血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA聯合檢測對良惡性卵巢囊性病變的鑒別診斷價值*

李 凡，畢勝利，張學林，郝 潔，呂 佳

河北北方學院附屬第二醫院：1.檢驗科；2.婦科；3.腫瘤科，河北張家口 075100

卵巢囊性病變是體內多種內分泌系統功能異常協同作用而導致卵巢產生過量雄性激素的結果，在婦科疾病中較為常見[1]。其發病較隱匿，缺乏典型的臨床癥狀及有效的早期鑒別診斷方法，易造成誤診[2]。因此，準確地鑒別診斷卵巢囊性病變的良惡性對臨床治療方案的選擇及預后的改善有重要意義。血清高半胱氨酸蛋白61(Cyr61)是結締組織生長因子家族成員之一，近年來其在腫瘤中的調節作用已成為國內外研究的熱點[3-4]。血清血管生成素樣蛋白4(Angptl4)是血管生成素樣蛋白家族的成員之一，在糖脂代謝及胰島素抵抗的調節中起重要作用，此外還與腫瘤細胞的遷移密切相關[5-6]。本研究通過檢測卵巢囊性病變患者血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA的相對表達水平，探討血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA聯合檢測鑒別診斷良惡性卵巢囊性病變的價值，以期提高卵巢囊性病變良惡性的鑒別診斷率。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年6月至2020年5月在河北北方學院附屬第二醫院婦科接受治療的156例卵巢囊性病變患者為研究對象，根據術后病理結果明確病變性質，將患者分為良性卵巢囊性病變患者(良性腫瘤組，82例)和惡性卵巢囊性病變患者(惡性腫瘤組，74例)。良性腫瘤組患者年齡20～69歲，平均(47.34±13.17)歲；惡性腫瘤組患者年齡20～68歲，平均(47.02±13.46)歲。2組患者年齡比較差異無統計學意義(P>0.05)。惡性腫瘤組腫瘤最大徑≥5 cm的患者有38例，腫瘤最大徑<5 cm有36例；分化程度：中、高分化46例，低分化28例；FIGO臨床分期：Ⅰ+Ⅱ期45例，Ⅲ+Ⅳ期29例；組織分型：漿液性腺癌39例，黏液性腺癌35例；淋巴結轉移：無淋巴結轉移45例，有淋巴結轉移29例。本研究經河北北方學院附屬第二醫院倫理委員會批準執行；所有研究對象均為自愿參加，并簽署知情同意書。

納入標準：(1)經影像學及臨床檢查發現，并經病理學檢查明確病變性質；(2)實驗室、臨床檢查及影像學資料完整、清晰；(3)初次確診，此前未進行過放化療及手術治療；(4)精神狀態無異常。排除標準：(1)伴有急性感染性疾病及其他部位原發性惡性腫瘤；(2)伴有其他婦科疾病；(3)伴有嚴重心、肝、腎功能不全及凝血功能不全；(4)因其他原因不能參與本研究。

1.2試劑與儀器 RNA提取試劑盒(貨號：R1200)購自上海恒斐生物科技有限公司；反轉錄試劑盒(貨號：121262)購自北京凱瑞基生物科技有限公司；miScript SYBR?Green 實時熒光定量PCR(qPCR)試劑盒(貨號：218076)購自德國凱杰公司。qPCR儀(型號：7500)購自美國Applied Biosystems公司。

1.3方法

1.3.1標本采集與保存 采集所有受試者入院第2天清晨空腹靜脈血標本3 mL，3 000 r/min離心15 min后收集血清，迅速置于-80 ℃保存待測。

1.3.2血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA的相對表達水平檢測 采用RNA提取試劑盒提取血清總RNA，反轉錄試劑盒將RNA反轉錄得到cDNA，具體操作步驟嚴格按照試劑盒說明書進行。采用qPCR法測定血清Cyr61、Angptl4及其內參GAPDH的mRNA表達情況，引物由上海生工生物工程股份有限公司設計并合成，引物序列見表1。反應體系共20.0 μL：cDNA模板(50 ng/μL)2.0 μL，miScript SYBR?Green Mix 10.0 μL，上、下游引物(10 μmol/L)各0.8 μL，ddH2O 6.4 μL。反應條件：95 ℃預變性5 min；95 ℃ 30 s，58 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，40個循環。每份樣品均設3個重復孔，采用2-ΔΔCt法計算血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA的相對表達水平。

表1 qPCR引物序列

2 結 果

2.1良性腫瘤組與惡性腫瘤組血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA的相對表達水平比較 惡性腫瘤組血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA的相對表達水平高于良性腫瘤組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 良性腫瘤組與惡性腫瘤組血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA的相對表達水平比較

2.2惡性卵巢囊性病變患者血清Cyr61 mRNA與Angptl4 mRNA的相關性 Pearson相關分析結果顯示，惡性卵巢囊性病變患者血清Cyr61 mRNA與Angptl4 mRNA呈正相關(r=0.612，P<0.05)。見圖1。

圖1 惡性卵巢囊性病變患者血清Cyr61 mRNA與Angptl4 mRNA的相關性散點圖

2.3血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA與惡性卵巢囊性病變患者臨床病理參數的關系 根據惡性卵巢囊性病變患者血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA的相對表達水平平均值(1.52、1.62)，將患者分為Cyr61 mRNA低表達組(36例)、高表達組(38例)，Angptl4 mRNA低表達組(39例)、高表達組(35例)。惡性卵巢囊性病變患者血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA與年齡、腫瘤最大徑、癌組織分型無關(P>0.05)，與腫瘤分化程度、FIGO臨床分期、淋巴結轉移有關(P<0.05)。見表3。

表3 血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA與惡性卵巢囊性病變患者臨床病理參數的關系[n(%)]

續表3 血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA與惡性卵巢囊性病變患者臨床病理參數的關系[n(%)]

2.4血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA對良惡性卵巢囊性病變的鑒別診斷價值 以血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA為檢驗變量繪制ROC曲線，結果顯示，血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA單獨檢測鑒別診斷良惡性卵巢囊性病變的曲線下面積(AUC)分別為0.849(95%CI:0.790～0.908)、0.893(95%CI:0.841～0.946)，最佳臨界值分別為1.278、1.358，特異度分別為78.0%、81.7%，靈敏度分別為78.4%、87.8%。血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA聯合檢測鑒別診斷良惡性卵巢囊性病變的AUC為0.921(95%CI:0.876～0.966)，特異度為91.5%，靈敏度為85.1%。見圖2。

圖2 血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA對良惡性卵巢囊性病變鑒別診斷的ROC曲線

2.5影響惡性卵巢囊性病變發生的多因素Logistic回歸分析 將是否發生惡性卵巢囊性病變作為因變量，以血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA、腫瘤分化程度、FIGO臨床分期、淋巴結轉移作為自變量進行多因素Logistic回歸分析，結果顯示，血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA、FIGO臨床分期是影響惡性卵巢囊性病變發生的獨立危險因素(P<0.05)。見表4。

表4 影響惡性卵巢囊性病變發生的多因素Logistic回歸分析結果

3 討 論

卵巢囊性病變是發生在各個年齡階段的女性常見生殖系統疾病，若不能及時治療，會出現多種嚴重的并發癥，同時還會對患者生殖功能及體內激素水平造成影響，嚴重影響女性的生殖健康及生活質量[7-9]。目前，卵巢囊性病變檢查主要采用常規超聲，但其檢查只能表明卵巢上有異常的包塊出現，無法說明包塊的具體性質，且該檢查方式受操作醫生專業水平等多種因素影響[10-11]。因此，臨床上缺乏鑒別診斷卵巢囊性病變良惡性的有效指標。

Cyr61是一種富含半胱氨酸的分泌性肝素連接蛋白，可與多種調節細胞功能及信號傳導通路的分子相互作用，進而參與細胞分化、增殖和血管生成，最終在腫瘤的發生、發展中發揮重要作用[12-14]。本研究結果顯示，惡性腫瘤組患者血清Cyr61 mRNA的相對表達水平高于良性腫瘤組，與孟春艷等[15]及ZHANG等[16]研究結果中的表達趨勢一致。血清Cyr61 mRNA與腫瘤分化程度、FIGO臨床分期、淋巴結轉移有關，且血清Cyr61 mRNA是影響惡性卵巢囊性病變發生的獨立危險因素，提示血清Cyr61 mRNA可能通過高表達在惡性卵巢囊性病變中發揮重要作用，推測原因是血清Cyr61 mRNA的相對表達水平升高后，與體內不同因子相互作用，使血清Cyr61 mRNA在細胞環境中發揮生物效應，進而參與血管生成及惡性腫瘤細胞的增殖、遷移等進程。此外，ROC曲線分析結果顯示，血清Cyr61 mRNA對良惡性卵巢囊性病變有一定的鑒別診斷價值，其AUC為0.849，特異度、靈敏度分別為78.0%、78.4%。表明血清Cyr61 mRNA相對表達水平的異常升高對惡性卵巢囊性病變的發生有一定提示作用，但其特異度、靈敏度均相對較低，需與其他指標聯合使用。

Angptl4主要在脂肪組織及肝臟中表達，它是一種在代謝綜合征及糖尿病等疾病發病機制中發揮重要作用的脂肪因子，對糖脂代謝的作用是其研究熱點[17-18]。近年研究表明，Angptl4參與上皮細胞分化，通過激活某些信號通路，在腫瘤細胞增殖和轉移中起著重要作用[19]。CONWAY等[20]研究表明，PRSS21/testisin可通過拮抗Angptl4來抑制卵巢腫瘤的轉移。本研究結果顯示，惡性腫瘤組血清Angptl4 mRNA的相對表達水平高于良性腫瘤組，血清Angptl4 mRNA是影響惡性卵巢囊性病變發生的獨立危險因素，且血清Angptl4 mRNA與腫瘤分化程度、FIGO臨床分期、淋巴結轉移有關。提示Angptl4可能不僅參與惡性卵巢囊性病變的發生、發展，還與其腫瘤侵襲、轉移等密切相關，Angptl4可能是通過與細胞因子結合，進而激活其下游相關信號通路，進一步促進腫瘤細胞的增殖和轉移，加速患者病情進展。ROC曲線分析結果顯示，血清Angptl4 mRNA對良惡性卵巢囊性病變有較高的鑒別診斷價值，其AUC為0.893，特異度和靈敏度分別為81.7%、87.8%，均高于血清Cyr61 mRNA，而血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA聯合檢測后的鑒別診斷價值高于其單獨檢測，表明血清Angptl4 mRNA的異常升高可對卵巢囊性病變由良性轉為惡性有重要提示作用，且血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA聯合檢測鑒別診斷價值更高。但卵巢囊性病變是一個多基因、多因素共同參與的復雜過程，血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA在其發病機制中的具體作用，仍需進一步擴大樣本量深入研究。

綜上所述，血清Cyr61 mRNA、Angptl4 mRNA對卵巢囊性病變的良惡性均有一定的鑒別診斷價值。