PLR、血漿(1-3)-β-D葡聚糖聯(lián)合檢測(cè)對(duì)AIDS合并馬爾尼菲籃狀菌感染的診斷價(jià)值*

潘艷娜,唐秀文△,張 勇

廣西壯族自治區(qū)龍?zhí)夺t(yī)院:1.中心實(shí)驗(yàn)室;2.感染科二病區(qū)，廣西柳州 545005

人類(lèi)免疫缺陷病毒(HIV)是獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)的病原體。HIV感染的主要靶細(xì)胞為CD4+T細(xì)胞，可引起CD4+T細(xì)胞的不斷減少，導(dǎo)致感染者細(xì)胞免疫功能缺失，并繼發(fā)體液免疫功能缺損，最終進(jìn)入AIDS期，因各種機(jī)會(huì)性感染及腫瘤而死亡。在東南亞一帶及我國(guó)南方地區(qū)如廣東、廣西等地，馬爾尼菲籃狀菌是AIDS患者機(jī)會(huì)性感染的主要病原體[1-2]。該病起病隱匿,極易誤診、漏診，大多數(shù)患者病情重，進(jìn)展快，是AIDS患者死亡的主要原因之一。馬爾尼菲籃狀菌病的傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室診斷方法為馬爾尼菲籃狀菌培養(yǎng)，因培養(yǎng)耗時(shí)長(zhǎng)，難以實(shí)現(xiàn)早期診斷、早期治療。而對(duì)AIDS合并馬爾尼菲籃狀菌感染患者的早期診斷和治療能降低患者的病死率。血小板/淋巴細(xì)胞比值(PLR)是血常規(guī)結(jié)果中的血小板與淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)的比值，有研究者發(fā)現(xiàn)PLR的增加與代謝綜合征的存在和嚴(yán)重程度明顯相關(guān)[3],此外PLR還可作為急性缺血性腦卒中機(jī)械性血栓切除術(shù)患者的預(yù)后指標(biāo)[4]。于艷華等[5]發(fā)現(xiàn)血漿(1-3)-β-D葡聚糖可能有助于馬爾尼菲籃狀菌病的早期診斷。本文旨在探討PLR與血漿(1-3)-β-D葡聚糖聯(lián)合檢測(cè)對(duì)AIDS合并馬爾尼菲籃狀菌感染的診斷價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2016年6月至2018年6月在本院住院、有血漿(1-3)-β-D葡聚糖檢測(cè)結(jié)果的AIDS患者共76例。將46例AIDS合并馬爾尼菲籃狀菌感染患者納入觀察組，其中男34例，女12例；年齡19～75歲，平均(51.1±13.6)歲。將30例AIDS無(wú)機(jī)會(huì)感染患者納入對(duì)照組，其中男15例，女15例；年齡33～78歲，平均(54.2±12.5)歲。兩組年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。

1.2診斷與排除標(biāo)準(zhǔn) AIDS合并馬爾尼菲籃狀菌感染診斷：參照《艾滋病診療指南》[6]中相關(guān)疾病的診斷標(biāo)準(zhǔn)。AIDS無(wú)機(jī)會(huì)感染:HIV-1抗體陽(yáng)性但無(wú)機(jī)會(huì)性感染相關(guān)癥狀[6]。排除標(biāo)準(zhǔn)：患者的相關(guān)病歷資料不齊全，HIV感染合并病毒性肝炎、肝癌，其他腫瘤，血液病，代謝綜合征。

1.3方法

1.3.1馬爾尼菲籃狀菌的培養(yǎng)與鑒定 各類(lèi)標(biāo)本均接種于2支沙保羅斜面培養(yǎng)基，1支置于35 ℃培養(yǎng)，另1支置于25 ℃培養(yǎng)。在35 ℃環(huán)境中培養(yǎng)出乳白色酵母樣菌落，涂片染色鏡檢呈圓形、橢圓形，中間有橫隔孢子；在25 ℃培養(yǎng)出多色性的菌絲狀菌落，產(chǎn)生溶入培養(yǎng)基的玫瑰紅色素。出現(xiàn)以上特征則鑒定為培養(yǎng)出馬爾尼菲籃狀菌。涂片染色法鏡檢可見(jiàn)典型的帚狀枝。

1.3.2血常規(guī)項(xiàng)目檢測(cè) 采用希森美康xn1000及配套試劑對(duì)患者空腹靜脈血標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)。

1.3.3血漿(1-3)-β-D葡聚糖檢測(cè) (1)采用一次性無(wú)菌無(wú)熱源真空采血管采集患者靜脈血4 mL，3 000 r/min離心10 min；(2)取100 μL血清(富含血小板)加入標(biāo)本處理液中，加熱10 min，冷卻5 min；(3)取(2)中的上清液200 μL加入反應(yīng)主劑，輕搖溶解20 s，全部轉(zhuǎn)移到平底試管，上機(jī)檢測(cè)。

2 結(jié) 果

2.1兩組的PLR、血漿(1-3)-β-D葡聚糖水平比較 觀察組的PLR、血漿(1-3)-β-D葡聚糖水平較對(duì)照組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表1。

表1 兩組PLR、血漿(1-3)-β-D葡聚糖檢測(cè)結(jié)果比較[M(IQR)]

2.2PLR、血漿(1-3)-β-D葡聚糖單獨(dú)和聯(lián)合檢測(cè)對(duì)AIDS合并馬爾尼菲籃狀菌感染的診斷效能 各項(xiàng)指標(biāo)的曲線下面積(AUC)由大到小依次為PLR聯(lián)合血漿(1-3)-β-D葡聚糖、PLR、血漿(1-3)-β-D葡聚糖。見(jiàn)表2、圖1。

表2 PLR、血漿(1-3)-β-D葡聚糖單獨(dú)和聯(lián)合檢測(cè)的ROC曲線分析結(jié)果

圖1 PLR、血漿(1-3)-β-D葡聚糖單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)診斷AIDS合并馬爾尼菲籃狀菌感染的ROC曲線

3 討 論

馬爾尼菲籃狀菌病起病隱匿，可侵及多個(gè)系統(tǒng)，發(fā)展迅速，是引起AIDS患者死亡的主要機(jī)會(huì)性感染之一。因此，早期、快速診斷和治療馬爾尼菲籃狀菌病，是臨床需要解決的問(wèn)題。PLR是一種簡(jiǎn)單易得、檢測(cè)價(jià)格低廉的炎癥指標(biāo)，它很容易受獲得性免疫反應(yīng)和自然免疫反應(yīng)的影響。PLR可成為急性闌尾炎臨床病理分型的指標(biāo)。于強(qiáng)宗[7]指出，PLR>81.63、>131.78、>184.54可分別用于鑒別診斷急性單純性闌尾炎、急性蜂窩組織性闌尾炎、急性壞疽性闌尾炎。淋巴細(xì)胞是人體主要的免疫細(xì)胞，淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)是生理應(yīng)激和全身炎性反應(yīng)的早期標(biāo)志物。血小板由骨髓造血組織中的巨核細(xì)胞產(chǎn)生，其促炎活性是通過(guò)與循環(huán)中其他白細(xì)胞的相互作用介導(dǎo)的，隨后釋放細(xì)胞因子和趨化因子，從而達(dá)到促進(jìn)炎癥的作用[8]。活化的血小板可增強(qiáng)淋巴細(xì)胞對(duì)內(nèi)皮的黏附，從而促進(jìn)淋巴細(xì)胞在高內(nèi)皮靜脈中歸巢并遷移到炎癥部位[9]。PLR的優(yōu)點(diǎn)是同時(shí)反映了細(xì)胞聚集和炎癥通路的情況，在預(yù)測(cè)各種炎癥方面可能比單純的血小板或者淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)更有價(jià)值。有研究表明，PLR與HIV感染者/AIDS患者病死率有關(guān)，當(dāng)PLR大于或者小于120時(shí)死亡風(fēng)險(xiǎn)增加，呈U型曲線[10]。這是因?yàn)镻LR升高和降低分別是由血小板的增多和減少?zèng)Q定的。

(1-3)-β-D葡聚糖廣泛存在于除接合菌以外的真菌細(xì)胞壁中，是細(xì)胞壁的多糖成分，占真菌細(xì)胞壁成分的50%以上，作為真菌抗原具有較高的特異性。人體發(fā)生深部真菌感染時(shí)，真菌經(jīng)吞噬細(xì)胞吞噬處理后，(1-3)-β-D葡聚糖持續(xù)釋放，從而使人體血液或體液的(1-3)-β-D葡聚糖水平升高[11]。多項(xiàng)研究表明，(1-3)-β-D葡聚糖檢測(cè)對(duì)深部真菌感染的早期診斷具有一定價(jià)值[11-12]。本研究結(jié)果顯示，觀察組血漿(1-3)-β-D葡聚糖判定馬爾尼菲籃狀菌感染的AUC、臨界值、靈敏度、特異度分別為0.704、84.86 pg/mL、43.50%、93.30%,AUC、臨界值與胡家光等[11]的研究結(jié)果相接近，但是靈敏度較其低。分析原因:(1-3)-β-D葡聚糖在檢測(cè)過(guò)程中存在假陰性，可能是有些標(biāo)本的馬爾尼菲籃狀菌數(shù)量太少，經(jīng)過(guò)吞噬細(xì)胞吞噬、消化后，(1-3)-β-D葡聚糖從細(xì)胞壁釋放得太少[13]。PLR聯(lián)合血漿(1-3)-β-D葡聚糖檢測(cè)的AUC、靈敏度、特異度分別是0.848、80.40%、76.70%。聯(lián)合檢測(cè)的特異度較PLR、血漿(1-3)-β-D葡聚糖單獨(dú)檢測(cè)的特異度低，可能是因?yàn)楸疚闹蠵LR、血漿(1-3)-β-D葡聚糖聯(lián)合檢測(cè)屬于并聯(lián)試驗(yàn)，提高了靈敏度，但是特異度有所降低[13]。PLR、血漿(1-3)-β-D葡聚糖并聯(lián)檢測(cè)，可增大AUC，提高檢出率，降低漏診率，其診斷價(jià)值高于PLR、血漿(1-3)-β-D葡聚糖單獨(dú)檢測(cè)。

綜上所述，PLR與(1-3)-β-D葡聚糖聯(lián)合檢測(cè)對(duì)于分析AIDS患者是否合并馬爾尼菲籃狀菌感染具有一定的價(jià)值，在使用時(shí)應(yīng)密切結(jié)合患者臨床表現(xiàn)、病原學(xué)檢查結(jié)果等，給臨床提供早期治療依據(jù)，降低病死率，改善預(yù)后。