蜜炙甘草炮制工藝改進研究

張遠華，羅瑜

(韶關市中醫院，廣東 韶關 512026)

0 引言

甘草于中醫用藥應用甚廣，用藥可達益氣補中、解表散寒、緩急止痛、解毒瀉火之效果。但臨床多將其炮制，避免生用，以弱化其偏涼性質[1]。但從傳統炮制方式上看，炮制成品較易炒至氣味焦、生熟不均的現象，且炒制過程中，易因粘鍋產生焦屑、焦斑，同時不易控制水分，成色不佳，成品含水量過高，難保管，易長霉，影響中藥材質量。故臨床急需探尋一條具備穩定性、可靠性的炮制方法，提升炮制成功率。基于此，本文將對不同條件下蜜炙甘草炮制樣品進行研究，對不同樣本中甘草酸、甘草苷含量使用高效液相測定法(HPLC)測定，并引入回歸方程的形式，優選出蜜炙甘草炮制最佳工藝，旨在提升蜜炙甘草炮制質量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

本研究中所用儀器詳細為①LC-2010HT型高效液相色譜儀(日本島津有限公司)；②L-3520二極管陣列檢測器(深圳普源精電科技有限公司)；③Mettler Toledo MS204TS電子分析天平(美國梅特勒-托利多集團)；④JM-05D-40超聲波清洗器(深圳市潔盟清洗設備有限公司)；⑤Waeters empower2色譜工作站；⑥九陽C30-LC630型電磁爐；⑦DGF-4BS電熱恒溫干燥箱(力辰科技有限公司)。

1.2 處方

圓厚片生甘草：(馮了性(佛山)藥材飲片有限公司)；生蜜或未制過的蜂蜜(上海冠生園蜂制品有限公司)；溫開水；色譜乙腈(美國Fisher有限公司)；磷酸(安縣川磷試劑有限公司)。

1.3 炮制工藝

①甘草烘烤：取甘草片于電熱恒溫干燥箱中，80攝氏度，干燥完成后篩選干凈備用；②煉蜜：取未煉制蜂蜜加熱容器中，容器加水，待其達到100攝氏度后，將浮沫濾除；③煉制嫩蜜：煉制出現魚眼泡時即可。完成后晾涼，過60目篩，備用；④拌蜜(潤甘草)：取煉蜜加溫開水后拌勻淋入凈甘草片中，隨后潤悶。拌勻標準為：甘草片完全被嫩蜜滲透；⑤炒制：取甘草片適量于炒鍋中翻炒，炒成標準為甘草片表面呈黃色或深黃色，且不粘手，目視與清水拌潤的甘草片狀態相同即可；⑥烘焙：取已蜜炙的甘草片于電熱恒溫干燥箱中；干燥完成后篩選干凈待分裝；⑦分裝：每袋5kg，完成制備。

2 含量測定

2.1 影響炮制樣品質量均勻因素水平設計表

查閱有關文獻表明，影響蜜炙甘草炮制樣品質量的因素包含煉蜜與溫開水的比例(X1)、甘草片的潤悶時間(X2)、炒制時間(X3)、炒制溫度(X4)有一定影響。現將上4因素綜合，設計因素水平表，見表1。

表1 影響炮制樣品質量均勻因素水平設計表

2.2 炙甘草中水溶性成分測定色譜條件

在含量測定的過程中，其色譜條件如下：

色譜柱：Alltima C18(4.6mm×250mm，5.00μm)；

流動相：乙腈-0.1%磷酸水；

梯度洗脫條件：0min-30%乙腈、70%(0.1%磷酸水)

20min-55%乙腈、45%(0.1%磷酸水)

柱溫度：30攝氏度

流速：1.00mL/min；

波長：254nm

2.3 炮制樣品水溶物溶出含量檢測

使用電子天平將7組炮制樣品各取4g，設置7組實驗，將檢測樣品置于三角燒杯內，加入40mL蒸餾水超聲溶解60min即可。將溶解所得上清液置于對應燒杯內；重復上述檢驗步驟后抽濾，分別檢測抽濾所得上清液逐一蒸干、稱重，計算炮制樣品水溶物溶出含量(%)。

2.4 數據處理

收集檢驗所得甘草酸含量、水溶出物溶出含量。數據及其賦值標準：以《中國藥典》2000年版第1部為依據，甘草酸含量每4%計20分，水溶物溶出含量每50%計20分。借助PEMS3.1軟件獲取多元一次回歸方程，根據系數值及P值確定工藝優化項目。

2.5 工藝穩定性驗證

取適量甘草飲片，按最優工藝炮制。處理方式同2.3、2.4；獲取水溶物溶出含量及甘草中各化學物質含量數據，并按2.4中數據及其賦值標準評分，獲取實測值。對比預期試驗綜合指標與實測值差異，進行炮制工藝穩定性驗證。

3 結果

3.1 色譜圖

圖1 灸甘草標準品色譜圖

圖2 驗證品標準品色譜圖

3.2 炮制樣品均勻設計試驗結果

表2 蜜炙甘草樣品均勻設計試驗結果

3.3 數據分析

借助PEMS3.1軟件獲取多元一次回歸方程Y=5.20x1-0.66x3-0.19x4+69.38，其中，R=0.95，P=0.049，其中P＜0.05，回歸方程有意義，數據差異顯著。因此，可將煉蜜與溫開水的比例、甘草片的潤悶時間、炒制時間、炒制溫度認為是影響綜合評分的相關指標。在水平1-0.05=0.95區間內是可信的。

將數據帶入計算可知，當煉蜜與溫開水的比例為1：7時，炒制溫度為240攝氏度時，炒制時間為21分鐘時，回歸方程解最大。在預實驗過程中發現甘草無法耐受240攝氏度高溫，顏色、性狀、氣味均發生改變。考慮此因素后，經直觀分析再次進行數據篩選表明，煉蜜與溫開水的比例為1：7、炒制溫度70攝氏度、炒制時間13分鐘甘草性狀、顏色性狀、氣味水平較佳。將數據帶入回歸方程計算可得Y=48.11，按最優解參數獲取3份炮制樣品，將數據帶入回歸方程實測平均值為48.29。其中內部參數n=3，RSD%=3.24%。

4 討論

甘草性甘，因此可與諸藥相調和，中醫學界將其稱之為“國老”。但在實際應用中，對甘草加以炒制，制作煎劑、開水浸泡或口服均可發揮不同藥效。其中炒制中的灸者，主要指蜜炙入藥，臨床上有多種炮制方式，不同的炮制方式，主治病癥也有所差別。這一點在中國古代醫學典籍《本經疏經》所著：甘草之用炙、用生卻有不同。大率除邪氣、解毒生用皆可；止渴、補虛、緩中炙用皆可[2]。

蜜炙甘草，生甘草與蜂蜜比值為4：1，炒制金黃可得成品。若單獨將甘草予以炒制，則更偏重于清熱解毒之功效；若將甘草予以蜜炙處理，則更偏重止痛緩急、和胃以其之功效。現代藥理學分析表明，甘草具備多種藥物活性成分，諸如甘草多糖、甘草次酸、甘草甜素等，可起到抗變態反應、抗炎的作用。另外，上述成分也可調節機體免疫功能，具備較強的止痛作用即抗腫瘤作用。中醫學研究表明，國內相關人員將曾進行過相關研究，相較于生甘草，炙甘草在止痛作用及抗驚厥方面優于生甘草；動物藥理學實驗也表明，其具備抗大鼠心理失常的作用，機理是甘草次酸可對抗氯化鋇[3]。而生甘草經蜜炙后可降低內部甘草酸含量，于患者用藥可將低假醛固酮癥發生率；同時能夠可提升甘草甙含量，其藥理作用為健脾補氣。

傳統炮制方式下，多為蜂蜜水浸潤后即進行蜜炙甘草炮制，但在炒炙后所獲得的成品，雖在療效上可達到使用要求，但受限于炒制時溫度無法調控，故在飲片炒制后多會出現甘草燒焦的現象，表面顏色表現為淡黃褐色或黑褐色，從而影響療效。因此臨床繼續探尋一條優化炮制方式，從而驗證不同因素對炮制質量的影響。近年來，均勻設計實驗法在藥物制備中，特別是在復方或單味中藥提取工藝中有著較為廣泛的應用，因其能夠在多因素條件下，有效減少試驗次數。但針對炮制工藝方面的均勻設計實驗法開展仍較少，為此筆者從影響蜜炙甘草炮制樣品質量的因素出發，通過引入均勻設計試驗、綜合評分來進一步篩選優化炮制方案。

通過將綜合評分帶入統計學軟件中可得回歸方程，分析各項自變量系數值，其中X2系數為0，證明甘草片的潤悶時間對綜合評分無影響，通過分析自變量前系數大小，可得出影響因素大小排列為X1＞X3＞X4，當X2為0時，對結果無影響。因此本研究最終可得結論影響因素排序為煉蜜與溫開水比例＞炒制時間＞炒制溫度。

若以工藝流程優化角度分析，改進后的蜜炙甘草炮制優點有如下四點：首先，顏色性狀佳：方式中的煉蜜、拌蜜、蒸煮方式可有助蜜汁充分滲入，可進一步優化甘草成色，同時由于炒制溫度的合理調控，能進一步控制炒制質量，提升甘草炒制光澤度；其次，可改善炒制氣味；在本方式炮制后，能最大限度提升蜂蜜與甘草轉化水平，故可提升炒制氣味水平；再次，可增進中藥效果。在最優條件下，可最大化提升蜜炙質量，將生甘草偏涼性質予以充分轉化，轉化至甘溫，進一步強化藥物療效；最后，可提升藥物保管水平：此方式下炒制出的蜜炙甘草質量較佳，故有利于藥材的保存；在含水量上，此炒制方法能保持最佳的干燥水平，分裝時較為方便；蜂蜜的充分滲透可降低表面黏度，提升保管質量。

綜上，改進后的蜜炙甘草炮制方法，相較于傳統炮制方法在儲存方式、炒制溫度、儲存時間均高度可控，且實用性強，對保證炙甘草的質量有一定的意義，可推廣。