徐州市92 株非結核分枝桿菌菌種鑒定及藥敏結果分析

朱春玲，魏素梅，侯遠沛，劉成永

（徐州市傳染病醫院檢驗科，江蘇 徐州 221004）

非結核分枝桿菌廣泛分布于水、 土壤和空氣中，容易導致免疫功能低下患者的感染[1]。從1990年-2010 年全國結核病流行病學調查報告顯示非結核分枝桿菌的分離率逐年上升[2]。非結核分枝桿菌的感染存在地域差異，總體上呈現出南方高于北方，沿海高于內陸，溫暖地區高于寒冷地區等特點[3]。徐州地區介于沿海與內陸之間，非結核分枝桿菌的菌種分布及耐藥情況未有詳盡的報道，分析本院近3 年非結核分枝桿菌感染及藥敏情況，為臨床診治提供科學依據。

1 資料和方法

1.1 標本來源 92 例標本來源于 2016 年 1 月-2018 年12 月本院門診和病房患者,男57 例,女35例，年齡 18~95 歲,平均年齡 54.85±21.21 歲。其中痰液60 例，肺泡灌洗液18 例，菌株13 例，膿液1例。

1.2 試劑和方法 分枝桿菌菌種鑒定試劑由亞能生物技術(深圳)有限公司提供，采用PCR-反向點雜交酶顯色法。先將痰液、肺泡灌洗液和膿液用消化液消化后，加入特定的引物進行PCR 擴增，擴增產物和醋酸纖維膜上的分枝桿菌探針雜交,通過酶顯色反應,鑒定為何種分枝桿菌。藥敏實驗采用《結核病診斷實驗室檢驗規程》中的比例法進行[2],所用的 8 種藥物分別為:異煙肼(INH)、利福平(RFP)、氧氟沙星(OFX)、乙胺丁醇(EMB)、丙硫異煙胺(TH13 21)、卡那霉素(KAN)、阿米卡星(AMK)、環 絲氨 酸（CS）,培養基為珠海貝索生物有限公司提供。

1.3 儀器選擇 PCR 擴增儀為天隆生物科技有限公司提供，型號為TI988；恒溫雜交儀為亞能生物技術(深圳)有限公司提供，型號為YN-H16。

1.4 統計學處理 采用 PEMS 3.1 醫學統計軟件進行統計分析，率的比較采用χ2檢驗，兩組均數的比較采用t 檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

徐州市2018 年非結核分桿菌的感染率與2017、2016 年相比雖有所增高，但差異有統計學意義 （χ2=2.39,1.92;P=0.12,0.16），92 例非結核分桿菌不同年份的構成比,見表1。

表1 92 例非結核分桿菌不同年份的構成比

92 例患者中男性57 例，女性35 例，性別相比統計學差異顯著（χ2=10.52,P=0.00）；60 歲以上患者48 例，60 歲以下患者44 例，比較差異有統計學意義（χ2=0.35,P=0.56）。

92 例非結核分枝桿菌采用基因芯片法鑒定出的菌種構成比為： 胞內分枝桿菌64.13%（59/92），堪薩斯分枝桿菌18.48%（17/92），膿腫分枝桿菌5.43%（5/92），龜分枝桿菌 4.35%（4/92），戈登分枝桿菌 3.26%（3/92），鳥分枝桿菌 3.26%（3/92），淺黃分枝桿菌 1.09%（1/92）。

92 例非結核分枝桿菌對利福平的耐藥率為89.13%（82/92）、異煙肼為 97.82%（90/92）、氧氟沙星為 84.78%（78/92）、乙胺丁醇為 90.22%（83/92）、丙硫異煙胺84.78%（78/92）、卡那霉素77.17%（71/92）、 阿米卡星為 60.87%（56/92）、 環絲氨酸為79.34%（73/92）。92 例非結核分枝桿菌對 8 種抗結核藥的耐藥情況，見表2。

3 討論

非結核分枝桿菌與結核分枝桿菌在形態上難以區分，臨床癥狀和影像學表現極為相似，治療方案卻有所不同。以往菌種鑒定大多采用傳統的羅氏培養法，耗時長，作為“金標準”的直接同源基因或序列比較法操作繁瑣，設備昂貴，一般實驗室難以開展[4]，為滿足臨床快速診斷的需要，本院引進深圳亞能生物技術有限公司生產的分枝桿菌菌種鑒定試劑，該試劑采用PCR-反向點雜交酶顯色法,在一張纖維素膜上一次可鑒定出結核分枝桿菌和22 種非結核分枝桿菌菌種類型，快速方便[5]，為臨床診斷和治療提供科學依據。

據報道全球非結核分枝桿菌的感染率呈上升趨勢[6]，2018 年徐州市非結核分枝桿菌的感染率與前兩年相比較差異無統計學意義，但有所增高；男性患者的感染率顯著高于女性,與北京市的報道相同[7]，60 歲以上老年患者與60 歲以下的中青年患者相比非結核分枝桿菌的總感染率差異不明顯,而張匯征等人的研究認為，對于不同種類的非結核分枝桿菌,感染者的年齡分布和性別比例都有所不同[8]。

徐州市非結核分枝桿菌以胞內分枝桿菌和堪薩斯分枝桿菌感染為主,與北京市和甘肅省的報道類似[7,9]，與重慶和貴州的報道略有不同[10-11]，與自貢市的感染情況差異較大[12]，提示非結核分枝桿菌存在一定的地區差異,因此各個地區應該建立本地的菌種譜,為本地區非結核分枝桿菌患者的防治提供參考。

表2 92 例非結核分枝桿菌對8 種抗結核藥的耐藥情況[n(%)]

非結核分枝桿菌在自然界分布廣泛,容易導致免疫力低下患者的機會感染[13]，其毒性和致病性低于結核分枝桿菌,對一線抗結核藥物具有高度原始耐藥性,本組資料提示徐州市的非結核分枝桿菌對利福平和異煙肼具有較高的耐藥性,與臨近的宿遷市報道類似,與蘇州市的的藥敏結果存在一定的差異，尤其是丙硫異煙胺和阿米卡星的差異較大[14,15]，因此各個地區應根據藥敏結果合理用藥,有利于患者早日康復。

總之，非結核分枝桿菌對一線抗結核藥物具有高度耐藥性,在患者治療前采用基因檢測法可快速準確的鑒定出分枝桿菌的類型,根據藥敏結果精準治療，既節約治療費用，又利于患者的康復。