葉酸代謝相關酶基因與妊娠期糖尿病、妊娠期高血壓、羊水過少及早產的關系研究

胡 勤，徐 梅，葉 強，陳月華，韋 懿

四川省自貢市婦幼保健院檢驗科，四川自貢 643000

葉酸是一種水溶性維生素，是機體代謝途徑中必不可少的輔助因子。血清葉酸水平受5,10-亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)和甲硫氨酸合成酶還原酶(MTRR)多態性的影響[1]。MTHFR基因677C>T和1298A>C突變分別誘導丙氨酸轉化為纈氨酸和谷氨酸，從而導致MTHFR活性降低，繼而降低葉酸的利用率[2]。上述突變還會增加同型半胱氨酸(Hcy)的水平，誘發血管內皮損傷和功能障礙，破壞凝血和纖溶系統，繼而引起過度凝血，最終導致流產、胎兒生長受限和死產等[3]。不良妊娠結局(APO)涉及一系列異常妊娠，在我國的發生率為10%～15%[4]。MTHFR基因的多態性被認為是引起APO的主要遺傳因素之一。早產在臨床上較為常見，有研究認為早產可能由遺傳和環境的相互作用結果導致，其中葉酸代謝障礙是研究的熱點之一[5]。本研究將分析葉酸代謝相關酶基因多態性與羊水過少、新生兒早產的關系。

高同型半胱氨酸血癥是代謝綜合征發展的潛在危險因素。流行病學研究表明，MTHFR基因的677C>T多態性可將高血壓的風險增加24%～87%[6]。10%～15%的孕婦有發生妊娠期高血壓的風險，并可能導致更為嚴重的并發癥，對胎兒和自身的健康造成重大不利影響[7]。妊娠期糖尿病患者糖代謝多于產后恢復正常，但將來患2型糖尿病的概率增加[8]。本文回顧性分析近兩年在本院產檢并分娩的孕婦相關指標，繼續深入研究妊娠期高血壓、妊娠期糖尿病與葉酸代謝相關酶基因的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年9月至2020年5月在本院接受葉酸代謝相關酶基因檢測和進行分娩的孕婦24 864例進行回顧性分析，其中19 211例符合納入標準，將其納入研究。研究對象基本信息：年齡18～42歲，平均(27.64±3.12)歲；體質量指數(BMI)18.0～37.5 kg/m2，平均(24.36±2.27)kg/m2。根據研究對象妊娠期間的疾病類型及癥狀分為正常組12 064例，羊水過少組1 480例，妊娠期糖尿病組4 506例，妊娠期高血壓組513例，早產(先兆早產但不伴分娩)組648例。其中羊水過少組、妊娠期糖尿病組、妊娠期高血壓組、早產組為病例組。各組年齡、BMI比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性，見表1。納入標準：(1)年齡18～42歲；(2)男女雙方均無家族遺傳病史；(3)出院診斷為單因素導致的糖尿病、高血壓、早產、羊水過少。排除標準：(1)宮頸手術史；(2)合并除妊娠期糖尿病、妊娠期高血壓、早產、羊水過少外的其他并發癥；(3)精神和認知異常；(4)依從性較差。

表1 各組研究對象年齡、BMI比較

1.2儀器與試劑 儀器為Fascan多通道熒光定量分析儀，試劑為測序反應通用試劑盒(SNP-U1)，儀器及試劑均由西安天隆公司提供。

1.3方法 采用EDTA抗凝管收集研究對象2 mL靜脈血，上下顛倒10次以上混勻，取10 μL混勻后的標本加入標本稀釋液中，渦旋混勻5 s備用。A孔和B孔分別加入2 μL稀釋好的標本(相鄰的A孔和B孔為1個完整檢測)，加樣后蓋緊八聯管，6 000 r/min離心10 s。37 ℃溫浴 3 min，取出標本，渦旋混勻5 s，再次離心1 min。上機，啟動微測序程序并進行數據分析。葉酸代謝相關酶基因的單核苷酸多態性位點包括MTHFR 677C>T、MTHFR 1298A>C、MTRR 66A>G。葉酸利用能力風險度分級根據西安天隆測序反應通用試劑盒(SNP-U1)說明書將其分為無風險、低風險、中風險、高風險。

2 結 果

2.1基因型分布 本院19 211例孕婦葉酸代謝相關酶基因MTHFR 1298A>C等位基因位點3種基因型(AA/AC/CC)頻率分別為62.75%、32.73%、4.52%；MTHFR 677C>T等位基因位點3種基因型(CC/CT/TT)頻率分別為44.22%、43.06%、12.72%；MTRR 66A>G等位基因位點3種基因型(AA/AG/GG)頻率分別為55.30%、37.82%、6.88%。

2.2各組孕婦葉酸利用能力風險評估 羊水過少組孕婦葉酸利用能力高風險人數占比高于正常組，差異有統計學意義(χ2=29.916，P<0.05)；妊娠期糖尿病組與正常組無風險人數占比差異有統計學意義(χ2=10.33，P<0.05)；妊娠期高血壓組孕婦葉酸利用能力中風險和高風險人數占比均高于正常組，差異有統計學意義(χ2=5.131、8.627，P<0.05)；早產組孕婦葉酸利用能力高風險人數占比高于正常組，差異有統計學意義(χ2=23.752，P<0.05)；各病例組其他項目分別與正常組比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。見表2。

2.3MTHFR 677C>T基因型在各組中的分布及與疾病的關系 各組MTHFR 677C>T基因型分布符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律。各病例組的MTHFR 677C>T基因型占比和等位基因頻率分別與正常組進行比較，羊水過少組、妊娠期高血壓組、妊娠期糖尿病組基因型占比差異有統計學意義(χ2=13.221、8.182、7.503，P<0.05)，且這3組的MTHFR 677C>T基因的等位基因頻率與正常組比較，差異有統計學意義(χ2=511.102、8.301、5.632，P<0.05)。而早產組MTHFR 677C>T基因型占比和等位基因頻率與正常組比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。以上結果說明MTHFR 677C>T基因型與羊水過少、妊娠期高血壓、妊娠期糖尿病的發生有關，而早產的發生與MTHFR 677C>T基因型無關。見表3。

2.4MTHFR 1298A>C基因型在各組中的分布及與疾病的關系 通過對各組的MTHFR 1298A>C基因型占比和等位基因頻率分析發現，早產組與正常組比較，差異均有統計學意義(χ2=12.131、8.264，P<0.05)；而羊水過少組、妊娠期高血壓組、妊娠期糖尿病組MTHFR 1298A>C基因型占比和等位基因頻率與正常組比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。這說明MTHFR 1298A>C基因型與早產的發生有關，而與羊水過少、妊娠期高血壓、妊娠期糖尿病的發生無關。見表4。

2.5MTRR 66A>G基因型在各組中的分布及與疾病的關系 通過對各組的MTRR 66A>G基因型占比和等位基因頻率分析發現，羊水過少組、妊娠期高血壓組、妊娠期糖尿病組MTRR 66A>G基因型占比和等位基因頻率與正常組比較，差異均無統計學意義(P>0.05)；早產組MTRR 66A>G基因型占比和等位基因頻率與正常組比較，差異均有統計學意義(χ2=8.888、8.334，P<0.05)。以上結果說明MTRR 66A>G基因型與早產的發生有關，而與羊水過少、妊娠期高血壓、妊娠期糖尿病的發生無關。見表5。

表2 各組孕婦葉酸利用能力風險評估比較[n(%)]

表3 各組孕婦MTHFR基因677C>T位點基因型分布和等位基因頻率[n(%)]

表4 各組孕婦MTHFR基因1298A>C位點基因型分布和等位基因頻率[n(%)]

表5 各組孕婦MTRR基因66A>G位點基因型分布和等位基因頻率[n(%)]

3 討 論

葉酸是機體不可缺少的水溶性維生素，女性孕期因胃腸道生理功能變化,導致葉酸吸收減少,但需要量相對增加,更容易發生葉酸缺乏。如果孕婦葉酸代謝相關酶基因檢測為高風險，則機體吸收葉酸的能力較差，需要補充更多的葉酸來維持所需[9]。文獻[10]報道了MTHFR基因677C>T多態性與血壓之間的關系，TT基因型男性的平均收縮壓、舒張壓高于CT或CC基因型，這一結論與一項研究分析結果一致[11]，MTHFR基因677C>T多態性與妊娠期高血壓患病風險的相關性高達87%，這也與本研究的結果一致：妊娠期高血壓組孕婦檢出葉酸利用能力中風險、高風險的比例高于正常組，且與正常組相比，MTHFR 677C>T基因型占比和等位基因頻率差異均有統計學意義(P<0.05)，說明MTHFR基因677C>T多態性確實增加了患妊娠期高血壓的風險。

羊水能夠直接反映胎兒的生長情況，胎兒在盆腔內的呼吸、排泄和吞咽等活動，均直接與羊水相關，若羊水過少，孕婦易發生宮內感染，對胎兒正常生長發育產生嚴重影響[12]。本研究發現，葉酸代謝相關酶基因突變與羊水過少有著直接的關系，羊水過少孕婦檢出葉酸利用能力高風險的比例增高，且MTHFR 677C>T基因型占比和等位基因頻率與正常組明顯不同，這說明MTHFR基因677C>T多態性會增加孕婦發生羊水過少的概率。

妊娠期糖尿病受諸多因素的影響，例如糖尿病家族史、年齡、肥胖等，對妊娠結局有一定的影響[13]。有報道指出，血清Hcy可促進妊娠期糖尿病的炎性反應，葉酸、維生素B12水平與血清Hcy呈負相關[14]，結合該結論，筆者發現妊娠期糖尿病孕婦檢出葉酸利用能力無風險的比例增高，且MTHFR 677C>T基因型占比和等位基因頻率與正常組比較，差異有統計學意義(P<0.05)，因此判斷妊娠期糖尿病的發生與葉酸代謝有關，具體的影響機制需要進一步研究。

有研究表明，孕期攝入葉酸補充劑可降低自發性早產及早期早產的發生率[15],與本研究結果一致，先兆早產孕婦檢出葉酸利用能力高風險的比例增高且MTHFR 1298A>C和MTRR 66A>G基因型占比和等位基因頻率與正常組比較，差異均有統計學意義(P<0.05)。這表明葉酸利用能力高風險人群，也就是對葉酸吸收能力較弱的人群更易發生早產。

綜上所述，葉酸代謝相關酶基因多態性與妊娠期各種相關合并癥的發生都有重要的關聯；機體葉酸利用能力風險性越高，妊娠期發生高血壓、早產、羊水過少等合并癥的概率越大，并且妊娠期高血壓對葉酸利用能力的變化更為敏感。MTHFR 677C>T基因型與羊水過少、妊娠期高血壓、妊娠期糖尿病的發生有關；早產的發生同時受MTHFR 1298A>C和MTRR 66A>G兩種基因型占比和等位基因頻率的影響。