CK7、P16、SCC-Ag對宮頸鱗狀上皮內病變的診斷評價

曹慶營 李美艷 牛廣旭 韓新彥

(1.河北工程大學臨床醫學院；2.邯鄲市中心醫院婦一科；3.邯鄲市中心醫院病理科, 河北 邯鄲 056008)

子宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤，在我國宮頸癌發生率正以每年2%～3%的速度持續增長[1]。宮頸鱗狀上皮內病變(squamous intraepithelial lesion, SIL)與子宮頸癌密切相關，六成以上低級別宮頸鱗狀上皮內病變(low grade cervical squamous intraepithelial lesions, LSIL)可自行消退，但高級別宮頸鱗狀上皮內病變(high grade cervical squamous intraepithelial lesions, HSIL)具有癌變潛能，其中有約20%可進展為浸潤癌，被視為癌前病變[2]。實踐和研究表明，HSIL需要宮頸錐形切除，LSIL只需隨訪即可。然而，并不是所有的LSIL均可達到安全隨診，如何區分LSIL中有進展為HSIL風險的病例，尚無可靠生物標記物[3]。相關研究指出，細胞角蛋白7(cytokeratin 7, CK7)在多種腫瘤組織中高表達[4]，抑癌基因P16參與細胞增殖調控，與多種腫瘤的形成相關[5-6]，鱗狀細胞癌抗原(squamous cell carcinoma antigen, SCC-Ag)為子宮頸癌輔助診斷常用腫瘤標志物[1]，三者均與腫瘤的侵襲性密切相關，本文旨在探討三者單獨及聯合檢測對SIL的診斷價值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2018年8月～2019年12月邯鄲市中心醫院婦一科收治的264例患者為研究對象，根據TCT及HPV檢查結果分為對照組、LSIL組和HSIL組三組。其中炎癥患者77例作為對照組、LSIL患者92例、HSIL患者95例。患者年齡范圍20～68歲，中位年齡38歲，平均年齡(36.93±5.58)歲。收集標本要求：檢查前3天內不做陰道沖洗，不使用陰道內藥物，24小時內禁止性行為，并在非經期檢查。宮頸活檢：對TCT檢查為ASCUS及以上病變或高危HPV檢測為陽性的婦女均行陰道鏡檢查，宮頸上皮如果見到醋酸白色上皮、點狀血管、鑲嵌、異型血管及碘試驗陰性區，在懷疑病變區域進行活檢，所取組織行常規石蠟切片檢查。宮頸環形電刀切除術：患者取膀胱截石位，常規消毒、鋪巾，陰道鏡定位后，根據病變程度選擇電切環，由2名高年資病理醫生復習病理切片。

1.2 實驗方法和結果判定 ①采用化學發光免疫分析法檢測血清SCC-Ag水平。抽取入選者清晨空腹靜脈血大約3～5 mL，采用3500 r/min速率離心10 min，然后分離血清，應用電化學發光分析儀(型號：MAGLUMl4000)進行血清SCC-Ag水平檢測，試劑來自羅氏公司原裝配套試劑，所有檢測步驟均需嚴格參照試劑盒說明書(SCC-Ag陽性標準：>2.5 ng/mL)。實驗結果提示，SCC-Ag陽性44例，陰性220例。②采用免疫組織化學SP法檢測CK7和P16蛋白的表達情況。標本檢測：主要試劑為鼠抗人CK7單克隆抗體，PAS染色試劑盒購自美國Sigma公司，免疫組織化學SP試劑盒、PBS緩沖液、DAB試劑盒均購自福州邁新生物技術公司，CK7一抗購自廣州安必平公司，各實驗步驟均嚴格按相應試劑的說明書進行操作。免疫組化SP法步驟和判定評分標準參見文獻[7]，判定標準：胞漿和/或胞膜著色為CK7陽性；而斑塊著色和/或未著色被認為是CK7陰性；鱗狀上皮基底和基底旁細胞層出現連續性棕黃色著色，伴或不伴有表層細胞著色，判定為P16陽性；點狀、灶狀著色或無著色判定為陰性。免疫組化染色結果提示，CK7陽性101例，陰性163例；P16陽性140例，陰性124例。

1.3 統計學分析 采用統計軟件IBM SPSS19.0對數據進行計算處理，各計數資料以率(%)表示，組間比較采用2檢驗，用Pearson法和連續校正公式來計算。采用列聯系數進行CK7、SCC-Ag、P16三者之間的相關性分析。SIL的診斷效能評價指標采用靈敏度、特異度、陽性預測值、陰性預測值、準確度和約登指數表示(%)，以P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 CK7、SCC-Ag、P16及其聯合在各組內膜組織中表達的比較 本實驗應用化學發光免疫分析法和免疫組化SP法，檢測血清SCC-Ag水平和CK7、P16蛋白表達，包含單項檢測、兩兩配對檢測及三者聯合檢測共7組，多項觀察指標在各實驗組中的表達情況。其中，HSIL組各指標及其組合的陽性表達率均明顯高于LSIL及對照組，差異均有統計學意義(P均<0.05)。見圖1、表1。

2.2 CK7、SCC-Ag和P16在各組中的相關關系 應用列聯系數對CK7、SCC-Ag、P16蛋白三者在各組中表達情況進行相關性分析，結果顯示CK7與SCC-Ag呈正相關(r=0.204，P<0.001)，CK7與P16表達呈正相關(r=0.437，P<0.001)，SCC-Ag與P16表達呈正相關(r=0.350，P<0.001)，三者均呈正相關關系，表明三者在SIL的發生、發展中具有明顯的正向協同效應(r均為正數；P均<0.05)，見表2～4。

圖1 SP法檢測CK7、P16蛋白在LSIL及HSIL中的表達(200×)

表1 CK7、P16、SCC-Ag及其聯合在各組中陽性率比較(×10-2)

表2 CK7蛋白和SCC-Ag表達的關系

2.3 單獨或聯合檢測CK7、SCC-Ag和P16對SIL診斷效能分析 以宮頸活檢病理診斷為金標準，SCC-Ag和CK7、P16蛋白兩兩聯合或三者聯合檢測中任一項為陽性即視為檢測結果陽性，兩兩配對檢測中兩者均為陰性或三者聯合檢測中三者均為陰性視為檢測結果陰性，診斷效能分析結果見表5。

表3 CK7和P16蛋白表達的關系

表4 P16蛋白和SCC-Ag表達的關系

表5 CK7、SCC-Ag、P16蛋白及其聯合檢測的診斷效能比較(×10-2)

3 討論

宮頸癌的發生是一個多因素多階段的長期過程[9]，隨著篩查覆蓋面的越來越廣，宮頸疾病的檢出率也越來越高，目前宮頸病變的診斷方法主要依靠病理診斷，而病理診斷過程中摻雜了很多主觀因素[10]。選擇可以早期診斷、準確性高、結果客觀、可重復性高的宮頸癌診斷方法在臨床治療當中具有十分重要的意義[11]，因此篩查出高風險人群，找出HSIL患者并給予及時的干預才是宮頸癌防治的關鍵所在[12]。相關基因及蛋白在原位組織特異性的過表達，不僅為研究疾病發生發展的機制提供了新思路，也為病變的診斷及治療提供特性強的生物標記與靶點[5]。

細胞角蛋白(CK)是一種細胞中間絲蛋白，存在于細胞質中的細胞骨架蛋白，在細胞分化的不同階段及不同類型的上皮細胞表達不同[2,13]。CK7廣泛表達于多種腫瘤中，常陽性表達[14]，可作為宮頸鱗柱交界標記物[13]，是宮頸疾病進展的標志物，在炎癥和腫瘤中均扮演著重要的角色[2]。CK7陽性的LSIL更易進展為HSIL[3]。本研究中CK7蛋白染色結果顯示，CK7在對照組、LSIL組和HSIL組中的陽性表達率分別是10.39%、31.52%、67.37%，可見隨著宮頸病變級別的升高，其表達率逐漸升高。這與潘嬙微、賈帥[2-3]等研究結果一致。

SCC-Ag為子宮頸鱗狀細胞癌組織中分離出的一種糖蛋白，存在于鱗狀細胞癌的胞漿內腫瘤相關抗原TA-4亞段[15]，其血清水平檢測常用于多種器官鱗狀細胞癌診斷[15-16]。本研究中檢測血清SCC-Ag結果顯示，對照組、LSIL組和HSIL組SCC-Ag水平陽性率分別為6.49%、15.22%、26.32%，HSIL組中血清SCC-Ag表達水平陽性的比率顯著增高，SIL組較其他組表達差異有統計學意義(2=9.948，P=0.002)。這與王元元[1]等的研究結果一致。提示高SCC-Ag表達水平可能促進SIL的發生發展，SCC-Ag的檢測可能成為臨床預測SIL的一個指標。

P16 是細胞周期素依賴性激酶(CDK) 的抑制蛋白[17]，HSIL中p16蛋白呈過表達[18]。臨床上P16蛋白表達是隨著炎癥病變程度的加重表達逐漸增強[19]。第4版WHO女性腫瘤分類中，P16推薦用于SIL分級診斷。P16被認為是CIN進展最具價值的指標[18,20]。本實驗中P16蛋白染色表達結果顯示，P16在對照組、LSIL組和HSIL組中，陽性表達率分別是5.19%、48.91%、95.79%，可見隨著宮頸病變級別的升高，其陽性表達程度逐漸增高。P16在HSIL組較其他組表達差異有統計學意義(2=108.933，P<0.05)，提示P16的高表達和SIL的形成發展過程密切相關，這與董花[5]等的研究結果一致。

本研究分析統計CK7、SCC-Ag、P16三者的相關性結果顯示，CK7蛋白表達陽性的SIL中P16蛋白表達陽性率更高，CK7蛋白高表達的SIL，更容易轉化為宮頸癌前病變，預后更差。與SCC-Ag及P16蛋白一起與SIL病情進展聯系緊密，提示三者可能參與了SIL細胞增殖調控，在SIL的發生、發展和進展至更高級別SIL過程中起到重要作用。三者具有明顯的正向協同效應，可共同作為SIL診斷的標志物，為尋求SIL生物學檢測排查新方法提供理論依據。提示聯合觀察CK7、SCC-Ag和P16各項指標能夠為HSIL的鑒別提供較為準確的指導，與魏杰[15]等報道一致。

多指標聯合檢測是提高病理診斷準確性的有效方法，本文研究了CK7、SCC-Ag和P16蛋白單項、兩兩配對及三項聯合檢測對SIL的診斷價值，結果顯示，各指標進行單項檢測時，P16的靈敏度、準確度高于CK7和SCC-Ag，說明P16較其他腫瘤標志物具有較強的優勢。進一步兩兩聯合分別檢測靈敏度、陰性預測值和約登指數，較單項檢測均有明顯升高。CK7+SCC-Ag+P16三指標聯合檢測時診斷效能達到被測7組中的最高：靈敏度98.95%，陰性預測值99.00%，約登指數57.53%，明顯高于各單項及兩兩配對SIL檢測的診斷效能，三者聯合檢測在SIL診斷中更有優勢。這反映出對HSIL組的受試者而言，聯合檢測實驗結果為陽性的檢出率相當可信，對非HSIL組的受試者實驗結果檢測為陰性的結果相當可信。

4 結論

CK7、P16及SCC-Ag在LSIL進展中是有意義的參考指標，三者具有一致性、協同性，其聯合檢測可作為SIL診斷的價值指標之一，能有效指導患者臨床診治。