兩種小反芻獸疫病毒檢測試劑盒的比較分析

李媛

（廣西壯族自治區北海市動物疫病預防控制中心 536000）

小反芻獸疫屬于牛羊常見疾病，是由小反芻獸疫病毒侵入反芻動物體內后，引發腹瀉、肺炎、口炎、發熱等臨床癥狀的一種傳染性極強烈性疾病[1]，常呈現出地區性流行態勢。該病好發動物為山羊、綿陽，此外牛、駱駝及豬也可發病[2]。該病發病率、致死率較高，近年來，小反芻獸疫在我國諸多地區均有發生，導致發生感染的地區遭遇不同程度的經濟損失，目前已成為全球共同關注的常見傳染病[3]。在出入境管理和日常動物疫病防疫中，對小反芻獸疫加強檢測都是重中之重。酶聯免疫吸附法（ELISA）是檢測這一動物疫病的常用且有效的方法[4]，目前我國在該疫病檢驗中，所用的多為法國進口檢測試劑盒，其價格較高，單次購買包裝量大，這與我中心檢測工作的實際需求并不相符。近年來，青島立見診斷技術發展中心自主研發了小反芻獸疫病毒C-ELISA 抗體檢測試劑盒，為探討其應用價值，本研究選取北海市動物疫病預防控制中心采集的586 份血清標本，與法國所制試劑盒同時檢測，以探討自制試劑盒的應用價值，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 檢驗樣品

選取廣西市級動物疾病預防控制中心2018 年1 月至2019年10 月采集的田間牛羊血清樣本586 份，這些樣本均知悉來源，其中牛血清271 份，羊血清315 份，采集地區：上林縣、隆安縣、賓陽縣、鹿寨縣、馬山縣、融安縣、柳城縣、靈川縣、陽朔縣、全州縣。

1.2 檢測試劑盒

本研究所用小反芻獸疫病毒C-ELISA 抗體檢測試劑盒為2種，其一為青島立見診斷技術發展中心自主研發，簡稱：YN PPRV C-ELISA 試劑盒，其二為國際通用的PPRV C-ELISA 試劑盒（產自法國ID-VET 實驗室），簡稱ID VET 試劑盒。

1.3 方法

1.3.1 血清樣本檢測

根據兩種試劑盒的說明書，對選取的血清樣本展開檢測工作，注意嚴格根據說明書操作。所有血清樣本均用這兩種方法同時檢測，檢測中設立陰性對照組和陽性對照組，并根據說明書中標準，將586 份血清樣本的檢測結果，劃分為++（強陽性）、+（弱陽性）、-（陰性）。

1.3.2 重復試驗

在兩種試劑盒檢測后，從中隨機抽取20 份標本，于相同條件下再次展開檢測，作為重復試驗，并將本次檢測結果和初次檢測結果進行對比。

1.4 統計學分析

2 結果

2.1 血清樣本檢測結果分析

由表1 可知，YN PPRV C-ELISA 試劑盒、ID VET 試劑盒對586 份血清樣本的檢測結果差異不顯著（＞0.05）。

2.2 重復性試驗結果分析

由表2、3 可知，在586 份樣本中分別隨機抽取20 份樣本，經檢測YN PPRV C-ELISA 試劑盒、ID VET 試劑盒重復試驗結果和初次檢測結果一致。

3 討論

小反芻獸疫屬于高度接觸性傳染病，是我國出入境動物必檢的動物疫病檢測項目。統計顯示，初次爆發流行小反芻獸疫的動物群中死亡率可達50%～80%[5]，可見小反芻獸疫的破壞性。我國首次出現小反芻獸疫是在2007 年，首發于西藏地區，而2008 年和2010 年，西藏局部地區均有小反芻獸疫流行，在2013 年新疆部分地區出現小反芻獸疫，此后，其在全國快速擴散，至2014 年全國多數省份均出現小反芻獸疫。近些年來，我國一直表現出小反芻獸疫點發或散發的特點[6]。

現階段，控制、凈化小反芻獸疫是我國動物防疫工作的一個重點。國內現階段對小反芻獸疫病毒檢驗的方法相對單一，診斷試劑類型較少，可選用的診斷試劑盒較少[7,8]，而國外雖然有許多已成熟檢測試劑盒，但其價格較高，購買用時較長，有時難以滿足動物防疫工作需求。因此，近年來，許多地區都在嘗試自主研發小反芻獸疫病毒C-ELISA 檢測試劑盒。

表1 血清樣本檢測結果分析[單位：n（%）]

表2 YN PPRV C-ELISA 試劑盒重復檢測結果[單位：n（%）]

表3 ID VET 試劑盒重復檢測結果[單位：n（%）]

北海市在動物疫病防控工作中對小反芻獸疫病毒C-ELISA檢測試劑盒的需求較大，近年來應用較多的試劑盒為YN PPRV C-ELISA、ID VET 兩種試劑盒。試劑盒的檢測原理為試劑盒制作過程中，親和層析純化原核表達N 蛋白是包被抗原，是將活性單抗1A7 阻斷，實施HRP 標記，為酶標二抗，對各反應條件進行優化，形成該病毒抗體阻斷的ELISA 檢測法[9]。為驗證這兩種試劑盒的準確性及實用價值，本研究將YN PPRV CELISA 試劑盒與ID VET 試劑盒的檢測結果進行對比。經分析發現，YN PPRV C-ELISA 試劑盒、ID VET 試劑盒對586 份血清樣本的檢測結果差異不顯著（＞0.05）。從這一結果可以看出，在對小反芻獸疫病毒檢測時，YN PPRV C-ELISA 試劑盒的檢查結果和ID VET 試劑盒十分接近，表明自主研發的檢測試劑盒效能良好。與ID VET 試劑盒相比，YN PPRV C-ELISA試劑盒的價格大幅下降，且可小量采購，能滿足動物疫病日常防控的需求，應用價值顯著。

為進一步驗證YN PPRV C-ELISA 試劑盒的準確性，本研究還對其可重復性展開分析。重復性試驗發現，YN PPRV CELISA 試劑盒、ID VET 試劑盒重復檢測與初次檢測的結果均保持一致，重復性良好。由此可見，YN PPRV C-ELISA 試劑盒的檢測結果穩定，可靠性強。另外，這一檢測試劑盒操作更簡便，對實驗條件的要求相對較低，無需在嚴格無菌條件下操作，且具有較高的自動化程度，因此，在動物疫病防控中可將這一試劑盒用作大規模血清樣品檢測。

總而言之，YN PPRV C-ELISA 試劑盒、ID VET 試劑盒對小反芻獸疫病毒的檢測結果十分接近，YN PPRV C-ELISA 試劑盒費用較為低廉，值得在動物檢疫工作中推廣。