不同產地不同采集期滇桂艾納香中總黃酮及原兒茶酸的含量測定

周江煜，侯小濤，3，韋宏官，戴航

（1.廣西中醫藥大學，廣西南寧530200；2.廣西萬壽堂藥業有限公司，廣西南寧530219；3.廣西中藥藥效研究重點實驗室，廣西南寧530200）

滇桂艾納香為菊科植物假東風草Blumea riparia（Bl.）DC.的干燥全草，主要產于廣西西南部和云南東南部［1］，為廣西壯瑤族民間草藥。其味淡，性平，具有活血化瘀、止血調經的功效［2-4］，在廣西尤其是百色地區有較長的使用歷史，有較好的開發利用前景。滇桂艾納香的主要化學成分有黃酮類、原兒茶酸、原兒茶醛、綠原酸、咖啡酸等［5-8］。本研究分別采用紫外分光光度法和高效液相色譜法對不同產地不同收集期滇桂艾納香的總黃酮及原兒茶酸含量進行分析，為滇桂艾納香的采收和進一步開發利用提供依據。

1 實驗材料

1.1 藥材滇桂艾納香藥材采自廣西百色和河池，由廣西中醫藥大學郭敏副教授鑒定為菊科植物滇桂艾納香Blumea riparia（Bl.）DC.的干燥全草。

1.2 儀器島津UV-2550紫外分光光度計；Agilent 1100高效液相色譜儀，包括G1311A系列四元梯度泵，Agilent VWD檢測器，手動進樣器，柱溫箱，Agilent 1100色譜工作站；SB 2200型超聲波清洗儀（上海）；賽多利斯BP211D電子天平（德國）。

1.3 試劑蘆丁對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：100080-200306，供含量測定用）；原兒茶酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110809-200503，供含量測定用）。亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、甲醇、乙醇均為分析純。

2 方法與結果

2.1 總黃酮的含量測定

2.1.1 對照品溶液的制備精密稱取蘆丁對照品23.16 mg，加60%乙醇配制為100 ml溶液，置水浴中微熱使溶解，放冷，制得濃度為0.115 8 mg/ml的蘆丁對照品溶液。

2.1.2 供試品溶液的制備將滇桂艾納香藥材干燥、粉粹，過3號篩，準確稱取粉末各約0.5 g至錐形瓶中，加50%乙醇50 ml，稱定重量。超聲提取45 min，冷卻，補重，搖勻，過濾，取續濾液作為供試品溶液。

2.1.3 測定波長的選擇取蘆丁對照品溶液0.5 ml，置于10 ml容量瓶中，用30%乙醇補充至5 ml，加入0.3 ml的5%NaNO2溶 液，放 置5 min；加 入0.3 ml的10%Al（NO3）3溶液，放置6 min；加入2.0 ml的4%NaOH溶液，混勻后用30%乙醇稀釋至刻度，靜置10 min。在紫外分光光度計下進行全波長掃描，在510 nm處有最大吸收值，因此確定總黃酮的測定波長為510 nm。

2.1.4 標準曲線的繪制精密吸取蘆丁對照品溶液0.0 ml、1.0 ml、2.0 ml、3.0 ml、4.0 ml、5.0 ml，分別置于10 ml量瓶中，各加30%乙醇使成5.0 ml，精密加入0.3 ml亞硝酸鈉溶液（1→20），搖勻，放置6 min；再加入0.3 ml硝酸鋁溶液（1→10），搖勻，放置6 min；加入氫氧化鈉溶液4.0 ml，再加水至刻度，搖勻，放置15 min。在510 nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。得標準曲線方程：Y=0.012 3X-0.001 2（r=0.999 9），表明線性關系良好。

2.1.5 精密度試驗取10月份那坡縣采收的滇桂艾納香藥材，按“2.1.2”項下方法制備樣品溶液，再按“2.1.3”項下方法處理，于510 nm處連續5次測定吸光度，代入公式計算總黃酮含量，結果RSD為1.8%（n=5），表明該法精密度良好。

2.1.6 重復性試驗取同一批藥材6份，按“2.1.2”項下方法制備樣品溶液，再按“2.1.3”項下方法分別測定吸光度，代入公式計算總黃酮含量，結果RSD=1.9%（n=6），表明方法的重復性良好。

2.1.7 穩定性試驗取同一批藥材，按“2.1.2”項下方法制備樣品溶液，再按“2.1.3”項下方法，在3 h內每隔30 min測定吸光度，代入公式計算總黃酮含量，結果RSD=1.2%（n=6），表明樣品在3 h內穩定性良好。

2.1.8 加樣回收率試驗取已知含量的滇桂艾納香藥材，加入一定量對照品，按“2.1.2”項下方法制備樣品溶液，再按“2.1.3”項下方法處理后測定吸光度，計算加樣回收率，結果總黃酮的平均回收率為101.8%，RSD=1.4%（n=6），表明加樣回收良好，結果見表1。

表1 總黃酮加樣回收試驗結果 （n=6）

2.1.9 總黃酮含量測定取不同產地不同采集期的滇桂艾納香藥材，分別按“2.1.2”項下方法制備樣品溶液。精確吸取0.5 ml樣品溶液，按“2.1.3”項下方法依次進行測定。將測得的吸光度代入回歸方程計算出總黃酮含量，結果見表2。

表2 不同產地不同采集期滇桂艾納香藥材總黃酮的含量測定結果 （mg/g）

2.2原兒茶酸的含量測定參考文獻［9-11］的方法進行測定。

2.2.1 對照品溶液的制備精密稱取原兒茶酸對照品12.51 mg，加甲醇配制成50 ml原兒茶酸對照品溶液，濃度為0.250 2 mg/ml。

2.2.2 供試品溶液的制備將滇桂艾納香藥材干燥、粉粹，過3號篩，取粉末各約0.5 g至錐形瓶中，加50%的乙醇50 ml，稱定重量。超聲提取45 min，冷卻，補足重量，搖勻，過濾，取續濾液作為供試品溶液。

2.2.3 色譜條件色譜柱：Agilent Hypersil ODS Cl8柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：甲醇-水-冰醋酸（10∶89∶1）；檢測波長：256 nm；柱溫：室溫；經測試，樣品峰分離度＞1.5，原兒茶酸理論塔板數＞3 000。

2.2.4 標準曲線的繪制精密稱取12.51 mg原兒茶酸對照品，加甲醇配制成50 ml的對照品貯備液。精密量取上述對照品貯備液1.0 ml，3.0 ml，5.0 ml，10 ml，25 ml，加甲醇分別配制成25 ml對照品溶液（濃度分別為10μg/ml、30μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、250μg/ml），在“2.2.3”項下的色譜條件下，分別進樣5μl進行測定。以原兒茶酸對照品進樣量（μg）為橫坐標（X），峰面積積分值為縱坐標（Y），繪制標準曲線，得回歸方程：Y=5.849 9×103X+48.393 0（r=0.999 4）。結果表明：進樣量在0.05～1.30μg范圍內，原兒茶酸進樣量與峰面積積分值呈良好的線性關系。

2.2.5 精密度試驗取10月份那坡縣采收的滇桂艾納香藥材，按“2.2.2”項下方法制備樣品溶液后進行測定，重復進樣5次，記錄原兒茶酸峰面積比值，結果原兒茶酸的RSD值為1.8%（n=5），表明儀器的精密度良好。

2.2.6 重復性試驗取同一批滇桂艾納香藥材5份，精密稱定，按“2.2.2”項下方法制備樣品溶液后進樣分析，結果原兒茶酸RSD=1.8%（n=5）；表明方法的重復性較好。

2.2.7 穩定性試驗取同一批滇桂艾納香藥材樣品溶液，在放置0 h，2 h，5 h，8 h，10 h，12 h后分別進樣分析，結果原兒茶酸的RSD為1.9%（n=6），表明樣品在12 h內穩定。

2.2.8 加樣回收率試驗取已知含量的滇桂艾納香藥材樣品，加入一定量對照品，按“2.2.2”項下方法制備樣品溶液后進樣分析，測得原兒茶酸的平均回收率為98.5%，RSD=2.1%（n=6），表明加樣回收良好，結果見表3。

表3 原兒茶酸加樣回收試驗結果 （n=6）

2.2.9 含量測定取不同產地不同采集期的滇桂艾納香，按“2.2.2”項下方法制備樣品溶液。分別精密吸取對照品溶液及供試品溶液各5μl，注入高效液相色譜儀，按“2.2.3”項下方法色譜條件進行測定，以峰面積代入回歸方程計算出原兒茶酸含量，結果見表4。

表4 不同產地不同采集期滇桂艾納香中原兒茶酸的含量測定結果 （μg/g）

3 討論

本實驗對廣西8個不同產地不同采集期滇桂艾納香總黃酮、原兒茶酸進行含量測定，并進行了方法學考察。對比表2、表4中的數據，滇桂艾納香不同產地總黃酮、原兒茶酸的含量在不同月份差異較大：10月份百色那坡縣采收的滇桂艾納香總黃酮的含量最高，11月百色田林縣采收的滇桂艾納香原兒茶酸含量最高。

綜合考慮藥材中總黃酮、原兒茶酸的含量，以那坡縣和田林縣10月、11月份滇桂艾納香中含量最高。其他生長月份雖然有某種有效成分含量較高，但其他有效成分含量卻偏低。因此，滇桂艾納香藥材的最佳產地為百色那坡縣和田林縣，最佳采收期為10月、11月。本文的研究可為進一步開發利用滇桂艾納香提供依據。