ACE基因多態性和高血壓合并腦出血的關系探討

胡東偉 林 芬

1.廣東省潮州市人民醫院神經外科，廣東潮州 521000；2.廣東省潮州市中心醫院，廣東潮州 521000

血管緊張素轉換酶（angiotensin converting enzyme，ACE）是一種廣泛分布于循環系統的限速酶，屬于腎素-血管緊張素系統[1]。ACE 可通過對血管緊張素Ⅰ的促進作用使其轉化為血管緊張素Ⅱ，從而由無活性向高度血管吸收活性轉變，最終實現促進醛固酮分泌的目的[2-3]。國內文獻[4-7]報道多圍繞ACE 基因（I/D）多態性與高血壓、左心室肥厚、心肌梗死、擴張型心肌病等心血管疾病的發生密切相關，在腦血管方面可參考研究并不多見。腦出血是一種由遺傳因素、環境因素等多因素相互作用與影響而引發的復雜疾病，黃燕等[8]研究指出，ACE 基因的DD 基因型和D 等位基因可提高腦血管病的發病風險，且為自發性腦出血的危險因素。但目前對于非自發性腦出血患者ACE 基因多態性的研究極少報道。基于此，本研究旨在ACE 基因多態性和高血壓合并腦出血的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019 年7 月至2020 年7 月廣東省潮州市人民醫院（我院）收治的35 例高血壓合并腦出血患者及35 例健康體檢者作為研究對象，全部為漢族。高血壓合并腦出血組的納入標準：既往均有高血壓病史且本次體檢血壓≥140/90 mmHg，經顱腦CT 和神經系統檢查均確診為腦實質出血。兩組排除標準：嚴重心、腎、肝功能不全患者及存在認知障礙或精神病史患者。全部受檢者均自愿參與并本人或家屬簽署知情同意。本研究經我院倫理委員會批準進行。

1.2 方法

1.2.1 DNA 提取 于清晨兩組受檢者空腹狀態下，采集患者EDTA-K2 抗凝血5 ml，選用深圳亞能生物技術有限公司生產的DNA 提取試劑盒，按試劑盒的操作步驟提取基因組DNA，所提DNA 于-20℃保存。

1.2.2 PCR 擴增體系 包括[上游（5’-CTGGAG ACCACTCC CATCCTTTCT-3’）、下游（5’-GATGTGG CCATCACATTCGTCAGAT-3’）各1 μl，均由杭州博日公司提供的Life Express 96 孔PCR 儀基因擴增儀合成引物]、北京艾德萊生物科技有限公司提供的TaqDNA 聚合酶、dNTP 混合物2 μl、Buffer 2.5 μl×模板DNA1 μl。首先5 min 95 ℃預變性后1 min 95 ℃按照變性、隨后退火至65 ℃保持1 min、最后升至72 ℃保延長90 s，根據上述順序進行35 個周期的循環后，終末延伸72 ℃5 min。

1.3 觀察指標

1.3.1 一般資料 采用問卷調查方式結合病歷資料記錄，統計兩組患者年齡、性別、吸煙史、飲酒史、體重指數（body mass index，BMI）并比較。

1.3.2 判讀基因型 取上述PCR 擴增產物在125 v電壓下行2%瓊脂糖電泳40 min（DYY-6C 型雙穩定時電泳儀，北京六一生物科技有限公司），研究者于紫外燈下攝片并觀察，若存在且僅存在1 條490bp 的電泳帶標記為Ⅱ基因型，若存在且僅存在1 條190bp 的電泳帶則標記為DD 基因型，若上述電泳帶均存在且同時出現標記為ID基因型，如圖1。統計各基因型出現頻率。

1.4 統計學方法

應用SPSS 23.0 軟件處理全部數據，用（）表示符合正態分布的計量平均數資料并行獨立樣本t檢驗，計數資料用頻率表示并行χ2檢驗，采用平衡定律檢驗基因型分布，單因素P＜0.05 的項目行多因素Logistics回歸分析，P＜0.05 為差異有統計學意義。

圖1 ACE 基因I/D 多態性結果

2 結果

2.1 兩組各項資料單因素分析

高血壓合并腦出血組患者與健康體檢患者性別構成、飲酒史差異無統計學意義（P＞0.05）；年齡＞65 歲、吸煙史、BMI 組間差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組一般資料比較

2.2 兩組ACE基因頻率比較

兩組ID、Ⅱ基因型頻率比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；但高血壓合并腦出血患組DD 基因型頻率和D 等位基因頻率明顯高于健康體檢者，差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

2.3 多因素Logistics回歸分析

將單因素分析中差異顯著的項目和等位基因頻率分別賦值進行二分類多因素Logistics回歸分析，結果顯示：攜帶ACE 基因D 等位基因BMI、年齡＞65 歲、吸煙史是高血壓合并腦出血的獨立危險因素（P＜0.05），見表3 ～4。

表2 各組ACE基因多態頻率比較[n（%）]

表3 相關變量賦值表

表4 多因素Logistics回歸分析

3 討論

腦血管病是一種多因素、多基因疾病，其遺傳因素研究的重視程度正隨分子生物學發展不斷提高。蒙蘭青等[9]發現，雖然D 等位基因和高血壓的發生率無顯著相關性，但在高血壓合并缺血性腦血管病患者中D 等位基因頻率顯著增高，故其認為D等位基因和高血壓患者并發腦血管病息息相關，并可能是腦血管病發生的獨立危險因素。歐陽嶸等[10]檢測62 例健康對照者、78 例原發性高血壓患者和114 例高血壓性腦出血患者的ACE 基因I/D 多態性，結果顯示最后一組D 等位基因和DD 基因型頻率相較于另外更高，提出ACE 基因DD 基因型可能為中國漢族人群腦血管疾病的遺傳標志，且攜帶D 基因型的高血壓患者腦出血易感性更高。但也存在持有否定意見的研究，任慶平等[11]以高原地區藏族人民為對象探討ACE 基因多態性與腦出血間關系，并得出二者之間并無相關性的結論。

本研究以35 例健康體檢者為對照，對35 例高血壓合并腦出血患者進行ACE 基因I/D 多態性檢測，從以往文獻[12]中可總結，高血壓與ACE 基因I/D 多態性間相關性并不確定，但諸多研究[13-14]提出，有腦卒中家族史的高血壓患者與ACE 基因I/D多態性呈顯著相關，提示此方面值得進一步研究。值得注意的是，本研究高血壓合并腦出血組患者雖和健康對照組比較差異不明顯，但結果可見前者D等位基因和DD 基因型頻率明顯較高（P＜0.05）。但可能受本研究樣本量較少影響，統計學檢驗具備意義但并不非常顯著，故未來可增加樣本數量繼續深入研究。

Das 等[15]研究發現ACE 基因I/D 多態性與腦出血、腦卒中等腦血管疾病易感性相關。但目前關于腦出血患者與ACE 基因多態性相關研究極為少見且結論并不一致[16]，且關于高血壓合并腦出血患者的相關研究更是鮮有報道。本研究結果顯示，ACE 基因多態性與高血壓合并腦出血的發生密切相關，且攜帶D 等位基因是其危險因素可顯著高血壓合并腦出血的發病風險。此外，多因素Logistics回歸分析結果還發現BMI、年齡＞65 歲、吸煙史與高血壓合并腦出血的發病存在相關性，提示臨床應積極評估高齡（＞65 歲）、有吸煙史及BMI ＞25 kg/m2的高血壓患者發生腦出血的可能性，并及時給予降壓等處理以選擇合適治療方案。

綜上所述，ACE 基因多態性攜帶的D 等位基因與高血壓合并腦出血間存在明顯相關性，可能是高血壓合并腦出血的危險因素，此外BMI、年齡＞65 歲、吸煙史均與高血壓合并腦出血密切相關，臨床應給予高度重視。