雞場(chǎng)沙門氏菌分離鑒定及藥敏試驗(yàn)

乜英青

（青海省貴德縣農(nóng)畜產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)檢測(cè)中心 811799）

沙門氏菌為腸桿菌科革蘭氏陰性桿菌，廣泛存在于人和動(dòng)物腸道內(nèi)，是一種人畜共患性致病菌，嚴(yán)重威脅食品安全，國(guó)際獸疫局將其定為B 類傳染病。雞群感染沙門氏菌后可引發(fā)雞白痢、雞傷寒和禽副傷寒等疾病，且可通過垂直感染影響產(chǎn)蛋率和雛雞存活率。隨著我國(guó)養(yǎng)雞業(yè)的現(xiàn)代化和規(guī)模化發(fā)展，雞群免疫力逐步下降，依賴疫苗免疫或抗生素藥物來防治，雖然抗生素能有效控制禽沙門氏菌，但由于藥物使用不當(dāng)造成菌株耐藥性越來越嚴(yán)重。本文對(duì)貴德縣青源土雞養(yǎng)殖場(chǎng)沙門氏菌進(jìn)行分離鑒定，并對(duì)分離到的菌株進(jìn)行多種藥物的敏感性試驗(yàn)，為當(dāng)?shù)仉u場(chǎng)抗菌藥物的合理使用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 培養(yǎng)基

營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，SS 瓊脂培養(yǎng)基，三糖鐵瓊脂，尿素酶生化鑒定管，蛋白胨水培養(yǎng)基，賴氨酸脫羧酶肉湯和氨基酸脫羧酶對(duì)照生化鑒定管均購(gòu)自青島高科技工業(yè)園海博生物技術(shù)有限公司。

1.1.2 病料來源

試驗(yàn)所用菌株來自貴德縣青源土雞養(yǎng)殖場(chǎng)所飼養(yǎng)的病死雞，取其病料組織分離菌株共6 株。

1.1.3 試驗(yàn)藥物

氧氟沙星、慶大霉素、阿莫西林、頭孢唑啉、頭孢噻肟、頭孢拉定、恩諾沙星、阿米卡星、多西環(huán)素、卡那霉素、林可霉素、磷霉素、呋喃唑酮、復(fù)方新諾明共14 種藥敏片均購(gòu)自杭州濱和微生物試劑有限公司。

1.2 試驗(yàn)及方法

1.2.1 沙門氏菌分離試驗(yàn)

在實(shí)驗(yàn)室無菌條件下取病料組織接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和SS 瓊脂培養(yǎng)基內(nèi)，在37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18～22h。在超凈臺(tái)內(nèi)挑取0.5mm 單菌落進(jìn)行革蘭氏染色，顯微鏡下觀察，挑取單個(gè)革蘭氏陰性菌落。

1.2.2 沙門氏菌的鑒定試驗(yàn)

將分離到的革蘭氏陰性短桿菌株進(jìn)行編號(hào)，編名1～6 號(hào)，將這6 株菌株分別進(jìn)行三糖鐵試驗(yàn)（將待檢菌株接種于三糖鐵瓊脂內(nèi)，在37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18～24h 后觀察細(xì)菌形態(tài)和產(chǎn)氣情況）、尿素酶試驗(yàn)（將待檢菌株接種于尿素酶生化鑒定管內(nèi)，在37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18～24h 后觀察試管顏色變化，若變紅色或粉紅色為陽性，若顏色不變或變黃色為陰性）、靛基質(zhì)（吲哚）試驗(yàn)（將待檢菌株接種于蛋白胨水培養(yǎng)基內(nèi)，在37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18～24h 后沿試管壁滴加數(shù)滴吲哚試劑，觀察顏色變化，若變紅色為陽性，呈黃色為陰性）、賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)（將待檢菌株分別接種于賴氨酸脫羧酶肉湯和氨基酸脫羧酶對(duì)照生化鑒定管內(nèi)，在37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18～24h 后觀察培養(yǎng)基和試管顏色變化，若賴氨酸脫羧酶肉湯顏色變紫，而氨基酸脫羧酶對(duì)照顏色變黃為陽性，若兩者均變黃為陰性）。

1.2.3 沙門氏菌的藥敏試驗(yàn)

根據(jù)世界衛(wèi)生組織建議的Kirby-Bauer 紙片法對(duì)分離到的6株沙門氏菌進(jìn)行抗菌藥物敏感性試驗(yàn)。用滅菌棒將LB 培養(yǎng)物均勻涂布于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板內(nèi)，室溫放置5min 后將藥敏紙片平貼于瓊脂表面，在37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)16～18h 后觀察抑菌圈直徑。判定結(jié)果為抑菌環(huán)直徑d＞15mm 為高敏感度，抑菌環(huán)直徑10mm＜d＜15mm 為中度敏感，抑菌環(huán)直徑d＜10mm 為耐藥。

2 結(jié)果與分析

2.1 沙門氏菌的分離鑒定結(jié)果

2.1.1 培養(yǎng)特性

將病料組織接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和SS 瓊脂培養(yǎng)基內(nèi)，于37℃培養(yǎng)18～22h 后發(fā)現(xiàn)營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板表面有許多單一，無色透明或半透明的針尖大小菌落，表面光滑、邊緣整齊。SS 瓊脂培養(yǎng)基表面呈灰色或中心呈黑色的圓形菌落。挑取單菌落進(jìn)行革蘭氏染色，于光學(xué)顯微鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)菌株為革蘭氏陰性桿菌，兩端鈍圓，無芽孢，符合沙門氏菌的生長(zhǎng)特性。

2.1.2 生化鑒定結(jié)果

由表1 可知，將分離到的6 株沙門氏菌進(jìn)行生化鑒定試驗(yàn)，結(jié)果表明，在三糖鐵試驗(yàn)中，培養(yǎng)基斜面變紅，底層反應(yīng)呈陽性，產(chǎn)酸，產(chǎn)硫化氫，該結(jié)果提示菌株均為沙門氏菌；在尿素酶試驗(yàn)中，試管顏色不變或呈黃色，均顯示為陰性；在靛基質(zhì)（吲哚）試驗(yàn)中，結(jié)果也均為陰性；在賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)中，結(jié)果均為陽性。

2.2 沙門氏菌的藥物敏感性試驗(yàn)

由表2 可知，分離到的6 株沙門氏菌對(duì)阿莫西林、恩諾沙星、卡那霉素、林可霉素和磷霉素的敏感度率為0，表明該雞場(chǎng)的沙門氏菌對(duì)這5 種藥物的耐藥性較高，為多重耐藥。而該雞場(chǎng)的沙門氏菌對(duì)頭孢噻肟、阿米卡星和多西環(huán)素的敏感率均超過80%，因此，上述幾種藥物可有效治療該雞場(chǎng)沙門氏菌。

表1 分離到的6 株沙門氏菌的生化鑒定試驗(yàn)結(jié)果

表2 分離到的6 株沙門氏菌的藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

本研究對(duì)分離鑒定到的6 株沙門氏菌進(jìn)行14 種藥物敏感性試驗(yàn)。結(jié)果顯示，該區(qū)域雞場(chǎng)沙門氏菌對(duì)頭孢噻肟、阿米卡星和多西環(huán)素3 種藥物具有高度敏感，而對(duì)阿莫西林、恩諾沙星、卡那霉素、林可霉素和磷霉素具有不同程度的耐藥性。張麗嬌（2020）對(duì)煙臺(tái)市肉雞養(yǎng)殖場(chǎng)的病雞進(jìn)行沙門氏菌分離鑒定和藥敏試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，分離到的沙門氏菌對(duì)頭孢噻呋和甲砜霉素高度敏感，對(duì)恩諾沙星和環(huán)丙沙星具有一定程度的耐藥性[1]。張阿娥（2018）對(duì)洛江區(qū)部分養(yǎng)殖場(chǎng)的病雞進(jìn)行沙門氏菌分離鑒定和藥敏試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，分離到的沙門氏菌對(duì)阿米卡星和恩諾沙星最為敏感，而阿莫西林和林可霉素等藥物敏感范圍較寬[2]。王曉藝等（2017）對(duì)山東省部分市縣養(yǎng)殖場(chǎng)的病雞進(jìn)行沙門氏菌分離鑒定和藥敏試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，分離到的沙門氏菌對(duì)多西環(huán)素最為敏感，而對(duì)阿莫西林、林可霉素和替米考星具有耐藥性[3]。李強(qiáng)（2017）對(duì)宿豫區(qū)某散養(yǎng)戶雞場(chǎng)的病雞進(jìn)行沙門氏菌分離鑒定和藥敏試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，分離到的沙門氏菌對(duì)氧氟沙星、頭孢曲松和鏈霉素最為敏感[4]。上述試驗(yàn)結(jié)果不一致的原因與不同地區(qū)流行菌株不同及所使用的的抗菌藥物種類不同有關(guān)。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，貴德縣青源土雞養(yǎng)殖場(chǎng)雞源沙門氏菌對(duì)阿莫西林、恩諾沙星、卡那霉素、林可霉素和磷霉素的耐藥性較強(qiáng)，說明之前可能存在使用量過多或?yàn)E用的現(xiàn)象。因此，筆者建議青海省貴德縣在治療禽沙門氏菌病時(shí)需要結(jié)合本地區(qū)藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果再合理選擇抗生素進(jìn)行治療。為延緩細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性和緩解細(xì)菌的選擇壓力，雞場(chǎng)可以交叉或輪換使用抗生素。在藥物使用的同時(shí)需要對(duì)雞舍定期消毒，提高雞舍清潔度，定期監(jiān)測(cè)沙門氏菌的耐藥性，為合理選擇和使用抗菌藥物提供參考依據(jù)。