義（P=0.000）。可見該系統可較大程度提高尿液紅細胞檢測的準確率，降低鏡檢率。由于干擾UN2000尿液全自動化流水線系統檢測紅細胞因素仍然存在，導致其檢測尿液紅細胞假陽性率、假陰性率仍然有，可影響臨床診治。本研究通過分析顯示，造成UN2000尿液全自動化流水線系統檢測尿紅細胞假陽性的可能原因為菌尿、氧化劑影響（UC3500干化學分析儀假陽性原因），亦或為類酵母菌、草酸鈣結晶、細菌等影響（UC5000尿液沉渣分析儀假陽性原因）。造成UN2000尿液全自動化流水線系統檢測尿中紅細胞假陰性可能原因為維生素C（＞100 mg/L）或者試紙條失效（UC3500干化學分析儀假陰性原因）；亦或為由變形的紅細胞引起，如影紅細胞、棘形紅細胞、腫脹紅細胞等（UC5000尿液沉渣分析儀假陰性原因），還可能是尿液紅細胞破壞，此原因可從UC3500干化學分析儀檢測中的比重與pH值兩項檢測指標和UF5000尿液沉渣分析儀的滲透壓這個檢測指標進一步分析，因細胞在堿性、低滲透壓環境，細胞易腫脹、破裂[9]。尿液有形成分復雜易受儀器、試劑、溫度，采集時間干擾[10]，顯微鏡鏡檢法仍然是尿液紅細胞形態學檢測的“金標準”。可見運用該流水線系統和顯微鏡檢查聯合應用可進一步減少檢測的結果假陽性率與假陰性率。

應用UN2000尿液全自動化流水線系統可提供尿液中紅細胞形態學分類信息，可作為鑒別腎小球性與非腎小球性疾病方法之一。腎小球性血尿是腎小球發生了病理性改變，當其尿液紅細胞流經時，會受到擠壓扭曲變形以及腎小管內環境pH值和滲透壓、介質張力、各種代謝物作用使紅細胞形態發生改變；而非腎小球性疾病患者（如結石、普通泌尿道感染、腫瘤等），腎小球未發生病理性改變，則表現為均一性血尿[11]。尿紅細胞形態學分類信息可為臨床診斷是腎性血尿或非腎性血尿提供可靠依據[12]，是臨床醫生判斷血尿來源最簡易快速的參考方法之一。因其為無創快速檢測方法，一般情況下1～2 h可出報告，故一直深受腎病醫生重視，但相差顯微鏡經常受諸多因素的干擾，如尿滲透壓、尿pH值、比重、離心速度等，其對臨床檢驗技師的技術要求較高，經驗不足則直接影響檢測結果。UN2000尿液全自動化流水線系統在經過優化升級后，將干擾紅細胞檢測的無定型鹽類結晶經螯合作用溶解，使得紅細胞形態學識別方面也得到很大優化，可以比較準確給臨床醫生提供一定泌尿系統臨床診斷指向性信息，對標本要求只需新鮮第二次中段晨尿[13]，不需離心，可以更快速出具尿液紅細胞形態信息。本研究結果顯示，相差顯微鏡與UN2000尿液全自動化流水線系統在紅細胞形態多形性、混合性、均一性、未提示信息檢測方面符合率分別是 78.57%、91.25%、95.10%、86.57%，總體符合率較高，相差顯微鏡法和UN2000尿液全自動化流水線系統檢測尿液紅細胞形態學提示多形性、均一性、混合性、未提示紅細胞信息分類方面一致性采用Kappa分析，Cohen'skappa系數為0.835，P＜0.001，具有強一致性。可見該流水線系統在尿液紅細胞形態分類信息方面應用價值高。同時本研究顯示134例標本中流水線紅細胞提示信息為“未提示”，此部分標本一部分為紅細胞檢測值在正常范圍里，故流水線顯示“未提示”即相當于相差顯微鏡檢查為正常結果。另一部分為流水線儀器檢測局限性，如前述異形的紅細胞引起，例如影紅細胞、腫脹紅細胞等確實無法識別分類，這部分檢測結果只能靠人工相差顯微鏡鏡檢識別分類。對于這部分標本判讀也應結合流水線系統提供的滲透壓值及尿液pH值進一步鑒別判斷。因為細胞在低滲透壓、堿性環境中容易溶解、破裂進而形成上述異形性紅細胞導致儀器無法正常判別。人工相差顯微鏡鏡檢法檢測尿紅細胞的形態學，可為臨床提供相對可靠的區分腎小球源性、非腎小球源性血尿實驗依據[14]。本研究出現18例流水線分類為“未提示”紅細胞形態信息的標本經過人工相差顯微鏡鏡檢均得到有效區分。故UN2000尿液全自動化流水線系統仍需與人工相差顯微鏡鏡檢法結合，在血尿來源的篩查與鑒別上相輔相成，方能為臨床提供快速準確的檢驗結果。運用UN2000尿液全自動化流水線系統與人工相差顯微鏡鏡檢相結合對尿液紅細胞形態及其分型進行鑒別，有助于區分腎性和非腎性血尿患者，該鑒別方法值得推廣應用[15]。

綜上所述，運用UN2000尿液全自動化流水線系統可提高尿液紅細胞檢測的準確率，可以很大程度的降低鏡檢率，適于腎臟疾病的篩查。在尿液紅細胞形態及其分型方面，UN2000尿液全自動化流水線系統應用價值高，與相差顯微鏡鏡檢相結合，二者在血尿來源的篩查與鑒別上具有互補作用，值得推廣應用。對于UN2000尿液全自動化流水線系統，有必要進一步擴大樣本量對其所能檢測的項目進行較為詳細的研究論證。