一例鴨混合感染的細(xì)菌分離鑒定與藥敏分析

蓋小君 柴世慶 李玉杰 張棟 邢林林*

（1，山東省煙臺(tái)市動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心 264000；2，山東省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心 250010）

肺炎克雷伯氏菌為革蘭氏陰性短粗桿菌，有莢膜，無芽孢，兼性厭氧菌，主要寄生于動(dòng)物和人的呼吸道、腸道及水和谷物等處，為條件致病菌，發(fā)病無季節(jié)性，常呈地方性流行，亦有散發(fā)，主要病變有肺炎及其他器官化膿性病[1]，肺炎克雷伯菌是一種重要的腸桿菌科，可引起多種疾病，并且抗生素耐藥性日益嚴(yán)峻。大腸桿菌為革蘭氏陰性無芽孢的直桿菌，兩端鈍圓，主要寄生在人和動(dòng)物的腸道內(nèi)，鴨大腸桿菌病是一種急性敗血性傳染病，各日齡的鴨均易感染，以2～6 周齡雛鴨群多發(fā)。葡萄球菌是革蘭氏陽性菌，不形成芽孢和莢膜，呈葡萄串狀排列，該菌在自然環(huán)境中廣泛存在，多種動(dòng)物及人均易感，鴨和鵝一般是由于璞或趾被劃破而感染，急性病例主要癥狀是跗、脛和趾關(guān)節(jié)發(fā)生炎性腫脹，也常見結(jié)膜炎和腹瀉。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

熒光定量PCR 儀、禽流感病毒熒光定量PCR 試劑盒、革蘭氏染色液、梅里埃生化及藥敏儀。

1.2 臨床癥狀

2020 年3 月6 日接到濰坊某肉鴨養(yǎng)殖場(chǎng)樣品，品種為櫻桃谷肉鴨，發(fā)病初期個(gè)別鴨子瘸腿，厭食，飲水量增加，眼角有分泌物，病程2～3d 死亡。使用阿莫西林、磺胺嘧啶鈉+黃芪多糖混合飲水后效果不明顯。繼而大群采食量下降，咳嗽，甩脖，腫頭現(xiàn)象明顯增多，拉稀。死亡數(shù)量增加，300 只/d，發(fā)病10d。該養(yǎng)殖場(chǎng)養(yǎng)殖方式為網(wǎng)上飼養(yǎng)，養(yǎng)殖規(guī)模30000 只。

1.3 剖檢病變

肝周炎、腹膜炎、氣囊炎,肝臟輕微腫脹，膽囊充盈，小腸黏膜脫落，內(nèi)包有大量黏液，腸壁變薄，盲腸扁桃體腫脹，直腸末端彌漫性出血。喉頭充血，并有黏液。氣管環(huán)出血，肺臟水腫，氣囊渾濁。心肌肥大，心包積液少量增多。病毒檢測(cè)選取病鴨的肝臟、淋巴結(jié)、脾臟、氣管等樣品送至分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)，通過核酸提取儀提取核酸，根據(jù)檢測(cè)試劑盒的具體操作步驟，對(duì)于提取的核酸進(jìn)行熒光PCR 檢測(cè)。

1.4 細(xì)菌分離鑒定及藥敏分析

在無菌環(huán)境下，用接種環(huán)蘸取病料于培養(yǎng)皿中劃線培養(yǎng)，挑出培養(yǎng)出的菌落進(jìn)行革蘭氏染色，使用顯微鏡觀察細(xì)菌形態(tài)。挑取單菌落，在瓊脂培養(yǎng)基上進(jìn)行純化培養(yǎng)，用棉棒挑取純化后的單菌落制備0.5～0.63Mc 濃度的菌懸液，根據(jù)儀器操作指南，將菌懸液、鑒定卡片和藥敏卡片分別做好標(biāo)記，裝載上機(jī)，5～18h 后讀取結(jié)果。

2 結(jié)果

2.1 病毒學(xué)檢測(cè)結(jié)果

經(jīng)過病毒熒光PCR 檢測(cè)，病料中禽流感病毒、鴨瘟病毒、鴨黃病毒、副黏病毒未檢出。

2.2 細(xì)菌鏡檢結(jié)果

革蘭氏染色后油鏡下觀察分離菌株，顯示為兩種陰性桿菌，一種陽性球菌。

2.3 細(xì)菌鑒定及藥敏結(jié)果

選取GN 革蘭氏陰性桿菌鑒定卡、GN13 革蘭氏陰性桿菌藥敏卡和GP 革蘭氏陽性球菌鑒定卡片和GP67 革蘭氏陽性球菌藥敏卡片，裝機(jī)檢測(cè)，經(jīng)過鑒定感染細(xì)菌為大腸桿菌、葡萄球菌和肺炎克雷伯氏菌。篩選的敏感抗生素主要是頭孢噻賽肟鈉、羅紅霉素、替米考星、慶大霉素、多西環(huán)素、粘桿菌素、呋喃唑酮。

2.4 治療措施

（1）保持鴨舍通風(fēng)、干燥，加強(qiáng)舍內(nèi)消毒。保持鴨舍空氣流通，飼養(yǎng)網(wǎng)面干燥，及時(shí)清理病死鴨。每日分別用百毒殺、戊二醛帶鴨消毒一次。

（2）參照藥敏試驗(yàn)結(jié)果對(duì)癥治療。飲水中添加替米考星（1g 兌水20kg）、粘桿菌素（1g 兌水20kg）、雙黃連口服液混合飲水；發(fā)病初期癱瘓的鴨子肌肉注射慶大霉素0.2ml/kg。

（3）治療3d 后鴨群采食量上升，精神狀態(tài)明顯好轉(zhuǎn)，死亡數(shù)量有每天死亡200 只/d，降至10 只/d 左右。

3 討論

隨著我國(guó)養(yǎng)殖業(yè)逐步發(fā)展，養(yǎng)殖環(huán)境也復(fù)雜多樣，如北方肉鴨養(yǎng)殖多為地面籠養(yǎng)，飼養(yǎng)密度大，空氣流通不暢，并且養(yǎng)殖人員在科學(xué)管理、科學(xué)養(yǎng)殖方面的意識(shí)不強(qiáng)或知識(shí)缺乏，導(dǎo)致出現(xiàn)混合感染的概率增加，大大阻礙了我國(guó)鴨養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。另外，由于大量使用抗生素，導(dǎo)致抗生素耐藥情況日趨明顯，普通抗生素藥物殺滅細(xì)菌的效力大大減弱，細(xì)菌耐藥性已成為全球矚目的重要問題。2019 年，F(xiàn)an Yang 等從河南省的醫(yī)院和4 種動(dòng)物中共采集了189 株非重復(fù)性肺炎克雷伯菌，189株肺炎克雷伯菌分離株對(duì)15 種抗生素的耐藥率在11.6%～77.8%之間。在豬中檢測(cè)到的藥耐藥率最高，為93.6%，其次是人（90.4%）、雞（88.9%），牛（52.0%）和綿羊（50.0%）[2]。肺炎克雷伯菌的耐藥性在亞洲是一個(gè)明顯的現(xiàn)存危險(xiǎn)，需要對(duì)此進(jìn)行強(qiáng)有力的監(jiān)測(cè)，以遏制這種威脅。對(duì)于公共衛(wèi)生部門來說，監(jiān)測(cè)和報(bào)告抗微生物菌株的變化非常重要[3]。

因此，在養(yǎng)殖過程中，首先應(yīng)建立科學(xué)合理的生物安全措施[4]，生物安全至關(guān)重要，是防止外來動(dòng)物疫病的重要屏障，根據(jù)本場(chǎng)情況制定科學(xué)合理的免疫程序，可減少發(fā)病概率，提高產(chǎn)能。另外，應(yīng)定期對(duì)畜舍進(jìn)行衛(wèi)生清潔和消毒，這是防制動(dòng)物疫病的重要手段，鴨群應(yīng)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，提供充足的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，注意環(huán)境變化，防止因環(huán)境影響，降低鴨群抵抗力。