口腔鱗狀細(xì)胞癌患者唾液中癌胚抗原、過氧化氫酶及細(xì)胞角質(zhì)蛋白19片段抗原21-1的表達(dá)水平及臨床意義

李永華，郭靜華，王想

駐馬店市中心醫(yī)院口腔科，河南 駐馬店 463000

口腔癌是位于頭頸部的惡性腫瘤，主要組織類型是鱗狀細(xì)胞癌，具有復(fù)發(fā)率高、預(yù)后差、生存率低的特點(diǎn)[1]。在口腔鱗狀細(xì)胞癌早期，腫瘤細(xì)胞浸潤周圍組織并發(fā)生擴(kuò)散，進(jìn)入晚期使得臨床治療困難，因此早期診斷和治療尤為重要[2]。腫瘤標(biāo)志物檢測在口腔惡性腫瘤的輔助診斷中，尤其是在深部腫瘤和腫瘤復(fù)發(fā)的診斷中具有潛在的臨床應(yīng)用價值[3]。研究發(fā)現(xiàn)，唾液中含有多種腫瘤標(biāo)志物，與其他體液相比，唾液更新速度更快，并且可以在較少干擾因素的情況下及時反映局部環(huán)境的變化，具有取樣方便、操作簡單、可重復(fù)采樣的特點(diǎn)[4]。癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）、過氧化氫酶（catalase，CAT）及細(xì)胞角質(zhì)蛋白19片段抗原21-1（cyto-keratin 19 fragment antigen 21-1，CYFRA21-1）是口腔鱗狀細(xì)胞癌早期檢測的標(biāo)志物[5]。本研究探討了口腔鱗狀細(xì)胞癌患者唾液中CEA、CAT、CYFRA21-1表達(dá)水平及臨床意義，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年1月至2019年12月于駐馬店市中心醫(yī)院就診的口腔鱗狀細(xì)胞癌患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理學(xué)檢查確診為口腔鱗狀細(xì)胞癌；②未接受過放化療治療；③年齡＞18歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他系統(tǒng)惡性腫瘤；②合并心、肝、腎等重要臟器疾病、免疫系統(tǒng)疾病、血液系統(tǒng)疾病等。依據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，本研究共納入84例口腔鱗狀細(xì)胞癌患者作為口腔鱗狀細(xì)胞癌組。同時選取口腔良性腫瘤患者50例（牙齦瘤20例，血管瘤30例）和體檢健康者50例，分別作為良性腫瘤組和健康對照組。3組研究對象的性別、年齡、體重指數(shù)比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）（表1），具有可比性。

表1 3組研究對象的臨床特征

1.2 檢測方法

收集全部患者清晨空腹?fàn)顟B(tài)下4 ml無刺激性混合唾液，取樣前不進(jìn)行局部或全身藥物治療和放療，收集方法是患者每30 s將唾液吐到收集器中，持續(xù)5～10 min，然后立即在4℃條件下3000 r/min離心20 min，提取2 ml上清液，并保存在-80℃低溫冰箱中。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzymelinked immunoadsordent assay，ELISA）檢測 CEA、CAT和CYFRA21-1水平。檢測試劑盒購自天津新傳生物技術(shù)有限公司，所有操作步驟均嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。密封袋中取出實(shí)驗(yàn)所需板條，空白孔中加入樣品或者稀釋液，每孔100 μl，檢測孔中加入標(biāo)本，每孔100 μl，36℃條件下孵育60～90 min，磷酸鹽緩沖液清洗5次，空白對照孔中加入生物素抗體稀釋液 100 μl，檢測孔中加入生物素抗體檢測液 100 μl，36℃條件下孵育30～60 min，空白對照孔中加入酶結(jié)合稀釋液100 μl，檢測孔中加入酶結(jié)合檢測液100 μl，磷酸鹽緩沖液清洗5次，加入四甲基聯(lián)苯胺（tetramethylbenzidine，TMB）顯色液，避光36℃孵育15 min，加入終止液100 μl，3 min內(nèi)檢測450 nm處的光密度（optical density，OD）值，BioTek酶標(biāo)儀購自美國伯騰儀器有限公司。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 22.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間比較采用方差分析，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；計數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；采用受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線分析CEA、CAT及CYFRA21-1對口腔鱗狀細(xì)胞癌的診斷價值。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同組別研究對象唾液中CEA、CAT及CYFRA21-1水平的比較

口腔鱗狀細(xì)胞癌組、良性腫瘤組、健康對照組唾液中CEA、CAT及CYFRA21-1水平比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。口腔鱗狀細(xì)胞癌組、良性腫瘤組患者唾液中CEA、CAT及CYFRA21-1水平均高于健康對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；口腔鱗狀細(xì)胞癌組患者唾液中CEA、CAT及CYFRA21-1水平均高于良性腫瘤組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。（表2）

表2 不同組別研-究對象唾液中CEA、CAT及CYFRA21-1水平的比較（±s）

表2 不同組別研-究對象唾液中CEA、CAT及CYFRA21-1水平的比較（±s）

注：a與健康對照組比較，P＜0.05；b與良性腫瘤組比較，P＜0.05

組別口腔鱗狀細(xì)胞癌組（n=84）良性腫瘤組（n=50）健康對照組（n=50）F值P值CEA（ng/ml）45.50±14.43a b 28.39±11.02a 12.80±5.22 20.201 0.000 CAT（U/ml）50.40±11.02a b 42.50±10.04a 30.21±9.88 16.603 0.000 CYFRA21-1（μg/L）60.34±19.29a b 33.31±12.04a 14.50±4.43 17.113 0.000

2.2 不同臨床特征口腔鱗狀細(xì)胞癌患者唾液中CEA、CAT及CYFRA21-1水平的比較

不同性別、年齡、體重指數(shù)、分化程度、腫瘤部位的口腔鱗狀細(xì)胞癌患者唾液中CEA、CAT及CYFRA21-1水平比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；不同臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況的口腔鱗狀細(xì)胞癌患者唾液中CAT水平比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的口腔鱗狀細(xì)胞癌患者唾液中CEA水平分別明顯高于臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t=2.894、3.971，P＜0.01）；臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的口腔鱗狀細(xì)胞癌患者唾液中CYFRA21-1水平分別明顯高于臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t=5.443、5.024，P＜0.01）。（表3）

表3 不同臨床特征口腔鱗狀細(xì)胞癌患者唾液中CEA、CAT及CYFRA21-1的水平（n=84）

2.3 唾液中CEA、CAT及CYFRA21-1水平對口腔鱗狀細(xì)胞癌的診斷價值

唾液中CEA、CAT及CYFRA21-1水平診斷口腔鱗狀細(xì)胞癌的ROC曲線下面積分別為0.790、0.750和0.896，P＜0.05，截斷值分別為38.50 ng/ml、46.50 U/ml和 50.20 μg/L，靈敏度分別為 72.20%、64.50%和80.00%，特異度分別為65.50%、61.00%和78.50%。（圖1）

圖1 唾液中CEA、CAT及CYFRA21-1水平診斷口腔鱗狀細(xì)胞癌的ROC曲線

3 討論

口腔癌是指發(fā)生于口腔黏膜的惡性腫瘤，侵襲性和擴(kuò)散性強(qiáng)[6]。準(zhǔn)確地進(jìn)行口腔癌早期診斷是提高患者生存率和生活質(zhì)量的關(guān)鍵。探索新的或更多的標(biāo)志物對口腔癌的特異性診斷或預(yù)后評估具有重要意義。盡管病理學(xué)檢查是診斷口腔癌的公認(rèn)金標(biāo)準(zhǔn)，但它是一種有創(chuàng)操作，患者在早期篩查中的依從性不高[7-8]。唾液樣品獲取簡單且無創(chuàng)，可以重復(fù)采集。當(dāng)口腔黏膜發(fā)生癌變時，腫瘤部位的組織細(xì)胞及其代謝物進(jìn)入唾液，導(dǎo)致唾液中某些指標(biāo)發(fā)生變化，通過某些方法檢測腫瘤患者唾液中相關(guān)腫瘤標(biāo)志物的變化可為口腔鱗狀細(xì)胞癌的診斷提供依據(jù)[9]。

CEA是一種位于細(xì)胞表面的糖蛋白，在胎兒早期由胃腸道、肝臟和胰腺合成，成年人消化道上皮組織和肝臟、胰腺也可以合成少量的CEA并將其分泌到消化道中，正常情況下含量較低[10-11]。目前已經(jīng)有許多關(guān)于CEA作為口腔頜面部惡性腫瘤標(biāo)志物的研究[12]。已有研究發(fā)現(xiàn)CEA在頭頸部鱗狀細(xì)胞癌患者的腫瘤組織中高表達(dá)。隨著檢測技術(shù)的發(fā)展，有關(guān)血清和唾液中CEA檢測的研究逐漸開展[13-14]。CYFRA21-1是細(xì)胞角蛋白19（cytokeratin 19，CK19）的可溶性片段，而CK19是構(gòu)成細(xì)胞骨架的酸性肽，在正常情況下，CK19通常以寡聚鏈的形式出現(xiàn)，含量較少，CYFRA21-1的含量也較低，但口腔黏膜細(xì)胞發(fā)生癌變時，腫瘤細(xì)胞會將大量的CYFRA21-1釋放到細(xì)胞外，表現(xiàn)為唾液中CYFRA21-1和CK19水平異常增加[15]。腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移是一個復(fù)雜的過程。研究表明，口腔癌組織中CAT表達(dá)的增加和黏附分子表達(dá)的減少會導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞脫落，從而增加唾液中CAT的含量[16]。CAT可以去除體內(nèi)的活性氧，并在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮重要作用[17]。

口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞分泌的腫瘤標(biāo)志物可直接進(jìn)入唾液，靈敏度高，腫瘤標(biāo)志物可從細(xì)胞外基質(zhì)轉(zhuǎn)移至血液或侵入腫瘤周圍血管，導(dǎo)致其血清水平發(fā)生改變[18-19]。本研究結(jié)果顯示，口腔鱗狀細(xì)胞癌組、良性腫瘤組患者唾液中CEA、CAT及CYFRA21-1水平均高于健康對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；口腔鱗狀細(xì)胞癌組患者唾液中CEA、CAT及CYFRA21-1水平均高于良性腫瘤組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。表明以上指標(biāo)在口腔鱗狀細(xì)胞癌的診斷及良惡性腫瘤的鑒別中具有一定的臨床應(yīng)用價值，可作為輔助診斷和鑒別診斷手段。臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的口腔鱗狀細(xì)胞癌患者唾液中CEA、CYFRA21-1水平均明顯高于臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。同時，盡管Ⅲ～Ⅳ期口腔鱗狀細(xì)胞癌患者唾液中CAT水平高于Ⅰ～Ⅱ期患者，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），可能由于本研究樣本量較小，兩者之間的關(guān)系需要進(jìn)一步確認(rèn)，CAT檢測可能對口腔癌具有輔助診斷價值。唾液中CEA、CAT及CYFRA21-1診斷口腔鱗狀細(xì)胞癌的靈敏度和特異度均較高，在臨床工作中，通過獲取唾液并檢測腫瘤標(biāo)志物水平可以為進(jìn)一步診斷和治療口腔鱗狀細(xì)胞癌提供依據(jù)。

目前臨床研究中尚無特異性口腔鱗狀細(xì)胞癌標(biāo)志物，因此篩選具有較高特異度和靈敏度的口腔鱗狀細(xì)胞癌標(biāo)志物具有重要意義。本研究通過對唾液中的腫瘤標(biāo)志物CEA、CAT及CYFRA21-1進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)其對口腔鱗狀細(xì)胞癌患者具有早期診斷價值，并分析其與患者臨床特征的關(guān)系，明確了其在口腔鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生和發(fā)展的不同階段具有重要的臨床意義。目前，口腔鱗狀細(xì)胞癌患者唾液中腫瘤標(biāo)志物變化的機(jī)制尚不清楚，需要進(jìn)行更深入的研究，并在遺傳水平上進(jìn)一步探討引起這種變化的機(jī)制。

綜上所述，口腔鱗狀細(xì)胞癌患者唾液中CEA、CAT及CYFRA21-1水平均升高，上述指標(biāo)對口腔鱗狀細(xì)胞癌具有一定的診斷價值，CEA和CYFRA21-1水平與患者的臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有關(guān)。