2019年蘭州市螺類水產品中致病性弧菌 污染狀況調查

◎ 申艷琴，蘭 光，張 陽，張 璟，李欣穎，閆 靜，劉小菊

（甘肅省疾病預防控制中心，甘肅 蘭州 730000）

弧菌是一類菌體短小，桿狀或彎曲成弧狀的革蘭氏陰性菌，廣泛分布于自然界，一般出現于水生動物和鹽濃度范圍較寬的水域中[1]。弧菌多數為非致病菌，只有12種弧菌對人類有致病性，致病性弧菌與人類腸內、腸外感染有關，最常見的是副溶血性弧菌、霍亂弧菌、創傷弧菌、溶藻弧菌和擬態弧菌[2]。致病性弧菌易引起人類急性胃腸炎、傷口、耳、眼感染和敗血癥等疾病，對人類健康構成嚴重的威脅[3]。其中副溶血性弧菌是我國沿海地區引起細菌性食物中毒的主要原因，近幾年，內陸城市中由副溶血弧菌引發的食物中毒事件也逐年增多，已經成為我國食源性疾病的主要病原微生物[4]。根據近年的調查發現淡水產品及環境中致病性弧菌種類不斷增多，引起的食物中毒時有發生。蘭州市雖地處內陸，隨著經濟的發展及人們生活水平的提高，市場水產品的數量及種類逐年增加，不斷有副溶血性弧菌引發食物中毒事件發生。螺肉富含蛋白質、維生素和人體必需的氨基酸和微量元素，是典型的高蛋白、低脂肪、高鈣質的天然動物性保健食品。螺類水產品成為各大飯店必不可少的食材。為了進一步了解蘭州市螺類水產品中重要致病性弧菌污染狀況，減少食源性疾病的危害性，對螺類水產品中霍亂弧菌、副溶血性弧菌、創傷弧菌、溶藻弧菌這4種致病性弧菌的污染狀況進行調查，并對其毒力基因進行檢測分析，為蘭州市螺類水產品中致病性弧菌的食品風險評估及衛生監督部門的管理提供數據支撐。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品來源

2019年隨機抽樣采集蘭州市城關區、七里河區、西固區的批發市場、農貿市場和零售店的螺類水產品，共計175份，每份500 g。

1.1.2 儀器與試劑

全自動微生物鑒定系統BD Phonex50，熒光PCR儀BIOERReal-Time PCR Detection Systim；堿性蛋白胨水，北京陸橋公司；科瑪嘉顯色培養基，鄭州博賽生物技術股份有限公司產品；副溶血性弧菌耐熱溶血素基因tdh、耐熱溶血素相關基因trh、不耐熱溶血素基因tlh熒光檢測試劑盒，均購自北京卓誠惠生科技有限公司；霍亂弧菌血清：日本生研。所有試劑均在有效期內使用。

1.2 方法

1.2.1 弧菌的分離與生化鑒定

參考《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 副溶血性弧菌檢驗》（GB 4789.7—2013）、國家食品安全評估中心發布的《年國家食品污染物和有害因素風險監測手冊》，對樣品進行副溶血性弧菌、創傷弧菌、溶藻弧菌和霍亂弧菌檢測。

1.2.2 副溶血性弧菌毒力基因檢測

應用實時熒光PCR儀對副溶血性弧菌進行毒力基因檢測，在一個PCR反應體系中同時檢測副溶血性弧菌（tlh）和致病性副溶血性弧菌（tdh、trh）。鑒于同一食品中副溶血性弧菌的多樣性，需要從每份樣品中取3～5個不同的副溶血性弧菌純菌落分別進行檢測。

1.2.3 霍亂弧菌血清學鑒定

自營養瓊脂斜面上挑取純培養物與O1群及O139群霍亂弧菌診斷血清做玻片凝集試驗。

1.3 統計學分析

采用SPSS19.0軟件進行統計分析，檢出率的比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果與分析

2.1 螺類水產品中4種致病性弧菌的檢出情況

在采集的175份螺類水產品中，共檢出致病性弧菌90株，檢出率為51.42%。其中溶藻弧菌檢出53株，檢出率為30.29%；副溶血性弧菌檢出22株，檢出率為12.57%；霍亂弧菌檢出9株，檢出率為5.14%；創傷弧菌檢出6株，檢出率為3.43%。具體檢測結果見表1。

表1 螺類水產品中4種致病性弧菌的檢出率表

2.2 不同季節螺類水產品中致病性弧菌的檢出情況

2019年4 個季度螺類水產品中的致病性弧菌陽性率差異有統計學意義（P＜0.05），秋季陽性率最高，為72.5%；夏季、冬季次之，陽性率分別為62.22%、46.67%；春季陽性率最低，為26.67%；具體檢測結果見表2。

表2 不同季節螺類水產品中致病性弧菌的檢出率表

2.3 副溶血性弧菌毒力基因檢測

采用實時熒光定量PCR，對22株副溶血性弧菌檢測副溶血性弧菌（tlh）和致病性副溶血性弧菌（tdh、trh）。結果顯示所有分離株不耐熱溶血素基因tlh均為陽性，而耐熱溶血素tdh、耐熱溶血素相關基因trh均為陰性，說明這些副溶血性弧菌分離株均不攜帶tdh、trh致病性相關基因。

2.4 霍亂弧菌血清學鑒定

霍亂弧菌是一種烈性腸道傳染病，該菌通過攝入受污染的水和食物經口傳播。尤其是感染O1血清群或O139血清群后，易引起烈性腸道傳染病。近年來我國霍亂疫情以食源性暴發為主，特別是進食海（水）產品等[5]。因此，本文對此次檢出的9株霍亂弧菌進行了血清學分型。經鑒定，9株霍亂弧菌均為非O1群和非O139群。

3 討論

本次調查研究蘭州市螺類水產品中共檢出4種常見致病性弧菌，且檢出程度略有差異，總檢出率為51.42%。其中溶藻弧菌檢出最多，檢出率為33.13%；溶藻弧菌（V.alginolyticus）與副溶血弧菌一樣，是沿海地區腹瀉病和食物中毒的常見致病菌，該菌可引起腸道炎、傷口、耳和眼的感染[6-7]，甚至敗血癥等腸外感染，引起的食物中毒事件頻繁報道[8-10]，通過此次調查發現溶藻弧菌是蘭州市食源性疾病發生又一危險因素，應引起關注。副溶血性弧菌檢出率為13.75%，雖然未檢出tdh和trh基因，但根據相關文獻報道，仍有少量分離株表現出KP+現象，揭示了tdh-菌株仍具有一定的致病風險。霍亂弧菌檢出率較低，9株霍亂弧菌均為非O1/O139群，以往研究認為其不致病或僅引起散在輕度腹瀉，近年來有報道發現有些非O1/O139 群霍亂弧菌也可產生霍亂弧菌腸毒素，引起腹瀉、發熱等食物中毒。我國關于非O1/O139群霍亂弧菌引起的食物中毒事件屢見不鮮[11]，因此對水產品中霍亂弧菌監測應列入監管范圍。

此次調查結果顯示，蘭州市螺類水產品致病性弧菌污染狀況比沿海城市略低，與近年來甘肅省各地區致病性弧菌檢出率略高[12-13]，這與水產品在內陸城市的銷售大幅上漲相關，因此對蘭州市螺類水產品致病性弧菌污染狀況進行調查非常必要。螺類水產品大多是濾食性的攝食方式，通過水的吸入和吐出而濾取小型浮游生物，能將水環境中的致病性弧菌富集于體內，要加強對螺類水產品中致病性弧菌的監測。

季節性分布顯示，一年中的5月～8月致病性弧菌總陽性率較高，可見蘭州市螺類水產品中致病性弧菌主要在夏秋季流行。嗜鹽性弧菌在不同季節檢出情況與文獻報道相似[3]。從對不同采樣地點類型監測結果來看，零售店、網店檢出率顯著高于超市，分析原因可能是超市管理制度完善，各類食品分區域銷售，污染幾率降低。因此，衛生監督部門要加大對流通環節的衛生監督力度，加強從業人員衛生知識的培訓工作，提高他們的衛生素質，才能減少食物中毒發生。

綜上所述，蘭州市螺類水產品中4種致病性弧菌污染比較普遍，食品安全風險監測部門應加大監測監控力度，與市場監管部門和食品安全監管部門加強監測信息溝通，加強對螺類水產品銷售、餐飲環節的監管力度，減少此類食品所引起的食源性疾病的發生。在此，也要提醒消費者養成良好的飲食習慣，注意個人衛生，不生吃或半生吃、不吃未熟透的水產品等，以防止病從口入。